תמציות של Sclerocarya birrea (US8445040B2)

ההמצאה הנוכחית מתייחסת בדרך כלל לתמציות מסיסות במים המתקבלות מה- Sclerocarya birrea פירות ושימושים בהם.

המרולה (Sclerocarya birrea, משפחה: Anacardiaceae) הוא עץ נשיר בגודל בינוני עד גדול עם גזע זקוף וכתר מעוגל. הצמח משמש כיום כמקור מזון כפי שהיה בשימוש בימי קדם. הפרי של המרולה הוא אכיל, בדרך כלל נאכל גולמי או מעובד למגוון מוצרי מזון כמו ג'לי וגם מבושלים לבירה אלכוהולית, הידועה על ידי אנשי הוונדה בשם מוקומבי.

שימושים ויישומים רפואיים של המרולה כוללים שימוש בקליפות ובעלים לטיפול במחלות הקשורות לחיידקים וסוכרת [1,2] וגם שלשולים כפי שנחשף בפרסום פטנט אוסטרלי מס. 2000/29790 [3].

פרסום בינלאומי מס. WO 03/092634 [4] חושף את השימוש בשמן מרולה בתכשירים מקומיים לעיכוב היווצרות רקמת צלקת על העור.

הוכח כי פרי המרולה הוא בעל יכולת נוגדת חמצון כוללת מוגברת [5], בעל יכולת לעכב חמצון פוספוליפידים ובעל פעילות ניקוי רדיקליים של אניונים סופראוקסיד [6]. פרסום בינלאומי מס. WO 06/097806 [7] מגלה שחלקים שונים של צמח המרולה כגון קליפת עץ, עלים, פירות, שורשים וזרעים מכילים נוגדי חמצון הידרופוביים, אשר ניתן להשיג מהצמח באמצעות חיה ו/או מיצוי.

פרסומים

למרות שפרי המרולה דווח כעשירים בנוגדי חמצון, עד כה לא דווח על הכנה ושימוש בתמציות של פרי המרולה בטיפול במחלות והפרעות כגון טרשת עורקים ומחלות ניווניות.

התוצאות המפתיעות, המתגלות כאן, מצביעות על כך שהתמציות המוכנות ממיץ מרולה אינן רק יציבות לתקופות זמן ארוכות אלא יותר מכך בעלות יתרונות טיפוליים שונים ובמקרים מסוימים טובים מאלה שמציג מיץ מרולה לא מטופל. תמציות ההמצאה הוכיחו כי משפיעות לטובה על שומני הדם, כפי שמוצג על ידי הפחתה ב-LDL בסרום, על ידי עלייה ב-HDL בסרום, ועל ידי הפחתה של עקה חמצונית בסרום; התמציות הוכיחו יעילות בטיפול בנזקי עקה חמצונית, טרשת עורקים, ניוון עצבי והפרעות הקשורות לכך.

תמציות מיץ מרולה של ההמצאה הנוכחית יעילות גם למניעת ניוון עצבי, כפי שמעידה השפעתם המגנה על תאי עצב החשופים לנזק של רדיקלים חופשיים.

ההמצאה הנוכחית חושפת גם את השימוש בתמציות מיץ מרולה כנוגדי חמצון לשימוש במגוון רב של יישומים, למשל, שימוש בתוספי מזון להולדת, למשל, השפעה אנטי-אתרוגנית אצל נבדקים בריאים ולא בריאים (בני אדם ולא-בריאים). חיות אדם) וכסוכנים לטיפול או מניעה של מחלות הקשורות לנוירודגנרטיביות.

לפיכך, בהיבט אחד של ההמצאה הנוכחית, ניתנת תמצית המופקת מפרי המרולה, למעט הזרע, התמצית מתקבלת בתהליך הכולל הנחת מיץ שנאסף מפרי המרולה למיצוי עם אחד או יותר מימיים. תמיסה, ממס אורגני ותערובת שלו, כלומר, להשיג על ידי כך ממיץ המרולה תמצית בעלת היתרונות הביולוגיים הרצויים.

ניתן לסנן את מיץ המרולה המתקבל מפרי המרולה לפני המיצוי על מנת להסיר שאריות פרי כגון שאריות זרעים וחומרים בלתי מסיסים אחרים. ניתן לבצע את הסינון בכל שיטה המוכרת בתחום לסינון משקאות, כגון, אך לא רק, סינון אדמה דיאטומית (DE) וסינון ממברנות.

בכמה התגלמויות, מיץ המרולה המתקבל מפרי המרולה מפוסטר לפני המיצוי על מנת להאט את הצמיחה של חיידקים הוא המיץ על ידי הפחתת מספר הפתוגנים הבריאים בו. בדרך כלל, הפסטור בוצע על ידי חשיפת המיץ לטמפרטורות מתחת לרתיחה. בחלק מהתגלמויות, הפסטור מושג על ידי שיטת פסטור אחת או יותר המוכרת בתחום, למשל, נשלטת על ידי סוכנויות לאומיות לבטיחות מזון (כגון USDA בארצות הברית וסוכנות תקני המזון בבריטניה). כמה דוגמאות לא מגבילות כוללות פסטור בטמפרטורה גבוהה/זמן קצר (HTST), פסטור של אורך חיי מדף (ESL), פסטור בטמפרטורה גבוהה במיוחד (UHT או טיפול בחום במיוחד), ופסטור אצווה או בור.

המונח 'תמצית' כפי שמשמש כאן מתייחס למוצר מסיס במים המתקבל מכל חלק של פרי המרולה או כל חלק שמקורו בו, למעט הזרע, אך כולל אחד או יותר של מזוקרפ, אנדוקארפ, קליפה (קליפה חיצונית עבה), ו/או עור (exocarp), על ידי שימוש בשיטה שנבחרה מביטוי, ספיגה, מריחה, ליאופיליזציה, זיקוק וכל שילוב של שניים או יותר מהתהליכים הללו.

החומרים המופקים, בנפרד או בשילוב, יכולים להיווצר לכל תכשיר רצוי כולל תמיסה מימית, מוצק כגון אבקה יבשה, גרגיר או גלולה, תרכיז, למשל, נוזל למחצה בעל עקביות סירופית אשר עשויה ניתן להשיג על ידי אידוי כל או כמעט כל תכולת הנוזל של התמצית, או כל צורה אחרת. בדרך כלל, שיטות מיצוי החומר עשויות להשתנות בשינויים המחויבים בהתאם לגיל פרי המרולה, תת-הסוג, עונת הקטיף, אזור הגידול, החומרים להפקה, יציבותם וגורמים נוספים המוכרים לבעל מקצוע.

בכמה התגלמויות, התמצית של ההמצאה מתקבלת על ידי מגע של מיץ המרולה עם תמיסה מימית כדי לחלץ ממנו מרכיב אחד או יותר או שילוב שלו. ה"תמיסה המימית" עשויה להיות ברוב המונחים הכלליים מים (בחלק מהתגלמויות מים בריכוזי מינרלים טבעיים משתנים) או מים מזוקקים או מטוהרים (מזוקקים או מטוהרים בכל שיטה אחרת), תמיסת מלח מימית הכוללת מלח אחד או יותר או תערובת של מים עם ממס קוטבי אחד או יותר מתערבב מים, למשל, C₁-C₄ אלכוהול וקטונים.

בכמה התגלמויות, הממס המימי הוא תערובת של מים ולפחות אלכוהול אחד. בכמה מהתגלמויות נוספות, הממס במים הוא תערובת של מים ואתנול, כאשר יחס המים:אתנול הוא אחד של 1:1, 1:2. . . 1:5. . . 1:10. . . 1:100 . . . 1:1,000 . . . וכו', בהתאמה, או 2:1, 3:1. . . 5:1. . . 10:1. . . 100:1. . . 1,000:1 וכו', בהתאמה. כל יחס ביניים אחר כלול גם כן.

המיצוי עשוי לחילופין להשתמש בממס אורגני לבד או בשילוב עם ממס אחר כזה. בחלק מההתגלמויות, תהליך המיצוי הוא תהליך רב-שלבי שבו פרי המרולה (המיץ) נקשר תחילה עם ממס אחד ולאחר מכן עם ממס אחר כדי למקסם את התשואה או להעשיר את התמצית באחד או יותר מהרכיבים הרצויים.

בדרך כלל, הממס האורגני הוא לפחות אלכוהול אחד כגון מתנול, אתנול ואלכוהול איזופרופיל, או קטון כגון אצטון. כאשר נעשה שימוש באתנול, ניתן להשתמש בו כתמיסה אתנולית מימית, למשל, של בין כ-40 ל-60% אתנול. ניתן להשתמש בתמיסות דומות גם עם הממיסים האורגניים האחרים הניתנים לערבב במים. התמצית המתקבלת בעקבות תמצית אלכוהולית נקראת כאן תמצית I.

יש להבין בהקשר של ההמצאה הנוכחית כי המיצוי האתנולי, או כל מיצוי אחר המתואר כאן, עשוי להתבצע בכל טמפרטורה נוחה. יהיה ברור לבעלי מקצוע כי מיצוי יעיל יותר יתרחש אם המיץ נערבל, כגון על ידי ערבוב או ניעור, ו/או אם התערובת מחוממת לטמפרטורה מעל טמפרטורת החדר (מעל 25-27 מעלות צלזיוס .). ניתן להשתמש גם בטמפרטורות מיצוי נמוכות יותר, כגון אלו מתחת לטמפרטורת החדר. בחלק מההתגלמויות, תהליך החילוץ מתבצע בטמפרטורת החדר או בטמפרטורה שבין 25 ל-30 מעלות צלזיוס.

כמו כן, יש להבין בהקשר של ההמצאה הנוכחית כי החילוץ יכול להתבצע לכל פרק זמן נוח.

אדם מיומן בתחום יכיר עוד יותר שהתהליך להשגת התמצית של ההמצאה עשוי לכלול חיתוך פרי המרולה כדי להשיג חתיכות קטנות יותר מהפרי השלם מהם ניתן לקבל תמציות באחת או יותר משיטות מיצוי אחרות, כגון זִקוּק. לחלופין, ניתן להשיג את התמצית על ידי ביטוי, כלומר על ידי לחיצה מהמיץ מהפרי.

לפיכך, בהתגלמויות מסוימות, לפני מגע עם המיץ עם ממס אחד או יותר כפי שנחשף, ניתן לטפל בפרי, כלומר פרי שלם, למעט הזרע, או כל חלק ממנו, על ידי מריחה, ביטוי או כל תהליך אחר.

את המיץ המתקבל מפרי המרולה ניתן לאחסן לפני מיצוי או טיפול מקדים, למשל, ייבוש, לפרקי זמן ממושכים. האחסון עשוי להיות בכל טמפרטורה ותנאי, שבהם טריות המיץ נשמרת ונמנע או ממוזער פירוק. טמפרטורות כאלה עשויות להיות מעל או מתחת לטמפרטורת החדר. בחלק מהתגלמויות, המיץ עשוי להישמר במקרר למשך מספר שבועות או במקפיא למשך מספר שנים. כאשר משתמשים בהקפאה של המיץ, התהליך עשוי לכלול את השלב של הפשרה של המיץ לפני מיצוי או עיבוד.

ייבוש המיץ יכול להיעשות על ידי חימום המיץ הנוזלי תחת ואקום, או בלחץ אטמוספרי, בטמפרטורה מוגדרת מראש שיכולה להיות טמפרטורת החדר או מעל הסביבה, באצווה אחת או בכמויות קטנות יותר כדי לשלוט בתכולת הלחות של התמצית. בדוגמה שאינה מגבילה המתוארת כאן, הייבוש מושג על ידי יציקת המיץ על משטח כגון מגש, במקרים מסוימים מכוסה בנייר כסף (למשל, נייר אלומיניום) כדי לחמם את המיץ בצורה אחידה ולהשיג שכבה אחידה במידה ניכרת. של תמצית מרולה מיובשת.

התרכיז הרטוב (סירופ) המתקבל בייבוש הוא בצבע צהבהב עד חום כהה, תלוי בריכוז ובסוג התמצית. החומר המיובש נרטב בקלות ויש לו צבע זהוב עד חום כהה בהיר בהתאם לסוג התמצית. החומר היבש מסיס במים.

תמצית המרולה שמתקבלת לאחר מכן מכילה כמויות משתנות של חומר נדיף, כאשר הכמויות תלויות באורך תקופת הייבוש ובטמפרטורה המופעלת. מבלי לרצות להיות כבולים לתיאוריה, עם הסרת הרכיבים הנדיפים, התרכיז, כלומר בחלק מההתגלמויות, תמצית האבקה, מכיל בהשוואה למיץ הפירות השלם ריכוז גבוה יותר של רכיבים פעילים אשר נוכחות ושילוב מספקים את הפעילות הגבוהה אשר אינו נצפה בכל הפרי ואשר מודגם כאן.

לפיכך, התמצית מתקבלת בתהליך הכולל מגע של מיץ מרולה עם ממס מימי כהגדרתו לקבלת תרחיף ממנו ניתן להפריד תמצית נוזלית.

בכמה התגלמויות, התהליך הכולל:

בכמה התגלמויות, המיץ שנאסף מיובש או מטופל מראש כפי שפורסם לפני המיצוי.

בהתגלמויות נוספות, ההפרדה של התמצית הנוזלית של שלב (iii) עשויה להיות בדרך של צנטריפוגה של התרחיף שהושג בשלב (ii) כדי להפריד את התמצית הנוזלית כסופרנטנט ממסה מוצקה.

בכמה התגלמויות נוספות, התהליך כולל:

בהתגלמויות נוספות, התהליך הכולל:

בכמה התגלמויות אחרות, התהליך הכולל:

יש לציין כי ניתן לחזור על ההפרדה של התמצית הנוזלית יותר מפעם אחת, עם כמות שנייה של ממס זהה או שונה, וניתן לשלב את הסופרנטנטנטים המתקבלים מכל שלב ולטפל עוד יותר כדי לבודד, לרכז או לעבד את לחלץ. לפיכך, ניתן לשלב שניים או יותר סופרנטנטים ולהסיר את הממס ו/או חלק מהמים, למשל באמצעות כל שיטה אחת להסרת ממס.

כאשר חומר הפרי המוצא כולל חומר מוצק או במקרים בהם פרי המרולה עובד לאבקה יבשה או מיובשת למחצה או לצורה מגוררת, ניתן להפריד את התמצית לפחות לשלב מוצק ולפאזה מימית, כאשר לכל שלב יש הפעילות הביולוגית כפי שמתוארת כאן.

תמצית ההמצאה, המתקבלת על ידי שימוש בתהליך אחד או יותר כמפורט כאן, עשויה להתאפיין באחד או יותר מהדברים הבאים:

לפיכך, ההמצאה מספקת גם תמצית מרולה המאופיינת ביכולת נוגדת חמצון FRAP של מינימום של 1,000 ו-1,500 מ"ג שוות ערך ויטמין C ל-100 מ"ל. זאת בהשוואה ל-FRAP שנמדד עבור מיץ מרולה לא מטופל של בין 260 ל-600 מ"ג ויטמין C ל-100 מ"ל. במילים אחרות, קיבולת ה-FRAP של תמצית לפי ההמצאה היא בין פי 2 ל-3 מהפעילות הנצפית במיץ המקורי שאינו מטופל.

בכמה התגלמויות, התמצית בעלת קיבולת ה-FRAP לעיל היא תמצית I.

ההמצאה הנוכחית מספקת גם תמצית בעלת חלק פוליפנולי מדולדל, התמצית האמורה מוגדרת כאן כתמצית II. ניתן להפריד את החלק הפוליפנולי, כאן כתמצית III, ממיץ המרולה על ידי, למשל, כרומטוגרפיה של מיץ המרולה כדי להשפיע על תמצית II (מדולדלת) ותמצית III (חלק פנולי מופרד). בחלק מההתגלמויות, דלדול השבר הפוליפנולי מושג על ידי תהליך הכולל סינון של מיץ המרולה, למשל על ידי העברת המיץ דרך שכבה אחת או יותר של בד גבינה (בדרגות שונות, למשל, מארג פתוח לאריגה עדינה במיוחד בשימוש על פי שכבה אחת או יותר של בד גבינה. את האיכות והכמות של המיץ), אופציונלי צנטריפוגה של המיץ המסונן כדי להסיר שאריות פרי, החלת המיץ השקוף על כרומטוגרפיה, למשל, כרומטוגרפיה של עמודות באמצעות עמודות עמוסות ב-Sepabeads חילופי יונים ושרפים סופחים, או C₁₈-סיליקה או שרפים מלוכדים לאינטראקציה הידרופוביה וכרומטוגרפיה הפוכה של שלב, איסוף השברים ושילוב שברים בעלי אותם מוצקים מסיסים הכוללים (TSS).

בהתגלמויות מסוימות, ניתן לאסוף את חלק הפוליפנול מהמדיום המשמש לכרומטוגרפיה, למשל, מחרוזי העמודים, על ידי ערבוב המדיום, למשל, חרוזים, עם תמיסה אלכוהולית (אתנול, מתנול וכו'). ניתן לשלב את השברים האלכוהוליים ולהתאדות עד ליובש.

על פי התגלמויות מסוימות, על מנת לקבל תמצית עם יחס פוליפנולים:ויטמין C מוגבר, ניתן להפריד את החלק הפוליפנולי (כלומר, תמצית III) מהמיץ ולאחר מכן להוסיף אותו לחלק המדולדל של פוליפנול (כלומר, תמצית II). . בכמה התגלמויות אחרות, תמצית II משולבת עם תמצית I.

בחלק מהתגלמויות, תמצית II מאופיינת ביכולת נוגדת חמצון של FRAP של לפחות בין 250 ל-500 מ"ג שוות ויטמין C ל-100 מ"ל.

כפי שמשמש כאן 'פוליפנולים' מתייחס לקבוצה של חומרים, המאופיינת בנוכחות של יותר מיחידת פנול אחת או אבן בניין לכל מולקולה. פוליפנולים מחולקים בדרך כלל לטאנינים הניתנים להידרוליזה (אסטרים של חומצה גאלית של גלוקוז וסוכרים אחרים) ופנילפרופנואידים, כגון ליגנינים, פלבנואידים וטאנינים מעובים. בהתגלמויות מסוימות, הפוליפנולים המתקבלים ממיץ המקולה כוללים טאנינים ניתנים להידרוליזה, קטכינים וחומצות הידרוקסינמיות ו/או נגזרות שלהם.

בהיבט נוסף שלה, ההמצאה הנוכחית מספקת שימוש בתמצית אחת לפחות של ההמצאה להכנת הרכב.

בהתגלמויות מסוימות, ההרכב הוא הרכב פרמצבטי.

בהתגלמויות נוספות, התמצית היא המרכיב הפעיל הקיים בהרכב יחד עם נשא, מדלל או חומר עזר מקובלים מבחינה פרמצבטית.

בחירת הנשא תיקבע בחלקה על ידי התמצית המסוימת, כמו גם על ידי השיטה המסוימת המשמשת למתן ההרכב המרכיב אותו. בהתאם, קיים מגוון רחב של ניסוחים מתאימים של ההרכב הפרמצבטי של ההמצאה הנוכחית. הפורמולציות הבאות למתן פומי, אירוסול, פרנטרלי, תת עורי, תוך ורידי, תוך שרירי, תוך-פראטונאלי, פי הטבעת ונרתיק הם רק דוגמה ומופת ואינם מגבילים בשום אופן.

פורמולציות המתאימות למתן דרך הפה יכולות להיות מורכבות מ(א) תמיסות נוזליות, כגון כמות יעילה של התמצית המומסת במדללים, כגון מים, תמיסת מלח או מיץ תפוזים; (ב) כמוסות, שקיות, טבליות, כוסות ותכשירים, שכל אחד מכיל כמות קבועה מראש של התמצית, כמוצקים או גרגירים; (ג) אבקות; (ד) תרחיפים בנוזל מתאים; וכן (ה) תחליבים מתאימים. פורמולציות נוזליות עשויות לכלול מדללים, כגון מים וכוהלים, למשל, אתנול, אלכוהול בנזיל והאלכוהולי הפוליאתילן, עם או בלי תוספת של חומר שטח מקובל מבחינה פרמצבטית, חומר מרחף או חומר מתחלב. צורות כמוסות יכולות להיות מסוג ג'לטין קשיח או רך רגיל המכילות, למשל, חומרים פעילי שטח, חומרי סיכה וחומרי מילוי אינרטיים, כגון לקטוז, סוכרוז, סידן פוספט ועמילן תירס. צורות טבליות יכולות לכלול אחת או יותר של לקטוז, סוכרוז, מניטול, עמילן תירס, עמילן תפוחי אדמה, חומצה אלגינית, תאית מיקרו-גבישית, שיטה, ג'לטין, גואר גאם, סיליקון דו-חמצני קולואידי, נתרן קרוסקרמלוז, טלק, מגנזיום סטארט, סידן סטראט, אבץ. , חומצה סטארית וחומרי עזר אחרים, חומרי צבע, מדללים, חומרי חציצה, חומרי פירוק, חומרי לחות, חומרים משמרים, חומרי טעם וריח ונשאים תואמים פרמקולוגית. צורות לכסניות יכולות להכיל את המרכיב הפעיל בטעם, בדרך כלל סוכרוז ושיטה או טרגאנט, כמו גם פסטילים הכוללים את החומר הפעיל בבסיס אינרטי, כגון ג'לטין וגליצרין, או סוכרוז ושיטה, תחליבים, ג'לים וכדומה המכילים , בנוסף לתמצית, נשאים כאלה המוכרים בתחום.

ניתן להפוך את התמציות או התכשירים של ההמצאה הנוכחית, למשל, תכשיר פרמצבטי, לבד או בשילוב עם רכיבים מתאימים אחרים לניסוחי אירוסול למתן באמצעות שאיפה. ניתן להכניס תכשירי אירוסול אלו לחומרי הנעה מקובלים בלחץ, כגון דיכלורודיפלואורומתאן, פרופאן, חנקן וכדומה. הם עשויים גם להיות מנוסחים כתרופות עבור תכשירים ללא לחץ, כגון נבולייזר או מרסס.

פורמולציות המתאימות למתן פרנטרלי כוללות תמיסות הזרקה סטריליות איזוטוניות מימיות ולא מימיות, שיכולות להכיל נוגדי חמצון, מאגרים, בקטריוסטטים ומומסים שהופכים את התכשיר לאיזוטוני עם הדם של הנמען המיועד, וסטרילי מימי ולא מימי. תרחיפים הכוללים חומרים מרחפים, ממיסים, חומרי עיבוי, מייצבים וחומרים משמרים. ניתן לתת את התרכובת בדילול מקובל מבחינה פיזיולוגית בנשא תרופתי, כגון נוזל סטרילי או תערובת של נוזלים, כולל מים, מי מלח, דקסטרוז מימי ותמיסות סוכר קשורות, אלכוהול, כגון אתנול, איזופרופנול או אלכוהול הקסדציל, גליקולים, כגון פרופילן גליקול או פוליאתילן גליקול, גליצרול קטלים, כגון 2,2-דימתיל-1,3-דיוקסולן-4-מתנול, אתרים, כגון פולי(אתילןגליקול) 400, שמן, חומצת שומן, שומן אסטר חומצה או גליצריד, או גליצריד חומצת שומן אצטיל עם או בלי תוספת של חומר שטח מקובל מבחינה פרמצבטית, כגון סבון או חומר ניקוי, חומר מרחף, כגון פקטין, קרבומרים, מתיל-צלולוזה, הידרוקסיפרופיל-מתיל-צלולוזה, או קרבוקסי-מתיל-צלולוזה, או חומרים מתחלבים ו תוספים פרמצבטיים אחרים.

שמנים, שניתן להשתמש בהם בניסוחים פרנטרליים, כוללים שמנים נפט, מן החי, צמחי או סינתטיים. דוגמאות ספציפיות לשמנים כוללות בוטנים, סויה, שומשום, זרעי כותנה, תירס, זית, פטרולאטום ומינרלים. חומצות שומן מתאימות לשימוש בניסוחים פרנטרליים כוללות חומצה אולאית, חומצה סטארית וחומצה איזוסטארית. אתיל אולאט ואיזופרופיל מיריסטט הם דוגמאות לאסטרים מתאימים של חומצות שומן. סבונים מתאימים לשימוש בתכשירים פרנטרליים כוללים מלחי מתכת אלקלית שומנית, אמוניום וטריאתנולמין, וחומרי ניקוי מתאימים כוללים (א) חומרי ניקוי קטיוניים כמו, למשל, דימתיל דיאלקיל אמוניום הלידים, ואקליל פירידיניום הלידים, (ב) חומרי ניקוי אניונים כגון. , למשל, אלקיל, אריל, אולפין סולפטים, אלקיל, אולפין, אתר ומונוגליצרידים סולפטים וסולפוסוצ'ינטים, (ג) חומרי ניקוי לא-יוניים כגון, למשל, תחמוצות אמינים שומניות, חומצות שומן אלקנולאמידים ופוליאוקסי-אתילן פוליפרופילן קופולימרים, (ד) חומרי ניקוי אמפוטריים כגון, למשל, אלקיל-β-aminopriopionates, ומלחי אמוניום רבעוני 2-אלקיל-אימידאזולין, ו-(3) תערובות שלהם.

התכשירים הפרנטרליים מכילים בדרך כלל כ-0.5 עד כ-25% ממשקל התמצית בתמיסה. ניתן להשתמש בחומרים משמרים וחומרים מתאימים בניסוחים כאלה. על מנת למזער או להעלים את הגירוי באתר ההזרקה, תרכובות כאלה עשויות להכיל חומר פעיל שטח לא-יוני אחד או יותר בעלי מאזן הידרופילי-ליפופיל (HLB) של כ-12 עד כ-17. כמות חומרי השטח בתכשירים כאלה נעה בין כ-5 עד כ-15% במשקל. חומרים פעילי שטח מתאימים כוללים אסטרים של חומצת שומן פוליאתילן סורביטן, כגון סורביטן מונוולאט והתוספות במשקל מולקולרי גבוה של תחמוצת אתילן עם בסיס הידרופובי, שנוצרו על ידי עיבוי של תחמוצת פרופילן עם פרופילן גליקול. ניתן להציג את התכשירים הפרנטרליים במיכלים אטומים במינון יחיד או במינון רב, כגון אמפולות ובקבוקונים, וניתן לאחסן אותם במצב מיובש בהקפאה (ליופיליזציה) המצריך רק תוספת של המנשא הנוזל הסטרילי, למשל מים. , להזרקות, מיד לפני השימוש. ניתן להכין תמיסות ותמיסות הזרקה מיידיות מאבקות, גרגירים וטבליות סטריליות מהסוג שתואר קודם לכן.

ניתן להפוך את התמציות וההרכבים של ההמצאה הנוכחית לתכשירים הניתנים להזרקה. הדרישות לנשאים פרמצבטיים יעילים לתכשירים הניתנים להזרקה ידועות היטב לבעלי מיומנות רגילה בתחום. לִרְאוֹת פרמצבטיקה ורוקחות, J. B. Lippincott Co., Philadelphia, Pa., Banker and Chalmers, עורך, עמודים 238-250 (1982), וכן מדריך ASHP על תרופות להזרקה, באחר, 4^ה' עורך, עמודים 622-630 (1986).

בנוסף, ניתן להפוך את התמציות של ההמצאה הנוכחית לנרות על ידי ערבוב עם מגוון בסיסים, כגון בסיסים מתחלבים או בסיסים מסיסים במים. פורמולציות המתאימות למתן נרתיקי עשויות להיות מוצגות כפסרים, טמפונים, קרמים, ג'לים, משחות, קצפים או פורמולות תרסיס המכילות, בנוסף למרכיב הפעיל, נשאים כאלה הידועים במקצוע כמתאימים.

כאמור לעיל, ניתן לייצר, להציג ו/או לאחסן את התמציות וההרכבים של ההמצאה בכל צורה שהיא, כלומר בצורה של נוזל, תרכיז, אבקה יבשה, תמיסה, אמולסיה או תמיסת מניות או רכז מניות.

בכמה התגלמויות, ההרכב הפרמצבטי מיועד לטיפול או מניעה של לפחות מחלה או הפרעה אחת הקשורה לנזק של עקה חמצונית.

עקה חמצונית היא תוצאה של חוסר איזון בהומאוסטזיס פרו-אוקסידנטים/נוגד חמצון שמוביל ליצירת מיני חמצן תגובתיים רעילים. רדיקלים חופשיים נוצרים כאשר חמצן יוצר אינטראקציה עם מולקולות מסוימות ומתחיל תגובת שרשרת של נזק בין רכיבים תאיים חשובים. לפיכך, דלקת ותהליכי החמצון קשורים זה בזה. בנוסף, עקה חמצונית יכולה לגרום לציטוטוקסיות של תאי דם, לעורר שחרור של ציטוקינים דלקתיים ולגרום לייצור של גורמי גדילה. מתח חמצוני ממלא תפקיד קריטי ביצירת פלאקים ויחד עם דלקת כלי דם אינהרנטית עשויה להיות מנבא חזק לטרשת עורקים.

לפיכך, כפי שמשמש כאן, 'נזק מתח חמצוני' מתייחס לנזק לתאים, רקמות ו/או איברים של בעל חיים, כולל בני אדם, הנגרם על ידי חוסר איזון בין ייצור חמצן תגובתי לבין היכולת של מערכת ביולוגית בקלות. ניקוי רעלים מתוצרי הביניים התגובתיים או תקן בקלות את הנזק שנוצר. לרוב, הפרעות במצב חיזור תקין זה עלולות לגרום להשפעות רעילות באמצעות ייצור של פרוקסידים ורדיקלים חופשיים הפוגעים בכל או ברכיבים מסוימים של התא, כולל חלבונים, שומנים ו-DNA.

בחלק מההתגלמויות, הנזק של עקה חמצונית קשורה להפרעה או מחלה שנבחרה מטרשת עורקים, מחלת פרקינסון, אי ספיקת לב, אוטם שריר הלב, מחלות או הפרעות נוירודגנרטיביות, מחלות עיניים, תסמונת עייפות כרונית ואחרות.

טרשת עורקים, הגורם המוביל לתחלואה ולתמותה בקרב אנשים בעלי אורח חיים מערבי, מתפתחת כתוצאה מגורמי סיכון שונים. היפרכולסטרולמיה היא גורם סיכון מרכזי לטרשת עורקים והפחתה בריכוז הכולסטרול בפלזמה על ידי טיפול תרופתי מפחיתה שכיחות קרדיווסקולרית. הנגע הטרשתי מאופיין בעקה חמצונית מואצת ויצירת סוג חמצן תגובתי (ROS), אשר תוקף שומנים בליפופרוטאין, וכן במקרופאגים עורקים. שינוי חמצוני של ליפופרוטאין בצפיפות נמוכה (LDL) ממלא תפקיד מפתח בפתוגנזה של טרשת עורקים. LDL מחומצן (Ox-LDL) תורם עיקרי להתפתחות נגעים טרשת עורקים, מכיוון שהוא ממריץ הצטברות כולסטרול מקרופאגים ויצירת תאי קצף. בניגוד לאטרוגניות של LDL, רמות ליפופרוטאין בצפיפות גבוהה בסרום (HDL) קשורות ביחס הפוך לסיכון לטרשת עורקים. HDL מפעיל השפעה מעכבת על חמצון LDL והשפעה זו עשויה להיות קשורה לאנזים הקשור אליו paraoxonase 1 (PON1).

טרשת עורקים היא גם התהליך או ההפרעה הכרוכים בהצטברות של רובד בחלק הפנימי של העורקים, כולל אלה בלב, במוח, בזרועות, ברגליים ובאגן. לפיכך, המונח עשוי להתייחס גם להצטברות מתקדמת של תאי שריר חלק, תאי חיסון (לדוגמה, לימפוציטים, מקרופאגים או מונוציטים), מוצרי שומנים (לדוגמה, ליפופרוטאינים או כולסטרול), מוצרי פסולת סלולריים, סידן או חומרים אחרים בתוך רירית פנימית של עורק, וכתוצאה מכך היצרות או חסימה של כלי הדם והתפתחות של מחלות הקשורות לטרשת עורקים.

מאחר שטרשת עורקים מתבטאת בתוך עורקים גדולים ובינוניים, טיפול או מניעה משפיעים לרוב על התפתחות מצב של דלקת כרונית בתוך העורקים.

תמצית ההמצאה מתאימה אפוא גם לטיפול ומניעה של מצבים לרבות טרשת עורקים של העורקים הכליליים הגורמים למחלת עורקים כליליים, אוטם שריר הלב, פקקת כלילית ותעוקת חזה; טרשת עורקים המספקת את מערכת העצבים המרכזית הגורמת לשבץ ואיסכמיה מוחית חולפת; טרשת עורקים של מחזור הדם ההיקפי הגורם לקלאודיקציה לסירוגין ולגנגרנה; טרשת עורקים של העורק של זרימת הדם הפלכנית הגורמת לאיסכמיה mesenteric; והיצרות עורק הכליה.

לפיכך, הרכב ההמצאה מתאים יותר לשימוש בטיפול או מניעה של לפחות מחלה או הפרעה אחת הקשורה לאחד או יותר מריכוזי טריגליצרידים שומנים בדם, ריכוזי כולסטרול בסרום וריכוזי כולסטרול כללי ו-LDL בסרום וירידה ב-HDL- ריכוזי כולסטרול.

כפי שמשמש כאן, מחלה או הפרעה כזו הקשורה לעלייה בריכוזי טריגליצרידים של שומנים בדם, ריכוזי כולסטרול בסרום וריכוזי כולסטרול ו-LDL בסרום וירידה בריכוזי HDL-כולסטרול, כרוכים ברמות כולסטרול גבוהות באופן חריג (היפרכולסטרולמיה), ו/או רמות גבוהות של LDL. או טריגליצרידים ו/או ריכוזים נמוכים יותר של HDL פונקציונלי, כגון מחלת לב כלילית או צורות אחרות של מחלות לב וכלי דם, וכן מחלות או הפרעות הכרוכות בהתפתחות של אטרומה בעורקים (כלומר, טרשת עורקים), כגון היפוכולסטרולמיה, מחלות כלי דם היקפיות, סוכרת ו לחץ דם גבוה.

מתח חמצוני נקשר גם למוות תאי עצב הקשור למצבים ניווניים שונים. מחלות ניווניות עצביות הן מצבים שבהם אובדים תאי המוח וחוט השדרה. בדרך כלל, ניוון עצבי מתחיל הרבה לפני שהמטופל חווה תסמינים כלשהם. מכיוון שתאי מוח נחשפים ללא הרף למיני חמצן תגובתיים הנוצרים על ידי חילוף חומרים חמצוני, מתח חמצוני הוא גם אחד הגורמים התורמים להפרעות נוירולוגיות של מבוגרים, והוא היה מעורב בפתוגנזה של חלק מההפרעות הללו כגון מחלת פרקינסון.

התמצית או ההרכב של ההמצאה משמשים גם לטיפול או למניעה של לפחות מחלה או הפרעה הקשורה לנוירודגנרטיבית אחת.

ה'מחלות או ההפרעות הנוירודגנרטיביות', בהקשר של ההמצאה הנוכחית, מתייחסות למצב אחד או יותר שבו אובדים תאי המוח וחוט השדרה כתוצאה מהידרדרות של נוירונים או מעטפת המיאלין שלהם, מה שמוביל לאורך זמן לתפקוד לקוי. ונכויות הנובעות מכך. לפיכך, המחלות או ההפרעות הנוירודגנרטיביות הן אלו הקשורות למצבים הגורמים לבעיות בתנועות, כגון אטקסיה, וגם למצבים המשפיעים על הזיכרון וקשורים לדמנציה. כמה דוגמאות לא מגבילות למחלות או הפרעות נוירודגנרטיביות כוללות אלכוהוליזם, מחלת אלכסנדר, מחלת אלפר, מחלת אלצהיימר, טרשת צדדית אמיוטרופית (מחלת לו גריג), אטקסיה טלנגיאקטזיה, מחלת באטן (הידועה גם כמחלת ספילמייר-ווגטן-סיוגרן-באטן), אנצפלופתיה ספוגית בקר (BSE), מחלת קנבון, שיתוק מוחין, תסמונת קוקיין, ניוון קורטיקובזאלי, מחלת קרויצפלד-יעקב, ניוון פרונטו-טמפורלי, מחלת הנטינגטון, דמנציה הקשורה ל-HIV, מחלת ה-HIV, מחלת ניוון קנדי, מחלת ה-Lewy Body-Kendy, Lewy Body-Degeneration. מחלת יוסף (אטקסיה ספינו-צרבלורית מסוג 3), ניוון מערכת נפוצה, טרשת נפוצה, נרקולפסיה, מחלת נימן פיק, מחלת פרקינסון, מחלת פליזאוס-מרצבכר, מחלת פיק, טרשת צדדית ראשונית, מחלות פריון, שיתוק על-גרעיני פרוגרסיבי, מחלת רפסום, מחלת סנדהוף, מחלת ילדים, ניוון משולב תת-חריף של חוט השדרה משני לפרניסיו אנמיה, אטקסיה של עמוד השדרה, ניוון שרירי עמוד השדרה, מחלת סטיל-ריצ'רדסון-אולשבסקי ו-tabes dorsalis.

בהיבט נוסף נוסף שלה, מספקת ההמצאה הנוכחית שיטה לטיפול או מניעה של לפחות מחלה או הפרעה אחת הקשורה לנזקי עקה חמצונית ביונק, הכוללת מתן ליונק כמות יעילה של תמצית לפי ההמצאה. או תכשיר פרמצבטי המורכב ממנו.

בהיבט נוסף של ההמצאה הנוכחית ניתנת שיטה לטיפול או מניעה של לפחות מחלה או הפרעה אחת הקשורה לאחד או יותר מריכוזי טריגליצרידים שומנים בדם, ריכוזי כולסטרול בסרום וריכוזי כולסטרול כללי ו-LDL בסרום וירידה ב-HDL. -ריכוזי כולסטרול ביונק, הכוללים מתן ליונק האמור כמות יעילה של תמצית לפי ההמצאה או תכשיר תרופתי המורכב ממנה.

באחד מהיבטים נוספים שלה, מספקת ההמצאה הנוכחית שיטה לטיפול או מניעה של לפחות מחלה או הפרעה אחת הקשורה נוירודגנרטיבית ביונק הכוללת מתן ליונק האמור כמות יעילה של תמצית לפי ההמצאה או תכשיר פרמצבטי הכולל מִזֶה.

בהיבט נוסף, ההמצאה הנוכחית מספקת נוגד חמצון הכולל את התמצית של ההמצאה.

בהיבט נוסף נוסף, ההמצאה הנוכחית מספקת חומר מפחית כולסטרול הכולל את התמצית של ההמצאה.

במסגרת ההמצאה הנוכחית, המונח "טיפול ו/או מניעה" מתייחס למתן כמות טיפולית של ההרכב של ההמצאה הנוכחית, אשר יעילה לשיפור תסמינים לא רצויים הקשורים למחלה, כדי למנוע ביטוי של מחלה כזו. תסמינים לפני התרחשותם, להאט את התקדמות המחלה, להאט את הידרדרות התסמינים, להגביר את תחילת תקופת ההפוגה, להאט את הנזק הבלתי הפיך הנגרם בשלב הכרוני המתקדם של המחלה, לעכב את הופעתה של האמור. שלב מתקדם, כדי להפחית את חומרת המחלה או לרפא אותה, כדי לשפר את שיעור ההישרדות או החלמה מהירה יותר, או כדי למנוע את התרחשות המחלה או שילוב של שניים או יותר מהבאים לעיל.

תמצית או תרכובת של ההמצאה יכולה להינתן בכל שיטה המוכרת לאדם מיומן בתחום. בדרך כלל, מתן של תמצית או תרכובת פרמצבטית המורכבת ממנה הוא בכמות יעילה של התמצית/ים הכלולות בהרכב. 'הכמות האפקטיבית' למטרות כאן נקבעת על פי שיקולים כפי שעשויים להיות ידועים בתחום. הכמות חייבת להיות יעילה להשגת האפקט הטיפולי הרצוי כמתואר לעיל, בהתאם, בין היתר, בסוג וחומרת המחלה המטופלת ובמשטר הטיפול. הכמות האפקטיבית נקבעת בדרך כלל בניסויים קליניים מתוכננים כראוי (למשל, מחקרים בטווח מינונים) והאדם הבקיא באומנות יידע כיצד לבצע ניסויים כאלה בצורה נכונה על מנת לקבוע את הכמות האפקטיבית. כידוע, כמות יעילה תלויה במגוון גורמים כולל הזיקה של הליגנד לקולטן, פרופיל התפוצה שלו בגוף, מגוון פרמטרים תרופתיים כגון זמן מחצית חיים בגוף, בתופעות לוואי לא רצויות, אם כל, על גורמים כמו גיל ומין וכו'.

ניתן להשתמש בתמצית ההמצאה גם להכנת תכשיר לשימוש במגוון יישומים שאינם פרמצבטיים. בחלק מההתגלמויות, ההרכב הוא תרכובת נוגדת חמצון לשימוש כחומר משמר למגוון רב של יישומים בתעשיית המזון, תעשיית הקוסמטיקה, טיפולים וכו', ולעיכוב חמצון LDL המושרה על ידי יוני נחושת במבחנה או in vivo.

התמצית המתוארת כאן עשויה לשמש בנוסף כתוסף תזונה או כרכיב פעיל של תוסף כזה. בחלק מהתגלמויות התוסף מתאים לצריכה הן לבני אדם והן לבעלי חיים שאינם אנושיים, לניהול רווחה וטיפול ומניעה של מצבים והפרעות הקשורים לנזק חמצוני.

בהקשר של ההמצאה הנוכחית, תוסף התזונה, בהתאם לאופיו ולצורתו הפיזית, למשל, ליפופיל או הידרופילי בטבעו, עשוי להכיל עוד אחד או יותר של חומרים מתחלבים, מייצבים, נוגדי חמצון ותוספים אחרים. נעשה שימוש בחומרים מתחלבים התואמים במזון, כמו פוספוליפידים, למשל לציטין, פוליאוקסיאתילן סורביטן מונו או טריסטיאראט, מונולאורט, מונופלמיטאט, מונו או טריולאט, מונו או דיגליצריד. ניתן להוסיף חומרים מתחלבים, מייצבים, נוגדי חמצון ותוספים אלו לתמצית ההמצאה בהתאם לשימוש הסופי בתמצית האמורה.

תוסף התזונה המתואר כאן עשוי להכיל גם חומרים ביו-אקטיביים סינתטיים או טבעיים כגון חומצות אמינו, חומצות שומן, ויטמינים, מינרלים, פוליפנולים וכו', שניתן להוסיף על ידי ערבוב יבש או על ידי ערבוב רטוב להרכב האמור לפני פסטור ו/או ייבוש.

בחלק מהתגלמויות, תוסף התזונה הוא נוסחה תזונתית מלאה, מוצר חלב, משקה צונן או יציב במדף, מים מינרלים או מטוהרים, משקה נוזלי, מרק, תוסף תזונה, תחליף ארוחה, בר תזונתי, ממתקים, חלב או מוצר חלב מותסס, יוגורט, אבקת חלב, מוצר תזונה אנטרלית, פורמולה לתינוקות, מוצר תזונתי לתינוקות, מוצר דגנים או מוצר מבוסס דגנים מותססים, גלידה, שוקולד, קפה, מוצר קולינרי כמו מיונז, רסק עגבניות או רטבים לסלט או מזון לחיות מחמד. על פי התגלמויות אלו, ניתן לפזר את תמצית ההמצאה במזונות או במשקאות כך שתהיה צריכה יומית של רכיבים תזונתיים ביו-אקטיביים, אשר תלויה בעיקר בסוג המזון בו מפוזרת התמצית, בהשפעה הרצויה וברקמת המטרה. . כמות תוסף המזון שיש לצרוך על ידי האדם כדי להשיג השפעה מועילה תלויה גם באחד או יותר מגורמים שונים כגון סוג התוסף ו/או המזון וגיל ומשקל הצרכן.

תוסף התזונה למתן דרך הפה עשוי להיות בקפסולות, כמוסות ג'לטין, כמוסות רכות, טבליות, טבליות מצופות סוכר, כדורים, משחות או פסטילים, חניכיים, או תמיסות או תחליבים לשתיה, סירופ או ג'ל, במינון של כ-0.1 עד 100% מהתמצית של ההמצאה, אשר לאחר מכן ניתן ליטול ישירות עם מים או בכל אמצעי ידוע אחר. תוסף זה עשוי לכלול גם ממתיק, מייצב, נוגד חמצון, תוסף, חומר טעם או חומר צבע.

מובן כי תכונות מסוימות של ההמצאה, המתוארות, לשם הבהירות, בהקשר של התגלמויות נפרדות, עשויות להיות מסופקות גם הן בשילוב בהתגלמות אחת. לעומת זאת, תכונות שונות של ההמצאה, המתוארות, לקיצור, בהקשר של התגלמות יחידה, עשויות להיות מסופקות גם בנפרד או בכל שילוב משנה מתאים או כמתאימה בכל התגלמות מתוארת אחרת של ההמצאה. תכונות מסוימות המתוארות בהקשר של התגלמויות שונות אינן נחשבות לתכונות חיוניות של התגלמויות אלה, אלא אם כן ההתגלמות אינה פועלת ללא אותם אלמנטים.

כפי שנעשה בו שימוש כאן, התהליך, התמצית או ההרכבים של ההמצאה עשויים לכלול שלבים נוספים או מרכיבים או חלקים, רק אם השלבים, המרכיבים או החלקים הנוספים אינם משנים את המאפיינים הבסיסיים והחדשים של התהליך, התמצית וההרכבים הנטענים. כפי שמשמש כאן, צורת היחיד "a", "an" ו-"the" כוללת הפניות ברבים, אלא אם כן ההקשר מכתיב בבירור אחרת.

התגלמויות והיבטים שונים של ההמצאה הנוכחית כפי שתוארו לעיל וכפי שנטען בסעיף התביעות שלהלן מוצאים תמיכה ניסיונית בדוגמאות הבאות.

1. ייבוש מיץ מרולה

פירות מרולה נאספו מהאדמה תוך 10 ימים מרגע שהפרי נפל מהעצים ונסחטו על ידי מכבש הידראולי מתחת ל-35 בר (בית בד של אנורוסי דגם 250). מיץ נאסף ואוחסן קפוא ב-20 מעלות צלזיוס לתקופות שונות עד 3 שנים. מיד לפני הייבוש, מיץ הופשר ונקב מעל מגשי נייר אלומיניום, ליצירת שכבה אחידה בעובי 0.7 ס"מ. מגשים המכילים את המיץ הוכנסו לתנור ואקום (Tuttnauer, סטריליזטור יבש בתנור דגם 11-900), שהוגדר על 57 מעלות צלזיוס ו-760 מ"מ כספית, לתקופה של 3 ימים. לאחר ייבוש, הנושא כ-1% לחות, החומר המוצק נטחן, כדי להניב אבקה, המסיסה בקלות במים. האבקה נשמרה במייבש, בטמפרטורת החדר, במשך מספר חודשים.

2. הכנות לתמצית מרולה

תמצית אתנולית (המכונה כאן 'תמצית I')

להכנת תמצית I, 15 גרם של מיץ מרולה מיובש נמעכו לאבקה, הושעו ב-50 מ"ל של 50% אתנול והונחו על שייקר למשך 20 דקות. התרחיף עבר צנטריפוגה והסופרנטנט הועבר לבקבוק עגול. השלב חזר על עצמו עם 25 מ"ל נוספים של 50% אתנול. שני הסופרנטנטים שולבו והאתנול וחלק מהמים הוסרו באמצעות מאייד סיבובי. לתמיסה המימית הסופית של 30 מ"ל הייתה יכולת נוגדת חמצון FRAP (כוח נוגד חמצון מפחית ברזל) של 1,390 מ"ג שוות ויטמין C ל-100 מ"ל (פי 3 מהיכולת נוגדת החמצון בהשוואה ל-460 מ"ג ויטמין C שווה ערך ל-100 מ"ל שנמדדו במיץ המקורי) . תמצית I עשויה להיות משוחזרת במים.

ב. שבר מדולדל פוליפנולי (המכונה כאן 'תמצית II'):

להכנת תמצית II, מיץ מרולה שלם הועבר דרך 8 שכבות של בד גבינה וצנטריפוגה להסרת פסולת רקמת פרי. 200 מ"ל מיץ צלול הונח על עמודת Sepabeads של 20 מ"ל בקצב זרימה של 0.4 מ"ל לדקה. נאספו חלקים של 12 מ"ל. שברים המכילים את אותו ריכוז מוצקים מסיסים (TSS) כמו המיץ השקוף (12.9%) שולבו. הפעילות נוגדת החמצון של FRAP שנמדדה בחלק זה הייתה 379 מ"ג שוות ערך ויטמין C ל-100 מ"ל, כ-83% מזו שנמדדה במיץ השקוף שהונח על העמוד.

ג. שבר פוליפנולי (המכונה כאן 'תמצית III').

להכנת תמצית III, נעשה שימוש במיצוי אצווה כדי לשחרר את הפוליפנולים מחרוזי העמודה שתוארו לעיל. החרוזים הועברו לבקבוק זכוכית תחתון רחב וערבבו בקפדנות עם תמיסת אתנול 85%. התמיסה האתנולית הוחזרה והשלב חזר על עצמו עד שתמיסת המיצוי הייתה חסרת צבע. התמיסות האתנוליות שנאספו אוחדו, הונחו בבקבוקון עגול ואידוו ליובש בעזרת מאייד סיבובי. הסרט היבש הומס ב-1 מ"ל מים. למוצר שהתקבל הייתה פעילות FRAP של 5,735 מ"ג שוות ערך ויטמין C ל-100 מ"ל, כלומר פי 12 מהפעילות שנמדדה במיץ המקורי.

לקבלת משקה מרולה מועשר בפוליפנול, ערבבו 15 מ"ל של חלקיק מיץ מדולדל בפוליפנול (תמצית II) עם החלק הפוליפנולי המבודד (תמצית III); מים נוספו לנפח סופי של 25 מ"ל משקה מרולה (הכולל את התמציות המתוארות כאן II ו-III) עם פעילות נוגדת חמצון של FRAP של 446 מ"ג שוות ערך ויטמין C ל-100 מ"ל, מתוכם, 50% נתרמו על ידי ויטמין C ו-50% על ידי פוליפנולים, בהשוואה ל-~75% ו-25%, בהתאמה, במיץ המקורי.

סך הפוליפנולים נקבעו באופן ספקטרופוטומטרי בשיטת Singleton שונה עבור נפחים קטנים [Singleton V L, et al, Am. J. Emology and Viticulture 16:144-158, 1965]. חומצה גאלית (GA) שימשה כסטנדרט. תמיסה של GA הוכנה במים בריכוז של 2 מ"מ. נפחים של 10, 20, 40 ו-60 מיקרוליטר שימשו לעקומה הסטנדרטית. לאחר מכן, התוצאות הובאו כמקבילות GA (GAE). מדי פעם, פירוגלול החליף את GA כסטנדרט.

3. שיטות במבחנה

תאנה. 1 מציג את ריכוז הפוליפנול הכולל בכל אחד ממיץ המרולה המסונן, תמצית אתנולית של מיץ מרולה מיובש (תמצית I) ומוצר המתקבל בשילוב התמציות המתוארות כאן II ו-III. הריכוז הכולל היה 7.15, 8.34 ו-9.35 מ"ג של שווי חומצה גאלית (GAE)/ml, בהתאמה.

תאנה. 2 מציג את כרומטוגרמות HPLC של מיץ מרולה ותמציות מיץ. כל תמצית מיץ נשטפה (1:3) עם 80% מתנול בתוספת 2 mM NaF כדי לחלץ את נוגדי החמצון. התרחיף עבר צנטריפוגה והסופרנטנט סונן דרך מסנן 0.45 מיקרומטר לפני ההזרקה. דגימות של 20 μL נותחו באמצעות מערכת LaChrom Merck Hitachi HPLC, המורכבת ממשאבה L7100, תנור עמודה L7350 (מוגדר ב-28 מעלות צלזיוס), מיקסר-מפיג גז L-7614 ו-Rheodyne מזרק ידני, יחד עם גלאי רב-גלים-MD- (Jasco MD). 2010 פלוס), ממשק (Jasco LC-Net II/ADC) ותוכנה מדעית (EZChrom Elite Client/Server גרסה 3.1.6 build 3.1.6.2433). עמוד Purospher®Star RP-18 בעל קצה קצה (מחסנית LichroCART® 250×4 מ"מ, גודל חלקיקים של 5 מיקרומטר) עם עמוד הגנה Lichrospher®100 RP-18 בעל קצה (מחסנית LichroCART® 4×4 מ"מ, גודל חלקיקים של 5 מיקרון ) שומשו.

סוף עמודה חובר לאספן שברים (Pharmacia Fine Chemicals, FRAC-100). השלבים הניידים כללו (A) חומצה זרחתית (0.1%), pH 2.4 ו-(B) מתנול; שיפוע הפליטה נקבע לעבור מ-0 ל-100% מתנול תוך 30 דקות. קצב הזרימה היה 0.6 מ"ל דקות⁻¹.

ריכוז ויטמין C הוערך מהאזור מתחת לפסגות הכרומטוגרמה המקבילות באמצעות ויטמין C (Fluka) בדרגת HPLC לכיול. מתנול היה בדרגת HPLC (LiChrosolv Merck); מים טוהרו וסוננו באמצעות נהלים ידועים; חומצה זרחתית (Frutarom) ו-NaF (Sigma) היו בדרגה אנליטית. הספרייה הסטנדרטית של פנולים נבנתה באמצעות קטצ'ין, חומצה כלורוגנית, קפאית וטאנית מ-Sigma, וחומצה 2-hydroxybenzoic (סליצילית), קוורצטין-3-β-גלוקוזיד וחומצה אלגית מ-Fluka.

כפי שמציינים כרומטוגרמות HPLC לכל תמציות I, II, III היה הרכב ייחודי ביחס לתרכובות פנוליות [חומצות פנוליות (PA) וטאנינים (T)] וויטמין C. שלושת התמציות נבדלו באופן משמעותי בהרכב נוגד החמצון שלהן בהשוואה למקור. מיץ.

יכולת סילוק רדיקלים חופשיים של מוצרי מיץ מרולה נותחה גם על ידי מבחן DPPH [Malterud K M, Farbort T L, Huse ACE, Bredo Sund R. השפעות נוגדות חמצון ורדיקליות של ארתרקינונים ואנתורונים. פַרמָקוֹלוֹגִיָה. 1993: 47: 77-85]. DPPH (1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl) הוא חומר היוצר רדיקלים חופשיים שנמצא בשימוש נרחב לניטור יכולות ניקוי הרדיקלים החופשיים (היכולת של תרכובת לתרום אלקטרון) של נוגדי חמצון שונים. לרדיקל DPPH יש צבע סגול עמוק בשל האלקטרון הפגוע שלו, וניתן לעקוב אחר ניקיון רדיקלי באופן ספקטרופוטומטרי על ידי אובדן הספיגה ב-517 ננומטר, מכיוון שנוצרת הצורה הלא רדיקלית הצהובה החיוורת.

מנות מוצרי מיץ מרולה (1.0 μl) עורבבו עם 1 מ"ל של 0.1 מ"ל DPPH/L באתנול, והשינוי בצפיפות האופטית ב-517 ננומטר נוטר ברציפות. היכולת של תמציות מיץ מרולה לסלק רדיקלים חופשיים הושוותה ליכולת ניקוי הרדיקלים החופשיים של מיץ מרולה מסונן (איורים. 3A ו-3B).

בריכוז של 1.0 μl/ml, מיץ מרולה מסונן גרם לירידה של 30% בצפיפות האופטית ב-517 ננומטר, ואילו מוצר שהושג על ידי שילוב של התמציות II ו-III המתוארות כאן (למשל, מיץ מרולה מועשר ברמות גבוהות של פוליפנולים) גרמו לירידה של 21% בצפיפות האופטית ב-517 ננומטר. יכולת הסרת הרדיקלים המדהימה ביותר הוצגה על ידי תמצית I, אשר גרמה לירידה של 54% בצפיפות האופטית ב-517 ננומטר (תאנה. 3א). בריכוזים גבוהים יותר (2.0 μl/ml), מיץ מרולה מסונן וצנטריפוגה גרמו לירידה של 60% בצפיפות האופטית ב-517 ננומטר. באופן דומה, התוצר שהושג על ידי שילוב התמציות המתוארות כאן II ו-III גרר ירידה של 43% בצפיפות האופטית ב-517 ננומטר, ויכולת הסרת הרדיקלים המדהימה ביותר הוצגה שוב על ידי תמצית I, שגרמה לירידה של 89% בצפיפות האופטית. צפיפות ב-517 ננומטר (תאנה. 3B).

LDL בודד מפלסמה שמקורה במתנדבים בריאים בנורמוליפידמיים, על ידי אולטרה-צנטריפוגציה של שיפוע צפיפות לא רציף [Aviram, M. (1983) הפרדת ליפופרוטאין בפלזמה על ידי אולטרה-צנטריפוגציה של דרגת צפיפות בלתי רציפה בחולים היפרליפופרוטאין. Biochem. Med. 30, 111-118]. ה-LDL נשטף ב-d=1.063 גרם/מ"ל, עבר דיאליזה כנגד 150 mmol/L NaCl, 1 mmol/L NaCl₂EDTA (pH 7.4) ב-4 מעלות צלזיוס. לאחר מכן ה-LDL עוקר על ידי סינון (0.45 מיקרומטר), נשמר מתחת לחנקן בחושך ב-4 מעלות צלזיוס והשתמש בו תוך שבועיים. ריכוז החלבון LDL נקבע עם מגיב Folin Phenol. לפני החמצון, ה-LDL עבר דיאליזה כנגד תמיסת מי מלח נטולת EDTA, תמיסת מלח מאוחסת פוספט (PBS), pH 7.4, וב-4 מעלות צלזיוס.

LDL (100 מיקרוגרם חלבון/מ"ל) הודגר במשך עשר דקות בטמפרטורת החדר עם ריכוזים גדלים של תמציות מיץ מרולה. לאחר מכן, 5 מיקרומול/ליטר של CuSO₄ הוסף והצינורות הודגרו במשך שעתיים ב-37 מעלות צלזיוס. בתום הדגירה, מידת חמצון ה-LDL נקבעה על ידי מדידת הכמות שנוצרה של חומרים תגובתיים חומצה thiobarbituric (TBARS) ושל שומנים פרוקסידים [Aviram M, Vaya J. מרקרים לחמצון ליפופרוטאין בצפיפות נמוכה. שיטות אנזימול. 2001; 335:244-56; ו Buege J. A., Aust S. D. חמצון ליפידים מיקרוזומליים. שיטות אנזימול. 52: 302-310 (1978)]. מבחן ליפיד פרוקסיד (PD) מנתח את היווצרות שומנים חמצן לפי יכולתם להפוך יודיד ליוד לאחר דגירה של 18 שעות ב-25 מעלות צלזיוס, כפי שנמדד ספקטרופוטומטרית ב-365 ננומטר [G. יורגן. בדיקה ספקטרופוטומטרית עבור שומנים חמצן בליפופרוטאין בסרום באמצעות ריאגנט זמין מסחרי. J. Lipid Res. 30: 627-630, 1986].

חמצון LDL נמדד כ-TBARS (תאנה. 4א) או כיצירת שומנים חמצן (תאנה. 4ב). תוספת של ריכוזים גדלים של תמציות מיץ מרולה עיכבה חמצון LDL המושרה על ידי יוני נחושת באופן תלוי מינון. ה-IC₅₀ (עיכוב של חמצון LDL ב-50%) עבור מיץ מרולה מסונן וצנטריפוגה היה 0.80 μl/mL עבור TBARS (תאנה. 5א) ו-0.65 μl/mL עבור פרוקסיד השומנים (תאנה. 5ב) היווצרות. תוצאות מעט נמוכות יותר התקבלו עבור תמצית I (0.50 μl/mL הן עבור TBARS והן עבור היווצרות שומנים בדם). להיפך, ה-IC₅₀ הערך עבור מוצר שהושג על ידי שילוב של תמציות II ו-III המתוארות כאן היה הגבוה ביותר (1.35 ו-1.50 עבור TBARS ועבור פרוקסידים ליפידים, בהתאמה).

מקרופאגים J-774A.1 הודגרו מראש עם 10 ו-30 מיקרוגרם GAE מקבילים/מ"ל של מוצרי מיץ מרולה, ולאחר מכן נותחו התאים עבור האטרוגניות שלהם, שהוערכה כמצב חמצוני של מקרופאגים, ספיגת מקרופאגים של ליפופרוטאינים, פליטת כולסטרול בתיווך HDL , וביוסינתזה של כולסטרול

מצב החמצון של המקרופאג נקבע על ידי ה-flow-cytometric assay עם dichlorofluorescin-diacetate (DCFH-DA). DCFH-DA הוא צבע לא קוטבי שמתפזר לתאים. בתאים הוא עובר הידרוליזה לנגזרת הלא פלואורסצנטית 2',7'-dichlorofluorescin (DCFH), שהיא קוטבית וכלואה בתוך התאים. תחת לחץ חמצוני, DCFH מתחמצן ל-DCF, שהיא תרכובת ניאון. J774 A.1 (2×10⁶) מקרופאגים הודגרו עם 2.5×10⁻⁵ mol/L DCFH-DA למשך 30 דקות ב-37 מעלות צלזיוס. התגובה הופסקה על ידי שטיפות עם PBS ב-4 מעלות צלזיוס. הקרינה הסלולרית נקבעה עם מנגנון ציטומטריית זרימה (FACS-SCAN, Becton Dickinson, San Jose, קליפורניה, ארה"ב ). המדידות נעשו ב-510 עד 540 ננומטר לאחר עירור של תאים ב-488 ננומטר עם לייזר יון ארגון.

דגירה של מקרופאגים J-774 A.1 במשך 18 שעות ב-37 מעלות צלזיוס עם תמצית I ומיץ מרולה מסונן, הפחתת מתח חמצוני תאי, כפי שנמדד במבחן DCFH, ב-6% ו-7%, בהתאמה. למוצר שהושג על ידי שילוב התמציות המתוארות להלן II ו-III לא הייתה השפעה על מצב עקה חמצונית של מקרופאגים (תאנה. 6).

LDL (1 מ"ג/מ"ל) הודגר במשך 18 שעות ב-37 מעלות צלזיוס עם 5 מיקרומול/ליטר CuSO שהוכן טרי₄. החמצון הופסק בקירור ב-4 מעלות צלזיוס. מידת חמצון ה-LDL נקבעה על ידי מבחן TBARS.

LDL ו- Ox-LDL הוצמדו ל- fluoroisothiocyanate (FITC) למחקרי קליטה סלולרית. ליפופרוטאינים (2.5 מ"ג חלבון/מ"ל) עברו דיאליזה למשך הלילה ב-4°C כנגד מספר שינויים של חיץ בוראט המכיל 0.1 M בוראט, 25 מ"מ נתרן טטרבוראט, 75 מ"מ NaCl, pH 8.6. לפני הצימוד (שעה), ה-pH של חיץ הדיאליזה השתנה ל-9.4. Fluorescein isothiocyanate (FITC; Sigma-Aldrich) הומס בדימתיל פורמאמיד (Merck) והוסף טיפה לתמיסת הליפופרוטאין כדי לתת ריכוז סופי של 0.2 מ"ג/מ"ל ולאחר מכן הודגר במשך שעה אחת בטמפרטורת החדר תוך ערבוב. ליפופרוטאינים מצומדים ב-FITC הופרדו מ-FITC לא מצומד על ידי כרומטוגרפיה של אי הכללת גודל על גבי עמודת PD-10 (Amersham-Pharmacia Biotech), תוך יציאה עם חיץ פוספט 10 mM, pH 8.0. ליפופרוטאינים המסומנים ב-FITC (2 מ"ג/מ"ל) שימשו מיד במחקרי ספיגה.

מקרופאגים J774 A.1 הודגרו ב-37 מעלות צלזיוס למשך 3 שעות עם LDL מצומד FITC או Ox-LDL בריכוז סופי של 25 מיקרוגרם חלבון/מ"ל. ספיגת הליפופרוטאין נקבעה על ידי ציטומטריית זרימה. מדידות של הקרינה התאית שנקבעה על ידי FACS נעשו ב-510 ננומטר עד 540 ננומטר לאחר עירור של התאים ב-488 ננומטר עם לייזר יוני ארגון. הקרינה הסלולרית נמדדה במונחים של עוצמת הקרינה הממוצעת (MFI).

דגירה של מקרופאגים J-774 A.1 במשך 18 שעות ב-37 מעלות צלזיוס עם מוצרי מיץ מרולה (10 מיקרוגרם/מ"ל GAE) לא השפיעה על ספיגת LDL על ידי מקרופאגים. בריכוז גבוה יותר של 30 מיקרוגרם/מ"ל GAE, רק המוצר הכולל את התמציות המתוארות כאן II ו-III הפחית את ספיגת ה-LDL של מקרופאגים ב-9% (תאנה. 7). דגירה של מקרופאגים J-774 A.1 למשך 18 שעות ב-37 מעלות צלזיוס עם תמצית I, מוצר המתקבל על ידי שילוב התמציות המתוארות כאן II ו-III ומיץ מרולה מסונן, או ב-10 מיקרוגרם/מ"ל GAE או 30 מיקרוגרם/מ"ל GAE, הפחית את ספיגת המקרופאגים של Ox-LDL ב-12% ו-7% (תמצית I), ב-27% (מיץ מרולה עם תכולת פוליפנולים גבוהה), וב-8% ו-6% (מיץ מרולה מסונן), בהתאמה (תאנה. 8).

מקרופאגים J774 A.1 הודגרו עם [³כולסטרול מסומן H] (2 μCi/mL) למשך שעה אחת ב-37°C ולאחר מכן שטיפת תאים ב-PBS קר כקרח (×3) ודגירה נוספת בהיעדר או נוכחות של 100 מיקרוגרם חלבון HDL/ml למשך 3 שעות ב-37 מעלות צלזיוס. סלולרי ובינוני [³תוויות H] כומתו וזרימת כולסטרול בתיווך HDL חושבה כיחס של [³H]-תווית במדיום/([³H]-תווית במדיום+[³H]-תווית בתאים). דגירה של מקרופאגים J-774 A.1 במשך 18 שעות ב-37 מעלות צלזיוס עם מיץ מרולה מסונן (10 מיקרוגרם/מ"ל GAE) העלתה את זרימת הכולסטרול ממקרופאגים ל-HDL ב-~10%. עם זאת, כל מוצרי מיץ מרולה האחרים לא השפיעו על זרימת הכולסטרול בתיווך HDL בכל ריכוז שנעשה בו שימוש (תאנה. 9).

מקרופאגים J774 A.1 הודגרו עם [³H] אצטט, ואחריו מיצוי שומנים תאית עם הקסאן:איזופרפנול (3:2, v/v) והפרדה על ידי כרומטוגרפיה שכבה דקה (TLC) על לוחות סיליקה ג'ל. הכתמים של כולסטרול לא-אסטרי הודחו על ידי אדי יוד, נגרדו לתוך בקבוקוני נצנוץ, ונספרו לגבי רדיואקטיביות. דגירה של מקרופאגים J-774 A.1 למשך 18 שעות ב-37 מעלות צלזיוס עם תמצית I, מוצר המתקבל על ידי שילוב התמציות המתוארות כאן II ו-III ומיץ מרולה לאחר סינון, הכל בריכוז של 30 מיקרוגרם/מ"ל GAE, מופחת. ביוסינתזה של כולסטרול במקרופאגים ב-18%, 7% ו-8%, בהתאמה (תאנה. 10).

חולדות Wistar שזה עתה נולדו הושגו ממעבדות הרלן. תרבויות של אסטרוציטים ראשוניים של חולדה הוכנו מקליפת המוח של חולדות Wistar בנות 1-2 יום. נוהל זה אושר על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים. אסטרוציטים צופו בצלחות של 24 בארות ב-100,000 או 80,000 תאים/0.5 מ"ל/באר, בהתאמה. כל הניסויים בוצעו בנוכחות 2% סרום (FCS). המדיום המקורי של התאים נשאב ותוסף מדיום טרי לתאים. דילולים של H₂O₂ ומיצי מרולה במצע הגידול נעשו טריים מתמיסות מלאי ממש לפני כל ניסוי והשתמשו בהם מיד. כל טיפול בוצע בטטראפליקות. הריכוז הסופי של H₂O₂ היה 200 מיקרומטר.

מבחני תרבות תאים עצביים

קביעת כדאיות התא - כדאיות התא נקבעה באמצעות ערכת בדיקה קולורימטרית מסחרית (שמסופקת על ידי Roche), על סמך מדידת פעילות Lactate Dehydrogenase (LDH) המשתחררת מהציטוסול של תאים פגומים לתוך הסופרנטנט.

השפעות הגנה של תמציות - כדי לקבוע את התנאים האופטימליים (במונחים של זמן ומינון) למיצים להפעיל את השפעתם המגינה המשוערת, תאים טופלו מראש בכמויות שונות של כל מוצר מיץ לפרקי זמן שונים והמוצרים השפעות הגנה מפני עקה חמצונית שנוצר על ידי H₂O₂ הוערכו. מיצים (בדילול של 1:125, 1:500, 1:800 ו-1:4000) נוספו במקביל עם H₂O₂ או דגירה מראש במשך שעתיים עם התאים לפני הוספתו. הרעילות נבדקה כעבור 20 שעות. תאנה. 11 מראה שבכל הריכוזים שנבדקו ולכל מוצרי המיץ, הוספה במקביל של המיצים עם H₂O₂ אינו מגן. עם זאת, דגירה קדם למשך שעתיים עם התאים לפני H₂O₂ התוספת הביאה להשפעות הגנה של כל המיצים, כאשר תמצית I מדגימה את פעילות ההגנה היעילה ביותר בשימוש בריכוזים נמוכים (1:4000).

ניסויים עם תמציות מרולה בריכוזים נמוכים (דילולים 1:1000-1:8000) - הניסויים הבאים בוצעו בריכוזים נמוכים יותר של המוצרים (דילולים 1:1000-1:8000), שהם ~55-450 מיקרוגרם/100 מ"ל ויטמין מקבילות C.

נבדקו ההשפעות של תקופת קדם הדגירה (שעתיים לעומת 6 שעות) של תאים עם מוצרי המיץ ושל ריכוז המוצר (1:1000-1:8000). תאנה. 12 מראה שבעוד שעתיים של דגירה קדם עם תמצית I גרמו רק ל-~20% הגנה בכל הריכוזים שנבדקו, 6 שעות של דגירה קדם הביאו ליותר מ-80% הגנה.

בניסוי אחר נבדקה השפעת זמן הדגירה ושל הריכוז עם 2 דילולים (1:1000 או 1:4000) של כל מיץ, מיץ מרולה מסונן ותמצית I, למשך 2 או 6 שעות לפני הוספת H.₂O₂ (תאנה. 13). תמצית אני נמצאה היעילה ביותר (70% הגנה). גם מיץ מרולה מסונן הפגין פעילות הגנה משמעותית (40% הגנה).

4. פרוטוקול קליני

למחקר גויסו עשרה מתנדבים בריאים (טבלה 1), לא מעשנים וללא הפרעות מטבוליות, עם רמות כולסטרול בפלזמה נמוכות מ-200 מ"ג/ד"ל וללא טיפול תרופתי. כל הנבדקים חתמו על טופס הסכמה לפני שנכנסו למחקר. פרוטוקול המחקר אושר על ידי ועדת רמב"ם הלסינקי (מס' 2452).

כל המשתתפים צרכו 200 מ"ל של מיץ מפוסטר ליום, עם הארוחה העיקרית שלהם, לתקופה של 3 שבועות. כל הנבדקים שנכללו במחקר המשיכו באורח חייהם הרגיל. לחץ הדם נמדד בזמן אפס (לפני כניסת המחקר), לאחר 3 שבועות, ובתום המחקר (לאחר 4 שבועות של הדחה). דגימות דם (25 מ"ל) נאספו לניתוח בזמן אפס (בסיס - לפני כניסת המחקר), לאחר 3 שבועות של צריכת מיץ מרולה, ו-4 שבועות לאחר סיום צריכת המיץ (שטיפה).

כל דגימות הסרום בדם הוקפאו ב-80 מעלות צלזיוס עד לניתוח. ניתוחים ביוכימיים בנסיוב בוצעו על ידי שימוש בערכות אבחון זמינות מסחרית, וכללו מדידה של גלוקוז, סידן, תפקוד כליות (BUN, קריאטינין והאלקטרוליטים נתרן וקיום), תפקודי כבד (CK, AST ובילירובין כולל), כולסטרול כולל, HDL -כולסטרול, LDL-כולסטרול וטריגליצרידים הכוללים. רמות חומצת השתן (כנוגד חמצון אפשרי) בסרום נמדדו באמצעות ערכה זמינה מסחרית.

ניתוח מתח חמצוני של דגימות סרום

כוח נוגד חמצון מפחית ברזל (FRAP): מגיב FRAP עובד הוכן על ידי ערבוב של 25 מ"ל חיץ אצטט, 2.5 מ"ל תמיסת 2,4,6-Tripyridyl-s-Triazine (TPTZ) ו-2.5 מ"ל FeCL₃*6ח₂הו פתרון. תמיסות מימיות של 1 mM FeSO₄*7H₂O בריכוזים של 5, 10, 20, 30, 40, 50 ו-100 מ"מ שימשו לעקומת כיול סטנדרטית. מגיב FRAP (מוכן טרי) התחמם ל-37 מעלות צלזיוס וריק מגיב נקרא ב-593 ננומטר בספקטרופוטומטריה. דגימת סרום (30 μl) עורבבה עם 90 μl מים. לאחר מכן, נוספו 900 μl מגיב FRAP וערבבו במהירות. ספיגה נקראה לאחר 0.5 שניות וכל 15 שניות במהלך 4 דקות. השינוי בספיגה (א_{593 ננומטר}) בין הצפיפות האופטית הסופית והראשונית חושבה עבור כל דגימה ולאחר מכן הייתה קשורה ל-Fe⁺² ריכוז בעקומה הסטנדרטית (נבדק במקביל).

חמצון ליפידים בסרום

הסרום היה מדולל 1:4 (v:v) עם פוספט מאגר מלח (PBS) ולאחר מכן הודגר בהיעדר או נוכחות של 100 mmol/L של מחולל הרדיקלים החופשיים 2,2'-azobis-2-amidinopropane hydrochloride (AAPH) במשך שעתיים ב-37 מעלות צלזיוס. חמצון שומנים בסרום נקבע על ידי מדידת הכמות שנוצרה של חומרים תגובתיים חומצה thiobarbituric (TBARS) ושל פרוקסיד שומנים בשיטות ספקטרופוטומטריות. מבחן ליפיד פרוקסיד (PD) מנתח היווצרות ליפיד פרוקסיד לפי יכולתם להמיר יודיד ליוד לאחר דגירה של 18 שעות ב-25 מעלות צלזיוס, כפי שנמדד בספקטרופוטומטרי ב-365 ננומטר.

כפי שעולה מתוצאות המחקר, לצריכה לא הייתה השפעה משמעותית על לחץ הדם; רמות גלוקוז וסידן בסרום לא השתנו באופן משמעותי לאחר צריכה ובדיקות תפקודי כליות לא הושפעו באופן משמעותי מהמשך הצריכה. באופן דומה, הצריכה הביאה ללא שינוי מהותי ברמת האלקטרוליטים בדם ובתפקוד הכבד. עם זאת, רמות הטריגליצרידים בסרום ירדו ב-7% לאחר הצריכה, כאשר ההשפעה נמשכת לאחר תקופת השטיפה של 4 שבועות (טבלה 2).

צריכה על פני תקופה של 3 שבועות, הפחיתה באופן מובהק (p<0.02) את ריכוזי הכולסטרול הכולל בסרום ב-8% (טבלה 3).

ירידה זו עשויה להיות קשורה להפחתה משמעותית (p<0.01) ברמות ה-LDL-כולסטרול, ב-17%. עם זאת, הפחתות אלו לא נמשכו לאחר תקופת ההדחה, שכן רמות הכולסטרול הכולל, כמו גם אלו של כולסטרול LDL, חזרו לרמות הבסיס לאחר 4 שבועות של תקופת ההדחה, במהלכם הנבדק לא צרך את המיץ. רמת הסרום של HDL-כולסטרול עלתה באופן משמעותי (p<0.03) ב-10% לאחר צריכת המיץ והפחתה זו נמשכה, אם כי במידה נמוכה יותר (ב-7%) בלבד, לאחר תקופת ההדחה.

טבלה 4 מציגה את ההשפעה על עקה חמצונית בסרום. דגימות סרום הועברו לחמצון המושרה על ידי AAPH. היווצרות ליפידים חמצן ירדה באופן מובהק (p<0.03) בדגימות סרום שנגזרו לאחר צריכה של 3 שבועות. עם זאת, השפעה זו לא נשמרה לאחר תקופת ההדחה. בדגימות סרום שנגזרו לאחר צריכה, "כוח נוגד החמצון", שנמדד על ידי מבחן FRAP, עלה במהלך תקופת הצריכה, ואף עלה עוד יותר, והגיע לעלייה משמעותית של 8% לאחר תקופת ההדחה. הירידה במתח החמצוני בסרום עשויה להיות תוצאה של הפחתת ריכוזי השומנים בסרום (פחות מצע זמין לחמצון, כמו גם ההשפעה של נוגדי חמצון חזקים של מיץ מרולה).

ההשפעה של צריכת מיץ מפוסטר על עקה חמצונית בסרום מסוכמת ב איורים. 14א-ב. דגימות סרום הועברו לחמצון המושרה על ידי AAPH. יצירת ליפידים מי חמצן (תאנה. 14א) ירד באופן מובהק (p<0.03) בדגימות הסרום שנגזרו לאחר צריכת המיץ במשך תקופה של 3 שבועות. השפעה זו לא נשמרה לאחר תקופת ההדחה. קיבולת כוח נוגד החמצון, נמדדת על ידי מבחן FRAP (תאנה. 14ב), עלייה בדגימות הסרום שנגזרו לאחר צריכה של מיץ מרולה מפוסטר, ולמרבה ההפתעה, עלתה עוד יותר, והגיעה לעלייה משמעותית של 8%, לאחר תקופת ההדחה.