مقتطفات من Sclerocarya birrea (US8445040B2)

يتعلق الاختراع الحالي بشكل عام بالمستخلصات القابلة للذوبان في الماء التي تم الحصول عليها من Sclerocarya بيري الفاكهة واستخداماتها.

المارولا (Sclerocarya بيريا ، الفصيلة: Anacardiaceae) هي شجرة نفضية متوسطة إلى كبيرة الحجم ذات جذع منتصب وتاج مستدير. يستخدم النبات كمصدر للغذاء اليوم كما كان يستخدم في العصور القديمة. فاكهة المارولا صالحة للأكل ، وعادة ما تؤكل نيئة أو يتم معالجتها في مجموعة متنوعة من المنتجات الغذائية مثل الجيلي ويتم تخميرها أيضًا في بيرة كحولية ، يعرفها شعب Vhavenda باسم Mukumbi.

تشمل الاستخدامات والتطبيقات الطبية للمارولا استخدام اللحاء والأوراق لعلاج الأمراض المرتبطة بالبكتيريا ومرض السكري [1،2] وكذلك الإسهال كما تم الكشف عنه في نشرة براءات الاختراع الأسترالية رقم. 2000/29790 [3].

المنشور الدولي لا. يكشف طلب رقم WO 03/092634 [4] عن استخدام زيت المارولا في المستحضرات الموضعية لمنع تكون النسيج الندبي على الجلد.

ثبت أن ثمرة المارولا تمتلك قدرة إجمالية متزايدة لمضادات الأكسدة [5] ، ولديها القدرة على تثبيط بيروكسيد الفوسفوليبيد ولديك نشاط تنظيف جذري لأنيون الفوسفور [6]. المنشور الدولي لا. يكشف طلب رقم WO 06/097806 [7] أن أجزاء مختلفة من نبات المارولا مثل اللحاء والأوراق والفاكهة والجذور والبذور تحتوي على مضادات أكسدة كارهة للماء ، والتي يمكن الحصول عليها من النبات عن طريق النقع و / أو الاستخراج.

المنشورات

على الرغم من الإبلاغ عن أن فاكهة المارولا غنية بمضادات الأكسدة ، إلا أنه لم يتم الإبلاغ عن تحضير واستخدام مستخلصات فاكهة المارولا في علاج الأمراض والاضطرابات مثل تصلب الشرايين والأمراض التنكسية العصبية.

تشير النتائج المدهشة ، التي تم الكشف عنها هنا ، إلى أن المستخلصات المحضرة من عصير المارولا ليست مستقرة فقط لفترات طويلة من الزمن ولكن الأهم من ذلك أنها تمتلك فوائد علاجية مختلفة وفي بعض الحالات أفضل من تلك التي يظهرها عصير المارولا غير المعالج. أثبتت مقتطفات الاختراع أنها تؤثر بشكل إيجابي على نسبة الدهون في الدم ، كما يتضح من انخفاض LDL في الدم ، وزيادة HDL في الدم ، وتخفيف الإجهاد التأكسدي في الدم ؛ أثبتت المقتطفات فعاليتها في علاج أضرار الإجهاد التأكسدي وتصلب الشرايين والتنكس العصبي والاضطرابات المرتبطة بذلك.

تعتبر مستخلصات عصير المارولا من الاختراع الحالي فعالة أيضًا في منع التنكس العصبي ، كما يتضح من تأثيرها الوقائي على الخلايا العصبية المعرضة لتلف الجذور الحرة.

يكشف الاختراع الحالي أيضًا عن استخدام مستخلصات عصير المارولا كمضادات للأكسدة لاستخدامها في مجموعة متنوعة من التطبيقات ، على سبيل المثال ، استخدامها في المكملات الغذائية من أجل التوليد ، على سبيل المثال ، تأثير مضاد لتصلب الشرايين في الأشخاص الأصحاء وغير الأصحاء (البشر وغير الصحيين). الحيوانات البشرية) وكعوامل لعلاج أو الوقاية من الأمراض المرتبطة بالتنكس العصبي.

وهكذا ، في أحد جوانب الاختراع الحالي ، يتم توفير مستخلص مشتق من فاكهة المارولا ، باستثناء البذرة ، المستخلص المذكور الذي يتم الحصول عليه من خلال عملية تشتمل على إخضاع العصير الذي تم جمعه من ثمار المارولا إلى الاستخلاص باستخدام واحد أو أكثر من مائي. محلول ومذيب عضوي وخليط منه ، أي للحصول على خلاصة الفوائد البيولوجية المرغوبة من عصير المارولا.

يمكن ترشيح عصير المارولا الذي تم الحصول عليه من ثمار المارولا قبل الاستخلاص لإزالة بقايا الفاكهة مثل بقايا البذور والمواد الأخرى غير القابلة للذوبان. يمكن إجراء الترشيح باستخدام أي طريقة معروفة في الفن لترشيح المشروبات ، مثل ، على سبيل المثال لا الحصر ، ترشيح التراب الدياتومي (DE) والترشيح الغشائي.

في بعض النماذج ، يتم بسترة عصير المارولا الذي تم الحصول عليه من ثمار المارولا قبل الاستخلاص وذلك لإبطاء نمو الميكروبات وهو العصير عن طريق تقليل عدد مسببات الأمراض القابلة للحياة فيه. عادة ، يتم إجراء البسترة عن طريق تعريض العصير لدرجات حرارة أقل من الغليان. في بعض النماذج ، يتم تحقيق البسترة بطريقة أو أكثر من طرق البسترة الأخرى المعروفة في المجال ، على سبيل المثال ، التي يتم التحكم فيها بواسطة وكالات سلامة الأغذية الوطنية (مثل وزارة الزراعة الأمريكية في الولايات المتحدة ووكالة معايير الأغذية في المملكة المتحدة). تتضمن بعض الأمثلة غير المقيدة البسترة ذات درجة الحرارة العالية / الوقت القصير (HTST) ، والبسترة ذات الصلاحية الممتدة (ESL) ، والبسترة ذات درجة الحرارة العالية (UHT أو المعالجة بالحرارة الفائقة) ، والبسترة الدفعية أو بالحوض.

يشير المصطلح "المستخلص" كما هو مستخدم هنا إلى منتج قابل للذوبان في الماء يتم الحصول عليه من أي جزء من فاكهة المارولا أو أي جزء مشتق منها ، باستثناء البذور ، ولكن بما في ذلك واحد أو أكثر من القشرة الخارجية ، والقشرة الداخلية ، والقشرة (القشرة الخارجية السميكة) ، و / أو الجلد (exocarp) ، باستخدام طريقة مختارة من التعبير ، الامتصاص ، النقع ، التجفيد ، التقطير وأي مزيج من عمليتين أو أكثر من هذه العمليات.

يمكن تشكيل المواد المستخرجة ، بشكل منفصل أو مجتمعة ، في أي صيغة مرغوبة بما في ذلك محلول مائي ، مادة صلبة مثل مسحوق جاف ، حبيبات أو حبيبات ، مركز ، على سبيل المثال ، شبه سائل له قوام شراب قد يتم الحصول عليها عن طريق تبخير كل أو كل المحتوى السائل تقريبًا في المستخلص ، أو أي شكل آخر. بشكل عام ، قد تختلف طرق استخراج المواد مع مراعاة ما يقتضيه اختلاف الحال اعتمادًا على عمر فاكهة المارولا ، والنوع الفرعي ، وموسم الحصاد ، ومنطقة النمو ، والمواد المراد استخلاصها ، وثباتها ، وعوامل أخرى معروفة للشخص الماهر في المجال.

في بعض النماذج ، يتم الحصول على مستخلص الاختراع عن طريق ملامسة عصير marula بمحلول مائي للاستخلاص من مكون واحد أو أكثر أو توليفة منها. قد يكون "المحلول المائي" في معظم المصطلحات العامة ماء (في بعض النماذج ماء بتركيزات معدنية طبيعية مختلفة) أو ماء مقطر أو منقى بطريقة أخرى (مقطر أو منقى بأي طريقة أخرى) ، محلول ملح ماء يشتمل على أملاح واحد أو أكثر أو خليط من الماء مع واحد أو أكثر من مذيب قطبي قابل للامتزاج بالماء ، على سبيل المثال ، C₁-ج₄ الكحولات والكيتونات.

في بعض النماذج ، يكون المذيب المائي عبارة عن خليط من الماء وكحول واحد على الأقل. في بعض النماذج الإضافية ، يكون مذيب الماء عبارة عن خليط من الماء والإيثانول ، حيث تكون نسبة الماء: الإيثانول واحدة من 1: 1 ، 1: 2. . . 1: 5. . . 1:10. . . 1: 100. . . 1: 1،000. . . إلخ ، على التوالي ، أو 2: 1 ، 3: 1. . . 5: 1. . . 10: 1. . . 100: 1. . . 1،000: 1 ، إلخ ، على التوالي. يتم أيضًا تضمين أي نسبة وسيطة أخرى.

قد يستخدم الاستخلاص بدلاً من ذلك مذيبًا عضويًا بمفرده أو بالاشتراك مع مذيب آخر. في بعض النماذج ، تكون عملية الاستخلاص عبارة عن عملية متعددة الخطوات حيث يتم تلامس فاكهة المارولا (العصير) أولاً بمذيب واحد ثم بمذيب مختلف وذلك لزيادة المحصول إلى الحد الأقصى أو إثراء المستخلص بمكون واحد أو أكثر من المكونات المرغوبة.

عادةً ما يكون المذيب العضوي عبارة عن كحول واحد على الأقل مثل الميثانول والإيثانول وكحول الأيزوبروبيل أو كيتون مثل الأسيتون. عند استخدام الإيثانول ، يمكن استخدامه كمحلول إيثانولي مائي ، على سبيل المثال ، من حوالي 40 إلى 60٪ إيثانول. يمكن أيضًا استخدام حلول مماثلة مع المذيبات العضوية الأخرى القابلة للامتزاج بالماء. المستخلص الذي تم الحصول عليه من بعد مستخلص كحولي هو المستخلص المعين هنا I.

يجب أن يُفهم في سياق الاختراع الحالي أن الاستخراج الإيثانولي ، أو أي استخراج آخر تم الكشف عنه هنا ، يمكن تنفيذه في أي درجة حرارة مناسبة. سيكون من الواضح لأولئك المهرة في المجال أن الاستخلاص الأكثر كفاءة سيحدث إذا تم تحريك العصير ، على سبيل المثال عن طريق التقليب أو الرج ، و / أو إذا تم تسخين الخليط إلى درجة حرارة أعلى من درجة حرارة الغرفة (أعلى من 25-27 درجة مئوية) .). يمكن أيضًا استخدام درجات حرارة استخراج منخفضة ، مثل تلك التي تقل عن درجة حرارة الغرفة. في بعض النماذج ، يتم تنفيذ عملية البادئة عند درجة حرارة الغرفة أو عند درجة حرارة تتراوح بين 25 و 30 درجة مئوية.

يجب أن يُفهم أيضًا في سياق الاختراع الحالي أنه يمكن إجراء الاستخراج لأي فترة زمنية مناسبة.

يدرك الشخص المتمرس في المجال أيضًا أن عملية الحصول على مستخلص الاختراع قد تتضمن تعقيم فاكهة المارولا للحصول على أجزاء أصغر من الفاكهة الكاملة التي يمكن الحصول على المستخلصات منها بواحدة أو أكثر من طرق الاستخلاص الأخرى ، مثل التقطير. بدلاً من ذلك ، يمكن الحصول على المستخلص بالتعبير ، أي عن طريق الضغط على العصير من الفاكهة.

وبالتالي ، في بعض النماذج ، قبل ملامسة العصير بمذيب واحد أو أكثر كما تم الكشف عنه ، يمكن معالجة الفاكهة ، أي الفاكهة الكاملة ، باستثناء البذور ، أو أي جزء منها ، مسبقًا بالنقع أو التعبير أو أي عملية أخرى.

يمكن تخزين العصير الذي تم الحصول عليه من فاكهة المارولا قبل الاستخلاص أو المعالجة المسبقة ، على سبيل المثال ، التجفيف ، لفترات طويلة من الزمن. قد يكون التخزين في أي درجة حرارة وفي أي حالة ، والتي يتم بموجبها الحفاظ على نضارة العصير ومنع التدهور أو التقليل منه. قد تكون درجات الحرارة هذه أعلى أو أقل من درجة حرارة الغرفة. في بعض النماذج ، يمكن تخزين العصير في الثلاجة لعدة أسابيع أو في المجمد لعدة سنوات. عند استخدام تجميد العصير ، قد تشتمل العملية أيضًا على خطوة إزالة الجليد من العصير قبل الاستخلاص أو المعالجة.

يمكن أن يتم تجفيف العصير عن طريق تسخين العصير السائل تحت التفريغ ، أو تحت الضغط الجوي ، عند درجة حرارة محددة مسبقًا والتي قد تكون درجة حرارة الغرفة أو أعلى من درجة حرارة المحيط ، دفعة واحدة أو بكميات أقل للتحكم في محتوى الرطوبة في مستخلص. في مثال غير مقيد تم الكشف عنه هنا ، يتم تحقيق التجفيف عن طريق سكب العصير على سطح مثل صينية ، وفي بعض الحالات مغطى برقائق (على سبيل المثال ، ورق ألومنيوم) لتسخين العصير بالتساوي والحصول على طبقة متجانسة إلى حد كبير من خلاصة المارولا المجففة.

التركيز الرطب (الشراب) الذي يتم الحصول عليه بالتجفيف يكون مصفرًا إلى بني غامق اللون ، اعتمادًا على تركيز ونوع المستخلص. يتم طحن المادة المجففة بسهولة ولها لون ذهبي لامع إلى بني غامق حسب نوع المستخلص. المادة المجففة قابلة للذوبان في الماء.

يحتوي مستخلص المارولا الذي تم الحصول عليه بعد ذلك على كميات متفاوتة من المواد المتطايرة ، مع اعتماد الكميات على طول فترة التجفيف ودرجة الحرارة المستخدمة. دون الرغبة في التقيد بالنظرية ، عند إزالة المكونات المتطايرة ، يحتوي المركز ، وبالتحديد في بعض النماذج ، مستخلص البودرة ، مقارنة بعصير الفاكهة الكامل على تركيز أعلى من المكونات النشطة التي يوفر وجودها وتوليفها نشاطًا عاليًا مما يؤدي إلى لم يتم ملاحظتها في الفاكهة الكاملة والتي تم توضيحها هنا.

وهكذا ، يتم الحصول على المستخلص من خلال عملية تشتمل على ملامسة عصير المارولا مع مذيب مائي كما هو محدد للحصول على معلق يمكن منه فصل المستخلص السائل.

في بعض النماذج ، تشتمل العملية على:

في بعض النماذج ، يتم تجفيف العصير المُجمع أو معالجته مسبقًا كما تم الكشف عنه قبل الاستخلاص.

في تجسيدات أخرى ، قد يتم فصل المستخلص السائل للخطوة (3) عن طريق الطرد المركزي للمعلق الذي تم الحصول عليه في الخطوة (2) لفصل المستخلص السائل باعتباره مادة طافية من كتلة صلبة.

في بعض النماذج الإضافية ، تشتمل العملية على:

في نماذج أخرى ، تشتمل العملية على:

في بعض النماذج الأخرى ، تشتمل العملية على:

وتجدر الإشارة إلى أنه يمكن تكرار فصل المستخلص السائل أكثر من مرة ، بكمية ثانية من نفس المذيب أو مذيب مختلف ، ويمكن دمج المواد الطافية التي تم الحصول عليها من كل خطوة ومعالجتها كذلك لعزل أو تركيز أو معالجة أخرى مقتطف. وبالتالي ، يمكن دمج مادتين طافيتين أو أكثر وإزالة المذيب و / أو بعض الماء ، على سبيل المثال باستخدام أي طريقة واحدة لإزالة المذيبات.

عندما تشتمل مادة بداية الفاكهة على مادة صلبة أو في الحالات التي تمت فيها معالجة ثمار المارولا إلى مسحوق جاف أو شبه جاف أو في شكل حبيبات ، يمكن فصل المستخلص على الأقل إلى طور صلب ومرحلة مائية ، كل مرحلة لها الحساسية البيولوجية كما تم الكشف عنها هنا.

يمكن تمييز مستخلص الاختراع ، الذي تم الحصول عليه باستخدام عملية واحدة أو أكثر على النحو الذي تم الكشف عنه في هذه الوثيقة ، بواحد أو أكثر مما يلي:

وهكذا ، يوفر الاختراع أيضًا مستخلص مارولا يتميز بقدرة مضادات أكسدة FRAP بحد أدنى 1000 و 1500 مجم من مكافئات فيتامين ج لكل 100 مل. يقارن هذا مع FRAP المقاسة لعصير المارولا غير المعالج بين 260 و 600 مجم من فيتامين سي لكل 100 مل. بعبارة أخرى ، تكون سعة FRAP للمستخلص وفقًا للاختراع بين 2 و 3 أضعاف النشاط الملاحظ في العصير الأصلي غير المعالج.

في بعض النماذج ، يتم استخراج المستخلص الذي يحتوي على قدرة FRAP المذكورة أعلاه.

يوفر الاختراع الحالي أيضًا مستخلصًا به جزء بوليفينول مستنفد ، المستخلص المذكور المعين هنا كمستخلص II. يمكن فصل جزء البوليفينول ، الوارد هنا باعتباره المستخلص III ، عن عصير المارولا ، على سبيل المثال ، كروماتوجرافيا عصير المارولا لتزويد المستخلص II (المستنفد) والمستخلص III (جزء الفينول المنفصل). في بعض النماذج ، يتم استنفاد جزء البوليفينوليك من خلال عملية تشتمل على ترشيح عصير المارولا ، على سبيل المثال عن طريق تمرير العصير عبر طبقة واحدة أو أكثر من الشاش (من درجات مختلفة ، على سبيل المثال ، من النسيج المفتوح إلى النسيج الناعم للغاية المستخدم وفقًا لـ جودة وكمية العصير) ، والطرد المركزي اختياريًا للعصير المفلتر لإزالة حبيبات الفاكهة ، وتطبيق العصير الصافي على اللوني ، على سبيل المثال ، كروماتوجرافيا العمود باستخدام أعمدة معبأة براتنجات التبادل الأيوني والراتنجات الممتزة ، أو C₁₈السيليكا أو الراتنجات المربوطة للتفاعل الكارهة للماء وكروماتوجرافيا الطور المعكوس ، وجمع الكسور ودمج الكسور التي لها نفس المواد الصلبة الذائبة الكلية (TSS).

في بعض النماذج ، يمكن جمع جزء البوليفينول من الوسط المستخدم في الفصل اللوني ، على سبيل المثال ، من حبيبات العمود ، عن طريق خلط الوسط ، على سبيل المثال ، الحبيبات ، مع محلول كحولي (إيثانول ، ميثانول ، إلخ). قد تكون الكسور الكحولية مجمعة وتبخر حتى تجف.

وفقًا لبعض النماذج ، من أجل الحصول على مستخلص يحتوي على مادة البوليفينول المتزايدة: نسبة فيتامين C ، يمكن فصل جزء البوليفينول (أي المستخلص III) من العصير ثم إضافته إلى الجزء المستنفد من مادة البوليفينول (أي المستخلص II) . في بعض التجسيدات الأخرى ، يتم دمج المستخلص II مع المستخلص الأول.

في بعض النماذج ، يتميز المستخلص II بقدرة مضادات الأكسدة FRAP على الأقل بين 250 و 500 مجم من مكافئ فيتامين ج لكل 100 مل.

كما هو مستخدم هنا يشير "البوليفينول" إلى مجموعة من المواد ، تتميز بوجود أكثر من وحدة فينول واحدة أو لبنة بناء لكل جزيء. تنقسم البوليفينول عمومًا إلى التانينات القابلة للتحلل بالماء (استرات حمض الغال من الجلوكوز والسكريات الأخرى) والفينيل بروبانويد ، مثل اللجنين والفلافونويد والعفص المكثف. في بعض النماذج ، تشتمل البوليفينول المتحصل عليه من عصير البقعة على التانينات القابلة للتحلل بالماء والكاتشين وأحماض هيدروكسي سيناميك و / أو مشتقات منها.

في جانب آخر من جوانبه ، يوفر الاختراع الحالي استخدام مستخلص واحد على الأقل من الاختراع لتحضير تركيبة.

في بعض النماذج ، تكون التركيبة عبارة عن تركيبة صيدلانية.

في تجسيدات أخرى ، يكون المستخلص هو المكون النشط الموجود في التركيبة مع مادة حاملة أو مادة مخففة أو سواغ مقبولة صيدلانيًا.

سيتم تحديد اختيار المادة الحاملة جزئيًا عن طريق المستخلص المعين ، بالإضافة إلى الطريقة الخاصة المستخدمة لإدارة التركيبة التي تتكون منها. وفقًا لذلك ، توجد مجموعة متنوعة من الصيغ المناسبة للتركيب الصيدلاني للاختراع الحالي. التركيبات التالية للإعطاء عن طريق الفم ، والهباء الجوي ، والحقن ، وتحت الجلد ، وريديًا ، وعضليًا ، وداخل الفم ، والمستقيم ، والمهبل هي مجرد تركيبات مثالية وليست مقيدة بأي حال من الأحوال.

يمكن أن تتكون التركيبات المناسبة للإعطاء عن طريق الفم من (أ) محاليل سائلة ، مثل كمية فعالة من المستخلص المذاب في مواد مخففة ، مثل الماء أو المحلول الملحي أو عصير البرتقال ؛ (ب) الكبسولات ، والأكياس ، والأقراص ، والمعينات ، والأقراص ، كل منها يحتوي على كمية محددة مسبقًا من المستخلص ، على شكل مواد صلبة أو حبيبات ؛ (ج) المساحيق. (د) معلقات في سائل مناسب ؛ و (هـ) المستحلبات المناسبة. قد تشتمل التركيبات السائلة على مواد مخففة ، مثل الماء والكحول ، على سبيل المثال ، الإيثانول ، وكحول بنزيل ، وكحولات البولي إيثيلين ، إما مع أو بدون إضافة مادة خافضة للتوتر السطحي مقبولة صيدلانيًا ، أو عامل معلق ، أو عامل استحلاب. يمكن أن تكون أشكال الكبسولة من نوع الجيلاتين العادي ذي القشرة الصلبة أو الناعمة التي تحتوي ، على سبيل المثال ، على مواد خافضة للتوتر السطحي ومواد تشحيم ومواد مالئة خاملة ، مثل اللاكتوز والسكروز وفوسفات الكالسيوم ونشا الذرة. يمكن أن تشتمل أشكال الأقراص على واحد أو أكثر من اللاكتوز ، والسكروز ، والمانيتول ، ونشا الذرة ، ونشا البطاطس ، وحمض الألجنيك ، والسليلوز الجريزوفولفين ، والسنط ، والجيلاتين ، وصمغ الغوار ، وثاني أكسيد السيليكون الغروي ، والصوديوم كروسكارميلوز ، والتلك ، وستيرات المغنيسيوم ، وستيرات الكالسيوم ، وستيرات الزنك ، وحمض دهني ، والسواغات الأخرى ، والملونات ، والمخففات ، وعوامل التخزين المؤقت ، وعوامل التفكك ، وعوامل الترطيب ، والمواد الحافظة ، وعوامل النكهة ، والمواد الحاملة المتوافقة دوائياً. يمكن أن تشتمل أشكال المعينات على المكون النشط في النكهة ، وعادةً ما يكون السكروز والسنط أو التراجاكانث ، بالإضافة إلى الباستيل التي تشتمل على العنصر النشط في قاعدة خاملة ، مثل الجيلاتين والجلسرين ، أو السكروز والسنط ، والمستحلبات ، والمواد الهلامية ، وما شابه ذلك المحتوية على ، بالإضافة إلى المستخلص ، مثل المواد الحاملة المعروفة في المجال.

يمكن تحويل المستخلصات أو التركيبات الخاصة بالاختراع الحالي ، على سبيل المثال ، التركيبة الصيدلانية ، بمفردها أو بالاشتراك مع مكونات مناسبة أخرى ، في تركيبات الأيروسول التي يتم إعطاؤها عن طريق الاستنشاق. يمكن وضع تركيبات الهباء الجوي هذه في مواد دافعة مقبولة مضغوطة ، مثل ثنائي كلورو ثنائي فلورو الميثان والبروبان والنيتروجين وما شابه. يمكن أيضًا صياغتها كمستحضرات صيدلانية للمستحضرات غير المضغوطة ، مثل البخاخات أو البخاخات.

تشتمل التركيبات المناسبة للإعطاء بالحقن على محاليل حقن معقمة مائي وغير مائي متساوي التوتر ، والتي يمكن أن تحتوي على مضادات الأكسدة ، ومخازن ، ومضادات الجراثيم ، والمواد المذابة التي تجعل المستحضر متساوي التوتر مع دم المتلقي المقصود ، ومعقم مائي وغير مائي المعلقات التي تشمل عوامل تعليق ، مواد مذابة ، عوامل تغليظ ، مثبتات ، ومواد حافظة. يمكن إعطاء المركب في مادة مخففة مقبولة من الناحية الفسيولوجية في مادة حاملة صيدلانية ، مثل سائل معقم أو خليط من السوائل ، بما في ذلك الماء ، والمحلول الملحي ، وسكر العنب المائي ومحاليل السكر ذات الصلة ، والكحول ، مثل الإيثانول ، أو الأيزوبروبانول ، أو الكحول السداسي ، الجليكولات ، مثل البروبيلين جليكول أو البولي إيثيلين جلايكول ، وكتلات الجلسرين ، مثل 2،2-ثنائي ميثيل-1،3-ديوكسولين-4-ميثانول ، والإيثرات ، مثل بولي (إيثيلين جليكول) 400 ، زيت ، حمض دهني ، دهني الإستر الحمضي أو الجلسريد ، أو جليسريد الأحماض الدهنية الأسيتيل مع أو بدون إضافة مادة خافضة للتوتر السطحي مقبولة صيدلانيًا ، مثل الصابون أو المنظفات ، عامل تعليق ، مثل البكتين ، الكربوميرات ، ميثيل سلولوز ، هيدروكسي بروبيل ميثيل سلولوز ، أو كاربوكسي ميثيل سلولوز ، أو عوامل مستحلب المواد المساعدة الصيدلانية الأخرى.

تشمل الزيوت التي يمكن استخدامها في التركيبات الوريدية الزيوت البترولية أو الحيوانية أو النباتية أو الاصطناعية. تشمل الأمثلة المحددة للزيوت الفول السوداني وفول الصويا والسمسم وبذور القطن والذرة والزيتون والبترول والمعادن. تشمل الأحماض الدهنية المناسبة للاستخدام في التركيبات الوريدية حمض الأوليك وحمض دهني وحمض الأيزوستيريك. يعتبر إيثيل أوليات وإيزوبروبيل ميريستات أمثلة على إسترات الأحماض الدهنية المناسبة. يشمل الصابون المناسب للاستخدام في تركيبات الحقن المعادن القلوية الدهنية ، والأمونيوم ، وأملاح ثلاثي إيثانول أمين ، وتشمل المنظفات المناسبة (أ) المنظفات الكاتيونية مثل ، على سبيل المثال ، ثنائي ميثيل ديالكيل أمونيوم هاليدات ، وهاليدات ألكيل بيريدينيوم ، (ب) المنظفات الأنيونية مثل ، على سبيل المثال ، سلفونات الألكيل ، والأريل ، والأوليفين ، والألكيل ، والأوليفين ، والإيثر ، وكبريتات الجليسريد الأحادي ، والسلفوساكسينات ، (ج) المنظفات غير الأيونية مثل ، على سبيل المثال ، أكاسيد الأمين الدهنية ، وألكانول أميدات الأحماض الدهنية ، والبولي أوكسي إيثيلين بولي بروبيلين كوبوليمرات ، (د) المنظفات الأمفوتيرية مثل ألكيل بيتا أمينوبريوبيونات و 2-ألكيل إيميدازولين أملاح الأمونيوم الرباعية ، و (3) مخاليط منها.

تحتوي التركيبات الوريدية بشكل نمطي من حوالي 0.5 إلى حوالي 25٪ بوزن المستخلص في المحلول. يمكن استخدام المواد الحافظة والمخازن المؤقتة المناسبة في مثل هذه التركيبات. من أجل تقليل أو القضاء على التهيج في موقع الحقن ، قد تحتوي هذه التركيبات على واحد أو أكثر من المواد الخافضة للتوتر السطحي غير الأيونية التي لها توازن هيدروفيلي - محب للدهون (HLB) من حوالي 12 إلى حوالي 17. وتتراوح كمية المادة الخافضة للتوتر السطحي في هذه التركيبات من حوالي 5 إلى حوالي 15٪ من الوزن. تشتمل المواد الخافضة للتوتر السطحي المناسبة على استرات الأحماض الدهنية بولي إيثيلين سوربيتان ، مثل أحادي السوربيتان والوزن الجزيئي المرتفع لأكسيد الإيثيلين بقاعدة كارهة للماء ، والتي تكونت عن طريق تكثيف أكسيد البروبيلين مع البروبيلين جليكول. يمكن تقديم التركيبات الوريدية في عبوات محكمة الغلق ذات جرعة واحدة أو جرعات متعددة ، مثل الأمبولات والقوارير ، ويمكن تخزينها في حالة مجففة بالتجميد (مجففة بالتجميد) تتطلب فقط إضافة مادة سائلة معقمة ، على سبيل المثال ، الماء للحقن قبل الاستعمال مباشرة. يمكن تحضير محاليل ومعلقات الحقن خارج الوقت من مساحيق وحبيبات وأقراص معقمة من النوع الموصوف سابقًا.

يمكن تصنيع المستخلصات والتركيبات الخاصة بالاختراع الحالي في تركيبات قابلة للحقن. إن متطلبات المواد الحاملة الصيدلانية الفعالة للتركيبات القابلة للحقن معروفة جيدًا لمن يمتلكون مهارة عادية في المجال. نرى الصيدلانيات وممارسات الصيدلة ، شركة جي بي ليبينكوت ، فيلادلفيا ، بنسلفانيا ، بانكر وتشالمرز ، محرران ، الصفحات 238-250 (1982) ، و كتيب ASHP عن الأدوية القابلة للحقن ، في مكان آخر ، 4^العاشر الطبعه ، الصفحات 622-630 (1986).

بالإضافة إلى ذلك ، يمكن تحويل مقتطفات الاختراع الحالي إلى تحاميل عن طريق الخلط مع مجموعة متنوعة من القواعد ، مثل قواعد الاستحلاب أو القواعد القابلة للذوبان في الماء. يمكن تقديم التركيبات المناسبة للإعطاء المهبلي على هيئة فطائر ، أو سدادات قطنية ، أو كريمات ، أو جل ، أو معاجين ، أو رغاوي ، أو تركيبات رش تحتوي ، بالإضافة إلى المادة الفعالة ، على المواد الحاملة المعروفة في المجال لتكون مناسبة.

كما هو مذكور أعلاه ، يمكن تصنيع المستخلصات والتركيبات الخاصة بالاختراع ، وتقديمها و / أو تخزينها بأي شكل ، أي في صورة سائل ، أو مركز ، أو مسحوق جاف ، أو محلول ، أو مستحلب ، أو محلول مخزون أو تركيز المخزون.

في بعض النماذج ، تكون التركيبة الصيدلانية لعلاج أو الوقاية من مرض أو اضطراب واحد على الأقل مرتبط بضرر الإجهاد التأكسدي.

الإجهاد التأكسدي هو نتيجة خلل في التوازن المؤيد للأكسدة / مضادات الأكسدة التي تؤدي إلى توليد أنواع الأكسجين التفاعلية السامة. تتشكل الجذور الحرة عندما يتفاعل الأكسجين مع جزيئات معينة ويبدأ تفاعل متسلسل للضرر بين المكونات الخلوية المهمة. وبالتالي ، فإن الالتهاب وعمليات الأكسدة مترابطان. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أن يؤدي الإجهاد التأكسدي إلى تسمم خلايا الدم ، وتحفيز إطلاق السيتوكينات الالتهابية ، وتحفيز إنتاج عوامل النمو. يلعب الإجهاد التأكسدي دورًا مهمًا في تكوين اللويحات وقد يكون التهاب الأوعية الدموية المتأصل مؤشراً قوياً لتصلب الشرايين.

وبالتالي ، كما هو مستخدم هنا ، يشير مصطلح "ضرر الإجهاد التأكسدي" إلى الضرر الذي يلحق بالخلايا والأنسجة و / أو أعضاء الحيوان ، بما في ذلك البشر ، والذي ينتج عن عدم التوازن بين إنتاج الأكسجين التفاعلي وقدرة النظام البيولوجي على القيام بذلك بسهولة. إزالة السموم من المواد الوسيطة التفاعلية أو إصلاح الضرر الناتج بسهولة. في أغلب الأحيان ، قد تتسبب الاضطرابات في حالة الأكسدة والاختزال الطبيعية هذه في حدوث تأثيرات سامة من خلال إنتاج البيروكسيدات والجذور الحرة التي تتلف كل أو مكونات معينة من الخلية ، بما في ذلك البروتينات والدهون والحمض النووي.

في بعض النماذج ، يرتبط الضرر الناتج عن الإجهاد التأكسدي باضطراب أو مرض منتقى من تصلب الشرايين ومرض باركنسون وفشل القلب واحتشاء عضلة القلب والأمراض التنكسية العصبية أو الاضطرابات وأمراض العين ومتلازمة التعب المزمن وغيرها.

يتطور تصلب الشرايين ، وهو السبب الرئيسي للمراضة والوفيات بين الأشخاص ذوي نمط الحياة الغربي ، نتيجة لعوامل الخطر المختلفة. فرط كوليسترول الدم هو عامل خطر رئيسي لتصلب الشرايين وخفض تركيز الكوليسترول في البلازما عن طريق العلاج الدوائي يقلل من الإصابة بأمراض القلب والأوعية الدموية. تتميز آفة تصلب الشرايين بالإجهاد التأكسدي المتسارع وتشكيل نوع من الأكسجين التفاعلي (ROS) ، والذي يهاجم الدهون في البروتينات الدهنية ، وكذلك في الضامة الشريانية. يلعب التعديل التأكسدي للبروتين الدهني منخفض الكثافة (LDL) دورًا رئيسيًا في التسبب في تصلب الشرايين. LDL المؤكسد (Ox-LDL) هو مساهم رئيسي في تطور آفات تصلب الشرايين ، لأنه يحفز تراكم الكوليسترول الضامة وتكوين خلايا الرغوة. على النقيض من تصلب الشرايين من LDL ، ترتبط مستويات البروتين الدهني عالي الكثافة في الدم (HDL) عكسياً بخطر الإصابة بتصلب الشرايين. يمارس HDL تأثيرًا مثبطًا على أكسدة LDL وقد يكون هذا التأثير مرتبطًا بإنزيم باراوكسوناز 1 المرتبط به (PON1).

تصلب الشرايين هو أيضًا العملية أو الاضطراب الذي ينطوي على تراكم الترسبات على الجزء الداخلي من الشرايين ، بما في ذلك الشرايين الموجودة في القلب والدماغ والذراعين والساقين والحوض. وبالتالي ، قد يشير المصطلح أيضًا إلى التراكم التدريجي لخلايا العضلات الملساء ، والخلايا المناعية (على سبيل المثال ، الخلايا الليمفاوية ، أو الضامة ، أو الخلايا الأحادية) ، والمنتجات الدهنية (مثل البروتينات الدهنية ، أو الكوليسترول) ، ومنتجات النفايات الخلوية ، والكالسيوم ، أو مواد أخرى داخل البطانة الداخلية للشريان ، مما يؤدي إلى تضيق أو انسداد الأوعية الدموية وتطور الأمراض المرتبطة بتصلب الشرايين.

نظرًا لأن تصلب الشرايين يتجلى داخل الشرايين الكبيرة والمتوسطة الحجم ، فإن العلاج أو الوقاية غالبًا ما يؤثران على تطور حالة من الالتهاب المزمن داخل الشرايين.

لذلك فإن مستخلص الاختراع مناسب أيضًا لعلاج الحالات والوقاية منها بما في ذلك تصلب الشرايين التاجية المسببة لمرض الشريان التاجي واحتشاء عضلة القلب والتخثر التاجي والذبحة الصدرية ؛ تصلب الشرايين التي تغذي الجهاز العصبي المركزي مما يسبب السكتات الدماغية ونقص التروية الدماغية العابرة. تصلب الشرايين في الدورة الدموية الطرفية يسبب العرج المتقطع والغرغرينا ؛ تصلب الشرايين في شريان الدورة الدموية الحشوية يسبب نقص تروية المساريق. وتضيق الشريان الكلوي.

وبالتالي ، فإن تركيبة الاختراع مناسبة أيضًا للاستخدام في العلاج أو الوقاية من مرض أو اضطراب واحد على الأقل مرتبط بواحد أو أكثر من تركيزات الدهون الثلاثية الدهنية في الدم ، وتركيزات الكوليسترول في الدم وتركيزات الكوليسترول الكلي في الدم وكوليسترول LDL وانخفاض HDL- تركيزات الكوليسترول.

كما هو مستخدم هنا ، مثل هذا المرض أو الاضطراب المرتبط بزيادة تراكيز الدهون الثلاثية في الدم وتركيزات الكوليسترول في الدم وتركيزات الكوليسترول الكلي في الدم وتركيزات الكوليسترول المنخفض الكثافة وانخفاض تركيزات الكوليسترول الحميد ، ينطوي على ارتفاع غير طبيعي في مستويات الكوليسترول (فرط كوليسترول الدم) ، و / أو ارتفاع مستويات LDL أو الدهون الثلاثية و / أو تركيزات منخفضة من HDL الوظيفي ، مثل أمراض القلب التاجية أو أشكال أخرى من أمراض القلب والأوعية الدموية وكذلك الأمراض أو الاضطرابات التي تنطوي على تطور التصلب العصيدي في الشرايين (مثل تصلب الشرايين) ، مثل نقص الكولسترول وأمراض الأوعية الدموية الطرفية والسكري و ضغط دم مرتفع.

تم ربط الإجهاد التأكسدي أيضًا بموت الخلايا العصبية المرتبط بحالات التنكس العصبي المختلفة. الأمراض التنكسية العصبية هي الحالات التي تفقد فيها خلايا الدماغ والنخاع الشوكي. عادة ، يبدأ التنكس العصبي قبل وقت طويل من ظهور أي أعراض على المريض. نظرًا لأن خلايا الدماغ تتعرض باستمرار لأنواع الأكسجين التفاعلية الناتجة عن التمثيل الغذائي التأكسدي ، فإن الإجهاد التأكسدي هو أيضًا أحد العوامل المؤهبة للاضطرابات العصبية لدى البالغين وقد تورط في التسبب في بعض هذه الاضطرابات مثل مرض باركنسون.

يستخدم أيضًا مستخلص أو تركيبة الاختراع في معالجة أو الوقاية من مرض أو اضطراب تنكسي عصبي واحد على الأقل.

تشير "الأمراض أو الاضطرابات التنكسية العصبية" ، في سياق الاختراع الحالي ، إلى حالة أو أكثر يتم فيها فقدان خلايا الدماغ والحبل الشوكي نتيجة تدهور الخلايا العصبية أو غلافها المياليني الذي يؤدي بمرور الوقت إلى اختلال وظيفي. والإعاقات الناتجة عن ذلك. وبالتالي ، فإن الأمراض أو الاضطرابات العصبية التنكسية هي تلك المتعلقة بالظروف التي تسبب مشاكل في الحركات ، مثل الرنح ، وكذلك الحالات التي تؤثر على الذاكرة والمتعلقة بالخرف. تشمل بعض الأمثلة غير المحدودة للأمراض أو الاضطرابات التنكسية العصبية إدمان الكحول ، ومرض الإسكندر ، ومرض ألبير ، ومرض الزهايمر ، والتصلب الجانبي الضموري (مرض لو جيريج) ، وتوسع الشعيرات الحركية ، ومرض باتن (المعروف أيضًا باسم مرض شبيلماير-فوغت-سجوجرن-باتن) ، الاعتلال الدماغي الإسفنجي البقري (جنون البقر) ، مرض كانافان ، الشلل الدماغي ، متلازمة كوكايين ، التنكس القشري ، مرض كروتزفيلد جاكوب ، التنكس الفص الجبهي الصدغي ، مرض هنتنغتون ، الخرف المرتبط بفيروس نقص المناعة البشرية ، مرض كينيدي ، مرض كرابي ، داء الأعصاب مرض جوزيف (رنح مخيخي من النوع 3) ، ضمور جهازي متعدد ، التصلب المتعدد ، التغفيق ، مرض نيمان بيك ، مرض باركنسون ، مرض بيليزايوس ميرزباكر ، مرض بيك ، التصلب الجانبي الأولي ، أمراض البريون ، الشلل فوق النووي التدريجي ، مرض ريفسم ، مرض ساندهوف ، مرض childer ، التنكس المشترك تحت الحاد للحبل الشوكي الثانوي إلى pernicio لنا فقر الدم ، ترنح النخاع الشوكي ، ضمور العضلات الشوكي ، مرض ستيل-ريتشاردسون-أولشوسكي ، وعلامات الظهر الظهرية.

في جانب آخر من جوانبه ، يوفر الاختراع الحالي طريقة لعلاج أو الوقاية من مرض أو اضطراب واحد على الأقل مرتبط بضرر الإجهاد التأكسدي في حيوان ثديي ، بما في ذلك إعطاء الثدييات المذكورة كمية فعالة من المستخلص وفقًا للاختراع أو تركيبة صيدلانية تشتمل عليها.

في جانب إضافي للاختراع الحالي ، يتم توفير طريقة للعلاج أو الوقاية من مرض أو اضطراب واحد على الأقل مرتبط بواحد أو أكثر من تركيزات الدهون الثلاثية الدهنية في الدم ، وتركيزات الكوليسترول في الدم وتركيزات إجمالي المصل وكوليسترول LDL وانخفاض HDL -تركيزات كوليسترول في حيوان ثديي ، تشتمل على إعطاء كمية فعالة من مستخلص طبقًا للاختراع أو تركيبة صيدلانية مشتملة على الثدييات المذكورة.

في أحد جوانبه الأخرى ، يوفر الاختراع الحالي طريقة لعلاج أو الوقاية من مرض أو اضطراب تنكسي عصبي واحد على الأقل في حيوان ثديي يشتمل على إعطاء كمية فعالة من المستخلص وفقًا للاختراع أو تركيبة صيدلانية تشتمل على الثدييات المذكورة منها.

في جانب آخر ، يوفر الاختراع الحالي مضادًا للأكسدة يشتمل على مستخلص الاختراع.

في جانب آخر أيضًا ، يوفر الاختراع الحالي عامل تقليل الكوليسترول الذي يشتمل على مستخلص الاختراع.

ضمن نطاق الاختراع الحالي ، يشير مصطلح "المعالجة و / أو المنع" إلى إعطاء كمية علاجية من تركيبة الاختراع الحالي والتي تكون فعالة لتخفيف الأعراض غير المرغوب فيها المرتبطة بمرض ، لمنع ظهور مثل هذا الأعراض قبل حدوثها ، لإبطاء تطور المرض ، وإبطاء تدهور الأعراض ، وتعزيز بداية فترة مغفرة ، وإبطاء الضرر الذي لا رجعة فيه الناجم في المرحلة المزمنة التقدمية للمرض ، لتأخير ظهور قال المرحلة التدريجية ، لتقليل حدة المرض أو علاجه ، لتحسين معدل البقاء على قيد الحياة أو التعافي السريع ، أو لمنع حدوث المرض أو مزيج من اثنين أو أكثر مما سبق.

يمكن إعطاء مستخرج أو تركيبة الاختراع بأي طريقة معروفة لشخص ماهر في المجال. بشكل نموذجي ، يكون إعطاء مستخلص أو تركيبة صيدلانية تشتمل عليهما كمية فعالة من المستخلص (المستخلصات) المتضمنة في التركيبة. يتم تحديد "المبلغ الفعال" للأغراض الواردة هنا من خلال الاعتبارات التي قد تكون معروفة في المجال. يجب أن تكون الكمية فعالة لتحقيق التأثير العلاجي المرغوب كما هو موصوف أعلاه ، اعتمادًا ، في جملة أمور ، على نوع وشدة المرض المراد علاجه ونظام العلاج. يتم تحديد المقدار الفعال بشكل نموذجي في التجارب السريرية المصممة بشكل مناسب (على سبيل المثال ، دراسات مدى الجرعة) وسيعرف الشخص المتمرس في المجال كيفية إجراء مثل هذه التجارب بشكل صحيح من أجل تحديد الكمية الفعالة. كما هو معروف بشكل عام ، تعتمد الكمية الفعالة على مجموعة متنوعة من العوامل بما في ذلك تقارب الليجند بالمستقبل ، وملف توزيعه داخل الجسم ، ومجموعة متنوعة من المعلمات الدوائية مثل نصف العمر في الجسم ، والآثار الجانبية غير المرغوب فيها ، إذا أي ، على عوامل مثل العمر والجنس ، وما إلى ذلك.

يمكن أيضًا استخدام مستخلص الاختراع لتحضير تركيبة للاستخدام في مجموعة متنوعة من التطبيقات غير الصيدلانية. في بعض النماذج ، تكون التركيبة عبارة عن تركيبة مضادة للأكسدة لاستخدامها كمادة حافظة لمجموعة كبيرة ومتنوعة من التطبيقات في صناعة الأغذية ، وصناعة مستحضرات التجميل ، والعلاجات ، وما إلى ذلك ، ولتثبيط أكسدة LDL الناجم عن أيونات النحاس في المختبر أو في الجسم الحي.

يمكن استخدام المستخلص الذي تم الكشف عنه هنا بشكل إضافي كمكمل غذائي أو كعنصر نشط في هذا الملحق. في بعض النماذج ، يكون الملحق مناسبًا للاستهلاك من قبل كل من البشر والحيوانات غير البشرية ، لإدارة الرفاهية ، والعلاج والوقاية من الحالات والاضطرابات المرتبطة بالأضرار التأكسدية.

في سياق الاختراع الحالي ، يمكن أن تشتمل المكملات الغذائية ، اعتمادًا على طبيعتها وشكلها الفيزيائي ، على سبيل المثال ، محبة للدهون أو مائية بطبيعتها ، على واحد أو أكثر من المستحلبات والمثبتات ومضادات الأكسدة والمواد المضافة الأخرى. يتم الاستخدام من المستحلبات المتوافقة مع الطعام ، مثل الفوسفوليبيدات ، على سبيل المثال الليسيثين ، بولي أوكسي إيثيلين سوربيتان أحادي أو ثلاثي ، أحادي أو ثلاثي ، أحادي أو ثلاثي ، أحادي أو ثنائي الجليسريد. يمكن إضافة هذه المستحلبات والمثبتات ومضادات الأكسدة والمواد المضافة إلى مستخلص الاختراع وفقًا للاستخدام النهائي للمستخلص المذكور.

قد تحتوي المكملات الغذائية التي تم الكشف عنها هنا أيضًا على مواد حيوية اصطناعية أو طبيعية مثل الأحماض الأمينية والأحماض الدهنية والفيتامينات والمعادن والبوليفينول وما إلى ذلك ، والتي يمكن إضافتها إما عن طريق الخلط الجاف أو الرطب إلى التركيبة المذكورة قبل البسترة و / أو التجفيف.

في بعض النماذج ، تكون المكملات الغذائية عبارة عن تركيبة غذائية كاملة ، أو منتج ألبان ، أو مشروب مبرد أو مستقر ، أو ماء معدني أو منقى ، أو مشروب سائل ، أو حساء ، أو مكمل غذائي ، أو بديل للوجبات ، أو لوح غذائي ، أو الحلويات ، الحليب أو منتج الحليب المخمر ، الزبادي ، مسحوق الحليب ، منتج التغذية المعوية ، حليب الأطفال ، منتج غذائي للرضع ، منتج الحبوب أو منتج الحبوب المخمرة ، الآيس كريم ، الشوكولاتة ، القهوة ، أحد منتجات الطهي مثل المايونيز أو الطماطم المهروسة أو تتبيلات السلطة أو طعام الحيوانات الأليفة. وفقًا لهذه النماذج ، يمكن تشتيت مستخلص الاختراع في الأطعمة أو المشروبات بحيث يتم تناول المدخول اليومي من العناصر الغذائية النشطة بيولوجيًا ، والتي تعتمد بشكل أساسي على نوع الطعام الذي يتم فيه تشتيت المستخلص ، والتأثير المطلوب والأنسجة المستهدفة . تعتمد كمية المكملات الغذائية التي سيستهلكها الفرد للحصول على تأثير مفيد أيضًا على واحد أو أكثر من العوامل المختلفة مثل نوع المكمل و / أو الغذاء وعمر المستهلك ووزنه.

قد يكون المكمل الغذائي للإعطاء عن طريق الفم في كبسولات ، أو كبسولات جيلاتينية ، أو كبسولات طرية ، أو أقراص ، أو أقراص مغلفة بالسكر ، أو حبوب ، أو معاجين أو معينات ، أو علكة ، أو محاليل أو مستحلبات صالحة للشرب ، أو شراب أو هلام ، بجرعة حوالي 0.1 إلى 100٪ من مستخلص الاختراع ، والذي يمكن بعد ذلك أن يؤخذ مباشرة بالماء أو بأي وسيلة أخرى معروفة. قد يشمل هذا الملحق أيضًا محليًا ، أو مثبتًا ، أو مضادًا للأكسدة ، أو مادة مضافة ، أو نكهة ، أو تلوينًا.

من المُدرك أن بعض سمات الاختراع ، والتي تم وصفها ، من أجل التوضيح ، في سياق تجسيدات منفصلة ، يمكن أيضًا توفيرها في توليفة في نموذج واحد. على العكس من ذلك ، يمكن أيضًا توفير ميزات مختلفة للاختراع ، للإيجاز ، موصوفة في سياق نموذج واحد ، بشكل منفصل أو في أي توليفة فرعية مناسبة أو مناسبة في أي تجسيد آخر موصوف للاختراع. بعض السمات الموصوفة في سياق تجسيدات مختلفة لا يجب اعتبارها سمات أساسية لتلك التجسيدات ، ما لم يكن التجسيد معطلاً بدون تلك العناصر.

كما هو مستخدم هنا ، قد تشتمل العملية أو المستخلص أو تركيبات الاختراع على خطوات أو مكونات أو أجزاء إضافية ، فقط إذا كانت الخطوات الإضافية أو المكونات أو الأجزاء لا تغير الخصائص الأساسية والجديدة للعملية المطلوبة والمستخلص والتركيبات. كما هو مستخدم هنا ، فإن صيغة المفرد "a" و "an" و "the" تتضمن مراجع الجمع ما لم ينص السياق على خلاف ذلك بوضوح.

تجسيدات وجوانب مختلفة للاختراع الحالي كما هو موضح أعلاه وكما هو مطلوب في قسم عناصر الحماية أدناه تجد دعمًا تجريبيًا في الأمثلة التالية.

1. تجفيف عصير المارولا

تم جمع ثمار المارولا من الأرض في غضون 10 أيام من وقت سقوط الثمار عن الأشجار وتم عصرها بواسطة مكبس هيدروليكي تحت 35 بار (معصرة زيتون Enorossi موديل 250). تم جمع العصير وتخزينه مجمداً عند -20 درجة مئوية لفترات مختلفة تصل إلى 3 سنوات. مباشرة قبل التجفيف ، تم إذابة الثلج من العصير ووضع المسام فوق صواني رقائق الألومنيوم ، لتشكيل طبقة موحدة ، بسمك 0.7 سم. تم وضع صواني تحتوي على العصير في فرن تفريغ (Tuttnauer ، معقم فرن جاف من طراز 11-900) ، تم ضبطه عند 57 درجة مئوية و 760 ملم زئبق ، لمدة 3 أيام. بعد التجفيف ، مع تحمل رطوبة 1٪ تقريبًا ، تم طحن المادة الصلبة ، لإنتاج مسحوق ، قابل للذوبان في الماء بسهولة. تم حفظ المسحوق في مجفف ، في درجة حرارة الغرفة ، لعدة أشهر.

2. الاستعدادات استخراج مارولا

أ. مستخلص الإيثانول (يُشار إليه هنا باسم "المستخرج الأول")

لتحضير المستخلص I ، تم سحق 15 جرامًا من عصير المارولا المجفف إلى مسحوق ، وعلق في 50 مل من الإيثانول بنسبة 50٪ ووضعه على شاكر لمدة 20 دقيقة. تم طرد المعلق بالطرد المركزي ونقل المادة الطافية إلى دورق مستدير. تكررت الخطوة مع 25 مل إضافية من 50٪ إيثانول. تم الجمع بين المادتين الطافيتين وإزالة الإيثانول وبعض الماء باستخدام مبخر دوار. يحتوي المحلول المائي الأخير 30 مل على FRAP (قوة مضادات الأكسدة المخفضة للأكسدة) قدرة مضادة للأكسدة تبلغ 1،390 مجم من مكافئ فيتامين C لكل 100 مل (3 أضعاف السعة المضادة للأكسدة مقارنة بـ 460 مجم مكافئ فيتامين C لكل 100 مل المقاسة في العصير الأصلي) . قد يتم إعادة تكوين المستخلص في الماء.

ب. جزء مستنفد بوليفينوليك (يُشار إليه هنا باسم "المستخلص الثاني"):

لتحضير المستخلص الثاني ، تم تمرير عصير المارولا الكامل من خلال 8 طبقات من القماش القطني وطرده لإزالة بقايا أنسجة الفاكهة. تم وضع 200 مل من العصير الصافي على 20 مل من عمود Sepabeads بمعدل تدفق قدره 0.4 مل / دقيقة. تم جمع 12 مل كسور. تم دمج الأجزاء التي تحتوي على نفس تركيز المواد الصلبة الذائبة الكلية (TSS) مثل العصير الصافي (12.9٪). كان النشاط المضاد للأكسدة FRAP المقاس في هذا الجزء هو 379 مجم من معادلات فيتامين C لكل 100 مل ، حوالي 83 ٪ من تلك التي تم قياسها في العصير الصافي المطبق على العمود.

ج. الكسر البوليفينولي (يشار إليه هنا باسم "المستخلص الثالث").

لتحضير المستخلص الثالث ، تم استخدام الاستخراج على دفعات لتحرير البوليفينول من خرز العمود الموصوف أعلاه. تم نقل الحبيبات إلى دورق زجاجي واسع القاع وخلطها بصرامة مع 85٪ من محلول الإيثانول. تمت استعادة المحلول الإيثانولي وتكررت الخطوة حتى يصبح محلول الاستخلاص عديم اللون. تم دمج المحاليل الإيثانولية المجمعة ، ووضعها في دورق دائري وتبخرها حتى تجف باستخدام مبخر دوار. تمت إذابة الفيلم الجاف في 1 مل ماء. كان للمنتج الناتج نشاط FRAP بمقدار 5.735 مجم من مكافئات فيتامين C لكل 100 مل ، حيث يكون 12 ضعفًا من النشاط المقاس في العصير الأصلي.

للحصول على مشروب المارولا المخصب بالبوليفينول ، تم خلط 15 مل من جزء العصير المنضب من مادة البوليفينول (المستخلص الثاني) مع جزء البوليفينول المعزول (المستخلص الثالث) ؛ تمت إضافة الماء إلى الحجم النهائي من 25 مل من شراب المارولا (يشتمل على المستخلصين الموصوفين في هذه الوثيقة الثاني والثالث) مع نشاط مضاد للأكسدة من FRAP يبلغ 446 مجم مكافئ فيتامين ج لكل 100 مل ، منها 50٪ ساهمت بفيتامين ج و 50٪ بواسطة البوليفينول ، مقارنة بـ 75٪ و 25٪ على التوالي في العصير الأصلي.

تم تحديد إجمالي البوليفينول بطريقة طيفية باستخدام طريقة Singleton المعدلة للأحجام الصغيرة [Singleton V L، et al، Am. ياء علم النمذجة وزراعة الكروم 16: 144-158 ، 1965]. خدم حمض الغاليك (GA) كمعيار. تم تحضير محلول مخزون GA في الماء بتركيز 2 ملي مولار. تم استخدام أحجام 10 و 20 و 40 و 60 ميكرولتر للمنحنى القياسي. ثم تم التعبير عن النتائج كمكافئات GA (GAE). من حين لآخر ، حل البيروجالول محل GA كمعيار.

3. طرق المختبر

تين. 1 يوضح إجمالي تركيز البوليفينول في كل من عصير المارولا المصفى والمستخلص الإيثانولي لعصير المارولا المجفف (المستخلص الأول) ومنتج تم الحصول عليه من خلال الجمع بين المستخلصين الموصوفين في هذه الوثيقة الثاني والثالث. كان التركيز الكلي 7.15 و 8.34 و 9.35 مجم من مكافئات حمض الجاليك (GAE) / مل على التوالي.

تين. 2 يعرض كروماتوجرام HPLC لعصير المارولا ومستخلصات العصير. تم غسل كل مستخلص عصير (1: 3) مع 80٪ ميثانول مع 2 ملي مولار NaF لاستخراج مضادات الأكسدة. تم طرد المعلق بالطرد المركزي وتم ترشيح المادة الطافية من خلال مرشح 0.45 ميكرومتر قبل الحقن. تم تحليل عينات من 20 ميكرولتر باستخدام نظام LaChrom Merck Hitachi HPLC ، والذي يتكون من مضخة L7100 ، وفرن عمودي L7350 (تم ضبطه عند 28 درجة مئوية) ، وخلاط مزيل الغاز L-7614 وحاقن يدوي Rheodyne ، إلى جانب كاشف الطول الموجي المتعدد (Jasco MD- 2010 Plus) والواجهة (Jasco LC-Net II / ADC) والبرامج العلمية (EZChrom Elite Client / Server الإصدار 3.1.6 الإصدار 3.1.6.2433). عمود Purospher®Star RP-18 مغطى بنهاية (خرطوشة LichroCART® مقاس 250 × 4 مم ، حجم جسيم 5 ميكرومتر) مع عمود حماية Lichrospher®100 RP-18 مغطى بطرف (خرطوشة LichroCART® 4 × 4 مم ، حجم جسيم 5 ميكرومتر ) استخدمت.

تم توصيل نهاية العمود بمجمع الكسور (Pharmacia Fine Chemicals، FRAC-100). تتكون المراحل المتنقلة من (أ) حمض الفوسفوريك (0.1٪) ، ودرجة الحموضة 2.4 ، و (ب) ميثانول ؛ تم ضبط تدرج الشطف على الانتقال من 0 إلى 100٪ ميثانول في 30 دقيقة. كان معدل التدفق 0.6 مل دقيقة⁻¹.

تم تقييم تركيز فيتامين سي من المنطقة الواقعة تحت قمم الكروماتوجرام المقابلة باستخدام فيتامين سي عالي الجودة HPLC (فلوكا) للمعايرة. كان الميثانول من فئة HPLC (LiChrosolv Merck) ؛ تمت تنقية المياه وتصفيتها باستخدام إجراءات معروفة ؛ كان حامض الفوسفوريك (فروتاروم) و NaF (سيغما) من الدرجة التحليلية. تم إنشاء مكتبة الفينولات القياسية باستخدام حمض الكاتشين والكلوروجينيك والكافيك والتانيك من سيجما وحمض 2-هيدروكسي بنزويك (الساليسيليك) وحمض الكيرسيتين 3-بيتا-جلوكوزيد وحمض إيلاجيك من فلوكا.

نظرًا لأن كروماتوجرام HPLC يشير إلى أن كل من المستخلصات الأول والثاني والثالث لها تركيبة فريدة فيما يتعلق بالمركبات الفينولية [الأحماض الفينولية (PA) والعفص (T)] وفيتامين ج. اختلفت المستخلصات الثلاثة بشكل كبير في تركيبتها المضادة للأكسدة مقارنة بالمستخلص الأصلي عصير.

تم أيضًا تحليل قدرة إزالة الجذور الحرة لمنتجات عصير المارولا بواسطة مقايسة DPPH [Malterud K M ، Farbort T L ، Huse ACE ، Bredo Sund R. تأثيرات مضادات الأكسدة والكسح الجذري لمفاصل arthraquinones والأنثورونات. علم العقاقير. 1993: 47: 77-85]. DPPH (1،1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl) هي مادة مولدة للجذور الحرة تُستخدم على نطاق واسع لمراقبة قدرات الكسح الجذور الحرة (قدرة المركب على التبرع بإلكترون) لمضادات الأكسدة المختلفة. يمتلك جذر DPPH لونًا بنفسجيًا عميقًا بسبب ضعف الإلكترون ، ويمكن اتباع المسح الجذري الطيفي بفقدان الامتصاص عند 517 نانومتر ، حيث يتم إنتاج الشكل الأصفر الباهت غير الجذري.

تم خلط قسامات منتج عصير مارولا (1.0 ميكرولتر) مع 1 مل من 0.1 مليمول DPPH / L في الإيثانول ، وتمت مراقبة التغيير في الكثافة البصرية عند 517 نانومتر بشكل مستمر. تمت مقارنة قدرة مستخلصات عصير المارولا على تنظيف الجذور الحرة بقدرة كسح الجذور الحرة لعصير المارولا المصفى (تين. 3 أ و 3 ب).

بتركيز 1.0 ميكرولتر / مل ، تسبب عصير المارولا المفلتر في انخفاض بنسبة 30٪ في الكثافة الضوئية عند 517 نانومتر ، بينما المنتج الذي تم الحصول عليه من خلال الجمع بين المستخلصين الموصوفين هنا 2 و 3 (على سبيل المثال ، عصير مارولا المخصب بمستويات عالية من البوليفينول) تسبب في انخفاض بنسبة 21٪ في الكثافة البصرية عند 517 نانومتر. تم عرض قدرة الكسح الجذري الأكثر بروزًا في المستخلص الأول ، مما أدى إلى انخفاض بنسبة 54 ٪ في الكثافة الضوئية عند 517 نانومتر (FIG. 3A). بتركيزات أعلى (2.0 ميكرولتر / مل) ، تسبب عصير المارولا المرشح والطرد المركزي في انخفاض بنسبة 60 ٪ في الكثافة البصرية عند 517 نانومتر. وبالمثل ، فإن المنتج الذي تم الحصول عليه من خلال الجمع بين المستخلصين الموصوفين في هذه الوثيقة II و III تسبب في انخفاض بنسبة 43٪ في الكثافة الضوئية عند 517 نانومتر ، وتم عرض قدرة الكسح الجذري الأكثر شهرة مرة أخرى بواسطة المستخلص الأول ، مما أدى إلى انخفاض بنسبة 89٪ في الكثافة البصرية. الكثافة عند 517 نانومتر (تين. 3 ب).

تم عزل البروتين الدهني منخفض الكثافة LDL من البلازما المشتقة من متطوعين أصحاء من سوية شحميات الدم ، عن طريق الطرد المركزي فائق التدرج الكثافة المتقطع [Aviram، M. (1983) فصل البروتين الدهني بالبلازما عن طريق التنبيذ الفائق المتدرج الكثافة المتقطع في مرضى فرط البروتين الشحمي. بيوتشيم. ميد. 30 ، 111-118]. تم غسل LDL عند d = 1.063 جم / مل ، وتم تحليله مقابل 150 مليمول / لتر NaCl ، 1 مليمول / لتر Na₂EDTA (الرقم الهيدروجيني 7.4) عند 4 درجات مئوية ثم يتم تعقيم LDL بالترشيح (0.45 ميكرومتر) ، وحفظه تحت النيتروجين في الظلام عند 4 درجات مئوية واستخدامه في غضون أسبوعين. تم تحديد تركيز بروتين LDL باستخدام كاشف Folin Phenol. قبل الأكسدة ، تم غسيل LDL ضد محلول ملحي خالي من EDTA ، الفوسفات المخزن مؤقتًا (PBS) ، ودرجة الحموضة 7.4 ، وعند 4 درجات مئوية.

تم تحضين LDL (100 ميكروغرام من البروتين / مل) لمدة عشر دقائق في درجة حرارة الغرفة مع زيادة تركيزات مستخلصات عصير المارولا. ثم ، 5 ميكرولتر / لتر من CuSO₄ تمت إضافة الأنابيب وحضنت لمدة ساعتين عند 37 درجة مئوية. في نهاية الحضانة ، تم تحديد مدى أكسدة LDL عن طريق قياس الكمية المتولدة من المواد المتفاعلة لحمض الثيوباربيتوريك (TBARS) وبيروكسيدات الدهون [Aviram M ، Vaya J. علامات لأكسدة البروتين الدهني منخفض الكثافة. طرق الانزيم. 2001 ؛ 335: 244-56 ؛ و Buege J.A، Aust S.D Microsomal lipid peroxidation. طرق الانزيم. 52: 302-310 (1978)]. يحلل اختبار بيروكسيد الدهون (PD) تكوين بيروكسيد الدهون من خلال قدرتها على تحويل اليود إلى اليود بعد الحضانة لمدة 18 ساعة عند 25 درجة مئوية ، كما تم قياسه بالطيف الضوئي عند 365 نانومتر [G. جورجنز. مقايسة طيفية لبيروكسيدات الدهون في البروتينات الدهنية في الدم باستخدام كاشف متوفر تجارياً. J. ليبيد الدقة. 30: 627-630 ، 1986].

تم قياس أكسدة LDL على أنها TBARS (تين. 4 ا) أو كتكوين بيروكسيدات الدهون (تين. 4 ب). أدت إضافة التركيزات المتزايدة لمستخلصات عصير المارولا إلى تثبيط أكسدة LDL الناتج عن أيونات النحاس بطريقة تعتمد على الجرعة. IC₅₀ كانت قيمة (تثبيط أكسدة LDL بنسبة 50 ٪) لعصير marula المرشح والطرد المركزي 0.80 ميكرولتر / مل لـ TBARS (تين. 5 أ) و 0.65 ميكرولتر / مل لبيروكسيدات الدهون (تين. 5 ب) تشكيل - تكوين. تم الحصول على نتائج أقل إلى حد ما بالنسبة للمستخلص الأول (0.50 ميكرولتر / مل لكل من TBARS وتكوين بيروكسيدات الدهون). على العكس من ذلك ، فإن IC₅₀ كانت قيمة المنتج التي تم الحصول عليها من خلال الجمع بين المستخلصين الموصوفين هنا II و III هي الأعلى (1.35 و 1.50 لـ TBARS و بيروكسيدات الدهون ، على التوالي).

تم تحضين J-774A.1 الضامة مسبقًا بمكافئات 10 و 30 ميكروغرام من GAE / مل من منتجات عصير المارولا ، ثم تم تحليل الخلايا لتصلبها ، والتي تم تقييمها على أنها حالة أكسدة البلاعم ، وامتصاص البلاعم للبروتينات الدهنية ، وتدفق الكوليسترول بوساطة HDL ، والتخليق الحيوي للكوليسترول

تم تحديد حالة الأكسدة الضامة عن طريق مقايسة التدفق الخلوي باستخدام ثنائي كلورو فلورسين ثنائي الأسيتات (DCFH-DA). DCFH-DA هي صبغة غير قطبية تنتشر في الخلايا. يتم تحللها في الخلايا إلى مشتق غير فلوري 2 ′ ، 7′-dichlorofluorescin (DCFH) ، وهو قطبي ومحاصر داخل الخلايا. تحت الإجهاد التأكسدي ، يتأكسد DCFH إلى DCF ، وهو مركب فلوري. J774 A.1 (2 × 10⁶) تم تحضين البلاعم بـ 2.5 × 10⁻⁵ مول / لتر DCFH-DA لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية. توقف التفاعل عن طريق الغسل باستخدام PBS عند 4 درجات مئوية. تم تحديد التألق الخلوي بجهاز قياس التدفق الخلوي (FACS-SCAN ، Becton Dickinson ، سان خوسيه ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية ). تم إجراء القياسات من 510 إلى 540 نانومتر بعد إثارة الخلايا عند 488 نانومتر باستخدام ليزر أيون الأرجون.

أدى احتضان J-774 A.1 الضامة لمدة 18 ساعة عند 37 درجة مئوية مع المستخلص الأول وعصير المارولا المصفى إلى تقليل الإجهاد التأكسدي الخلوي ، كما تم قياسه بواسطة مقايسة DCFH ، بنسبة 6٪ و 7٪ على التوالي. لم يكن للمنتج الذي تم الحصول عليه من خلال الجمع بين المستخلصين الموصوفين في هذه الوثيقة II و III أي تأثير على حالة الإجهاد التأكسدي للبلاعم (تين. 6).

تم تحضين LDL (1 مجم / مل) لمدة 18 ساعة عند 37 درجة مئوية مع 5 ميكرو مول / لتر من CuSO المحضر حديثًا₄. تم إنهاء الأكسدة عن طريق التبريد عند 4 درجات مئوية. تم تحديد مدى أكسدة LDL بواسطة مقايسة TBARS.

تم ربط LDL و Ox-LDL مع fluoroisothiocyanate (FITC) لدراسات الامتصاص الخلوي. تم غسيل البروتينات الدهنية (2.5 مجم بروتين / مل) طوال الليل عند 4 درجات مئوية مقابل عدة تغييرات في محلول البورات المحتوي على 0.1 مولار بورات ، 25 ملي رباعي بورات الصوديوم ، 75 ملي مول كلوريد الصوديوم ، الرقم الهيدروجيني 8.6. قبل الاقتران (ساعة واحدة) ، تم تغيير الرقم الهيدروجيني لمخزن غسيل الكلى إلى 9.4. تم إذابة فلوريسئين أيزوثيوسيانات (FITC ؛ Sigma-Aldrich) في ثنائي ميثيل فورماميد (Merck) وأضيف قطرة إلى محلول البروتينات الدهنية لإعطاء تركيز نهائي قدره 0.2 مجم / مل ثم حضنت لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة مع التحريك. تم فصل البروتينات الدهنية المقترنة بـ FITC عن FITC غير المقترن عن طريق كروماتوجرافيا استبعاد الحجم على عمود PD-10 (Amersham-Pharmacia Biotech) ، تمت التصفية التتابعية باستخدام محلول فوسفات 10 ملي مولار ، ودرجة الحموضة 8.0. تم استخدام البروتينات الدهنية المسمى FITC (2 مجم / مل) على الفور في دراسات الامتصاص.

تم تحضين J774 A.1 الضامة عند 37 درجة مئوية لمدة 3 ساعات باستخدام LDL مترافق مع FITC أو Ox-LDL بتركيز نهائي قدره 25 ميكروغرام من البروتين / مل. تم تحديد امتصاص البروتين الدهني عن طريق قياس التدفق الخلوي. تم إجراء قياسات التألق الخلوي التي تم تحديدها بواسطة FACS عند 510 نانومتر إلى 540 نانومتر بعد إثارة الخلايا عند 488 نانومتر باستخدام ليزر أيون الأرجون. تم قياس التألق الخلوي من حيث متوسط كثافة التألق (MFI).

احتضان J-774 A.1 الضامة لمدة 18 ساعة عند 37 درجة مئوية مع منتجات عصير المارولا (10 ميكروغرام / مل GAE) لم يكن له أي تأثير على امتصاص LDL بواسطة الضامة. عند تركيز أعلى من 30 ميكروغرام / مل من GAE ، فإن المنتج الذي يشتمل على المستخلصين الموصوفين في هذه الوثيقة فقط يقلل من امتصاص الضامة LDL الضامة بنسبة 9٪ (تين. 7). حضانة J-774 A.1 الضامة لمدة 18 ساعة عند 37 درجة مئوية مع المستخلص I ، منتج تم الحصول عليه عن طريق الجمع بين المقتطفات الموصوفة هنا الثاني والثالث وعصير المارولا المصفى ، إما عند 10 ميكروغرام / مل من GAE أو 30 ميكروغرام / مل GAE ، قلل من امتصاص الضامة لـ Ox-LDL بنسبة 12٪ و 7٪ (المستخلص الأول) ، وبنسبة 27٪ (عصير مارولا مع نسبة عالية من البوليفينول) ، وبنسبة 8٪ و 6٪ (عصير مارولا مصفى) ، على التوالي (تين. 8).

تم تحضين J774 A.1 الضامة مع [³H] - الكوليسترول المسمى (2 ميكروغرام / مل) لمدة ساعة عند 37 درجة مئوية متبوعًا بغسل الخلية في PBS المثلج (× 3) ومزيد من الحضانة في غياب أو وجود 100 ميكروغرام من بروتين HDL / مل لمدة 3 ساعة عند 37 درجة مئوية. خلوية ومتوسطة [³تم تحديد كمية علامات H] وحساب تدفق الكوليسترول بوساطة HDL كنسبة [³H] -التسمية في الوسط / ([³H] -التسمية في الوسط + [³H] -التسمية في الخلايا). أدى احتضان J-774 A.1 الضامة لمدة 18 ساعة عند 37 درجة مئوية مع عصير المارولا المصفى (10 ميكروغرام / مل GAE) إلى زيادة تدفق الكوليسترول من البلاعم إلى HDL بنسبة 10٪. ومع ذلك ، فإن جميع منتجات عصير المارولا الأخرى لم تؤثر على تدفق الكوليسترول الناتج عن HDL في أي تركيز مستخدم (تين. 9).

تم تحضين J774 A.1 الضامة مع [³H] أسيتات ، متبوعًا باستخلاص الدهون الخلوية بالهكسان: الأيزوبروبانول (3: 2 ، حجم / حجم) والفصل بواسطة كروماتوجرافيا الطبقة الرقيقة (TLC) على ألواح هلام السيليكا. تم تصور بقع الكوليسترول غير المستقر بواسطة بخار اليود ، وتم كشطها في قوارير التلألؤ ، وتم عدها للنشاط الإشعاعي. حضانة J-774 A.1 الضامة لمدة 18 ساعة عند 37 درجة مئوية مع المستخلص I ، منتج تم الحصول عليه عن طريق الجمع بين المقتطفات الموصوفة هنا الثاني والثالث وعصير المارولا بعد الترشيح ، كل ذلك بتركيز 30 ميكروغرام / مل GAE ، مخفض التخليق الحيوي للكوليسترول في الضامة بنسبة 18٪ و 7٪ و 8٪ على التوالي (تين. 10).

تم الحصول على فئران الوليد Wistar من مختبرات Harlan. تم تحضير ثقافات الخلايا النجمية الأولية للجرذان من القشرة الدماغية لجرذان ويستار حديثي الولادة بعمر 1-2 يوم. تمت الموافقة على هذا الإجراء من قبل لجنة رعاية الحيوان المؤسسية واستخدامها. تم طلاء الخلايا النجمية في 24 لوح بئر عند 100،000 أو 80،000 خلية / 0.5 مل / بئر ، على التوالي. أجريت جميع التجارب في وجود 2٪ مصل (FCS). تم استنشاق الوسط الأصلي للخلايا وأضيف وسطًا جديدًا إلى الخلايا. التخفيفات من ح₂ا₂ وعصائر المارولا في وسط النمو تم تصنيعها طازجة من محاليل المخزون قبل كل تجربة مباشرة وتم استخدامها على الفور. تم إجراء كل علاج في tetraplicates. التركيز النهائي لـ H₂ا₂ كان 200 ميكرومتر.

فحوصات ثقافة الخلايا العصبية

تحديد قابلية الخلية للبقاء - تم تحديد صلاحية الخلية باستخدام مجموعة مقايسة لونية تجارية (مقدمة من شركة Roche) ، بناءً على قياس نشاط اللاكتات ديهيدروجينيز (LDH) المنطلق من العصارة الخلوية للخلايا التالفة إلى المادة الطافية.

التأثيرات الوقائية للمستخلصات - لتحديد الظروف المثلى (من حيث الوقت والجرعة) للعصائر لممارسة تأثيرها الوقائي المفترض ، تمت معالجة الخلايا مسبقًا بكميات مختلفة من كل منتج عصير لفترات زمنية مختلفة وتأثيرات حماية المنتجات ضد الإجهاد المؤكسد تم إنشاؤها بواسطة H.₂ا₂ تم تقييم. تمت إضافة العصائر (بتخفيف 1: 125 ، 1: 500 ، 1: 800 و 1: 4000) بالتزامن مع H₂ا₂ أو تحضينها مسبقًا لمدة ساعتين مع الخلايا قبل إضافتها. تمت مراقبة السمية بعد 20 ساعة. تين. 11 يوضح أنه في جميع التركيزات المختبرة ولجميع منتجات العصير ، يصاحب ذلك إضافة العصائر مع H₂ا₂ ليس وقائيا. ومع ذلك ، قبل الحضانة لمدة 2 ساعة مع الخلايا قبل H.₂ا₂ بالإضافة إلى ذلك أدى إلى تأثيرات وقائية لجميع العصائر ، حيث أظهر المستخلص الأول النشاط الوقائي الأكثر فعالية عند استخدامه بتركيزات منخفضة (1: 4000).

تجارب مع مستخلصات المارولا بتركيزات منخفضة (التخفيفات 1: 1000-1: 8000) - تم إجراء التجارب التالية بتركيزات أقل من المنتجات (التخفيفات 1: 1000-1: 8000) ، بجرعة 55-450 ميكروغرام / 100 مل فيتامين مكافئات C.

تم اختبار تأثيرات فترة ما قبل الحضانة (2 ساعة مقابل 6 ساعات) من الخلايا مع منتجات العصير وتركيز المنتج (1: 1000-1: 8000). تين. 12 يوضح أنه في حين أن ساعتين من الحضانة المسبقة مع المستخلص تسببت في حماية 20٪ فقط في جميع التركيزات المختبرة ، فإن 6 ساعات من الحضانة المسبقة أدت إلى حماية أكثر من 80٪.

في تجربة أخرى ، تم اختبار تأثير زمن الحضانة والتركيز مع تخفيفين (1: 1000 أو 1: 4000) من كل عصير ، عصير مارولا مفلتر وخلاصة I ، لمدة 2 أو 6 ساعات قبل إضافة H₂ا₂ (تين. 13). تم العثور على المستخرج الأول الأكثر فعالية (حماية 70٪). أظهر عصير المارولا المفلتر أيضًا نشاطًا وقائيًا كبيرًا (حماية بنسبة 40 ٪).

4. البروتوكول السريري

تم تجنيد عشرة متطوعين أصحاء (الجدول 1) ، غير مدخنين ، ولا يعانون من اضطرابات التمثيل الغذائي ، مع مستويات كوليسترول البلازما أقل من 200 مجم / ديسيلتر وتحت عدم العلاج بالعقاقير ، للدراسة. وقعت جميع المواد على استمارة موافقة قبل الدخول في الدراسة. تمت الموافقة على بروتوكول الدراسة من قبل لجنة رامبام هلسنكي (رقم 2452).

استهلك جميع المشاركين 200 مل من العصير المبستر يوميًا مع وجبتهم الرئيسية لمدة 3 أسابيع. واصلت جميع المواد المشمولة في الدراسة أسلوب حياتهم المعتاد. تم قياس ضغط الدم في الوقت صفر (قبل دخول الدراسة) ، بعد 3 أسابيع ، وفي نهاية الدراسة (بعد 4 أسابيع من الغسل). تم جمع عينات الدم (25 مل) للتحليل في الوقت صفر (خط الأساس - قبل دخول الدراسة) ، بعد 3 أسابيع من استهلاك عصير المارولا ، و 4 أسابيع بعد نهاية استهلاك العصير (الغسل).

تم تجميد جميع عينات مصل الدم عند -80 درجة مئوية حتى التحليل. تم إجراء التحليلات الكيميائية الحيوية في مصل الدم باستخدام مجموعات التشخيص المتاحة تجارياً ، وتضمنت قياس الجلوكوز والكالسيوم ووظائف الكلى (BUN والكرياتينين والكهارل النتريوم والكاليوم) ووظائف الكبد (CK و AST والبيليروبين الكلي) والكوليسترول الكلي و HDL —الكولسترول ، والكوليسترول الضار ، والدهون الثلاثية الكلية. تم قياس مستويات حمض اليوريك (كمضاد أكسدة محتمل) في مصل الدم باستخدام مجموعة أدوات متاحة تجاريًا.

تحليلات الإجهاد التأكسدي لعينات المصل

قوة مضادات الأكسدة الحديديك (FRAP): تم تحضير كاشف FRAP العامل بخلط 25 مل من محلول الأسيتات ، 2.5 مل 2،4،6-تريبريديل- s- تريازين (TPTZ) ، و 2.5 مل FeCL₃*6H₂يا الحل. المحاليل المائية من 1 ملي مولار FeSO₄* 7 ح₂تم استخدام O بتركيزات 5 و 10 و 20 و 30 و 40 و 50 و 100 ملي مولار لمنحنى معايرة قياسي. تم تسخين كاشف FRAP (المحضر حديثًا) إلى 37 درجة مئوية وتمت قراءة فراغ الكاشف عند 593 نانومتر قياسًا ضوئيًا طيفيًا. تم خلط عينة المصل (30 ميكرولتر) مع 90 ميكرولتر من الماء. ثم تمت إضافة 900 ميكرولتر من كاشف FRAP وخلطها بسرعة. تمت قراءة الامتصاصية بعد 0.5 ثانية وكل 15 ثانية خلال 4 دقائق. التغيير في الامتصاصية (أ_{593 نانومتر}) بين الكثافة الضوئية النهائية والكثافة الأولية لكل عينة ثم تم ربطها بالحديد⁺² التركيز في المنحنى القياسي (تم اختباره بالتوازي).

مصل بيروكسيد الدهون

تم تخفيف المصل بنسبة 1: 4 (v: v) بمحلول ملحي مخزّن من الفوسفات (PBS) ثم تم تحضينه في غياب أو وجود 100 مليمول / لتر من مولد الجذور الحرة 2،2′-azobis-2-medinopropane hydrochloride (AAPH) لمدة ساعتين عند 37 درجة مئوية ، تم تحديد بيروكسيد الدهون في الدم عن طريق قياس الكمية المتولدة من المواد المتفاعلة لحمض الثيوباربيتوريك (TBARS) وبيروكسيدات الدهون باستخدام طرق القياس الطيفي. يحلل اختبار بيروكسيد الدهون (PD) تكوين بيروكسيد الدهن من خلال قدرتها على تحويل اليود إلى اليود بعد الحضانة لمدة 18 ساعة عند 25 درجة مئوية ، كما تم قياسه بالطيف الضوئي عند 365 نانومتر.

كما أوضحت نتائج الدراسة ، لم يكن للاستهلاك أي تأثير معنوي على ضغط الدم. لم تتغير مستويات الجلوكوز والكالسيوم في الدم بشكل كبير بعد الاستهلاك ولم تتأثر اختبارات وظائف الكلى معنويا بالاستهلاك المستمر. وبالمثل ، أدى الاستهلاك إلى عدم تغيير جوهري في مستوى الكهارل في الدم ووظائف الكبد. ومع ذلك ، انخفضت مستويات الدهون الثلاثية في الدم بنسبة 7 ٪ بعد الاستهلاك ، مع استمرار التأثير بعد فترة الغسل التي تبلغ 4 أسابيع (الجدول 2).

قلل الاستهلاك على مدى 3 أسابيع بشكل ملحوظ (P <0.02) من تركيزات الكوليسترول الكلي في مصل الدم بنسبة 8 ٪ (الجدول 3).

قد يكون هذا الانخفاض مرتبطًا بانخفاض كبير (p <0.01) في مستويات الكوليسترول الضار بنسبة 17٪. ومع ذلك ، لم تستمر هذه التخفيضات بعد فترة الانقطاع ، حيث عادت مستويات الكوليسترول الكلي ، وكذلك مستويات الكوليسترول الضار ، إلى مستوياتها الأساسية بعد 4 أسابيع من فترة التهدئة ، والتي لم يستهلك خلالها الشخص العصير. ارتفع مستوى الكوليسترول الحميد في الدم بشكل ملحوظ (p <0.03) بنسبة 10٪ بعد تناول العصير واستمر هذا الانخفاض ، وإن كان بدرجة أقل (بنسبة 7٪ فقط) ، بعد فترة الانقطاع.

يوضح الجدول 4 التأثير على الإجهاد التأكسدي في الدم. تعرضت عينات المصل للأكسدة التي يسببها AAPH. انخفض تكوين بيروكسيد الدهن معنويا (p <0.03) في عينات المصل المشتقة بعد الاستهلاك لمدة 3 أسابيع. ومع ذلك ، لم يستمر هذا التأثير بعد فترة الغسل. في عينات المصل المأخوذة بعد الاستهلاك ، زادت "القوة المضادة للأكسدة" ، المقاسة بواسطة مقايسة FRAP ، خلال فترة الاستهلاك ، بل وزادت أكثر ، لتصل إلى ارتفاع كبير بنسبة 8٪ بعد فترة الغسل. قد يكون الانخفاض في الإجهاد التأكسدي في الدم نتيجة لانخفاض تركيزات الدهون في الدم (أقل الركيزة المتاحة للأكسدة ، وكذلك تأثير مضادات الأكسدة القوية لعصير المارولا).

يتم تلخيص تأثير استهلاك العصير المبستر على الإجهاد التأكسدي في الدم في تين. 14 أ-ب. تعرضت عينات المصل للأكسدة التي يسببها AAPH. تشكيل بيروكسيد الدهون (تين. 14 أ) انخفض معنويا (p <0.03) في عينات المصل المأخوذة بعد تناول العصير على مدى 3 أسابيع. لم يستمر هذا التأثير بعد فترة الغياب. قدرة الطاقة المضادة للأكسدة ، تقاس بمقايسة FRAP (تين. 14 ب) ، زادت في عينات المصل المأخوذة بعد تناول عصير المارولا المبستر ، وبشكل مفاجئ ، ازدادت بشكل أكبر ، ووصلت إلى ارتفاع كبير بنسبة 8 ٪ ، بعد فترة الغسل.