สารสกัดจาก Sclerocarya birrea (US8445040B2)

การประดิษฐ์นี้โดยทั่วไปเกี่ยวข้องกับสารสกัดที่ละลายน้ำได้จาก Sclerocarya เบอร์เรีย ผลไม้และการใช้ประโยชน์

มารูล่า (Sclerocarya birrea, วงศ์: Anacardiaceae) เป็นไม้ต้นผลัดใบขนาดกลางถึงขนาดใหญ่ ลำต้นตั้งตรง มงกุฎกลม พืชนี้ใช้เป็นแหล่งอาหารในปัจจุบันเช่นเดียวกับที่ใช้ในสมัยโบราณ ผลของมารูลานั้นรับประทานได้ โดยทั่วไปจะรับประทานแบบดิบหรือนำไปแปรรูปเป็นผลิตภัณฑ์อาหารต่างๆ เช่น เยลลี่ และยังนำไปต้มเป็นเบียร์ที่มีแอลกอฮอล์ ซึ่งชาว Vhavenda รู้จักกันในชื่อ Mukumbi

การใช้และการใช้มารูลาในทางการแพทย์รวมถึงการใช้เปลือกและใบในการรักษาโรคที่เกี่ยวข้องกับแบคทีเรียและโรคเบาหวาน [1,2] และอาการท้องร่วงตามที่เปิดเผยในสิ่งพิมพ์สิทธิบัตรของออสเตรเลียเลขที่ 2000/29790 [3].

สิ่งพิมพ์ต่างประเทศ เลขที่ WO 03/092634 [4] เปิดเผยการใช้น้ำมันมารูลาในการเตรียมเฉพาะที่เพื่อยับยั้งการก่อตัวของเนื้อเยื่อแผลเป็นบนผิวหนัง

ผล Marula แสดงให้เห็นว่ามีความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดเพิ่มขึ้น [5] มีความสามารถในการยับยั้งการเกิดฟอสโฟลิปิดเปอร์ออกซิเดชั่น และมีฤทธิ์ในการขับอนุมูลซุปเปอร์ออกไซด์แอนไอออน [6] สิ่งพิมพ์ต่างประเทศ เลขที่ WO 06/097806 [7] เปิดเผยว่าส่วนต่าง ๆ ของพืชมารูลา เช่น เปลือก ใบ ผล ราก และเมล็ดมีสารต้านอนุมูลอิสระที่ไม่ชอบน้ำ ซึ่งอาจได้รับจากพืชโดยวิธีการทำให้เป็นสีและ/หรือการสกัด

สิ่งพิมพ์

แม้ว่าผลมารูลาจะได้รับรายงานว่าอุดมไปด้วยสารต้านอนุมูลอิสระ แต่จนถึงขณะนี้ยังไม่มีรายงานการเตรียมและการใช้สารสกัดจากผลมารูลาในการรักษาโรคและความผิดปกติต่างๆ เช่น โรคหลอดเลือดแดงแข็งและโรคเกี่ยวกับความเสื่อมของระบบประสาท

ผลลัพธ์ที่น่าประหลาดใจที่เปิดเผยในที่นี้ บ่งชี้ว่าสารสกัดที่เตรียมจากน้ำมารูลาไม่เพียงแต่คงตัวเป็นเวลานานเท่านั้น แต่ที่สำคัญกว่านั้นยังมีประโยชน์ในการรักษาที่แตกต่างกัน และในบางกรณีดีกว่าที่แสดงให้เห็นโดยน้ำมารูลาที่ไม่ผ่านการบำบัด สารสกัดของการประดิษฐ์ได้พิสูจน์ให้เห็นแล้วว่าส่งผลดีต่อไขมันในเลือด ดังที่แสดงโดยการลดลงของ LDL ในซีรั่ม โดยการเพิ่มขึ้นของ HDL ในซีรั่ม และโดยการลดทอนของความเครียดออกซิเดชันในซีรั่ม; สารสกัดได้แสดงให้เห็นถึงประสิทธิภาพในการรักษาความเสียหายจากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน, หลอดเลือด, การเสื่อมของระบบประสาทและความผิดปกติที่เกี่ยวข้อง

สารสกัดจากน้ำมารูล่าของการประดิษฐ์นี้ยังมีประสิทธิผลในการป้องกันการเสื่อมของระบบประสาท ดังที่เห็นได้จากอิทธิพลของการป้องกันต่อเซลล์ประสาทที่ได้รับความเสียหายจากอนุมูลอิสระ

การประดิษฐ์นี้ยังเปิดเผยการใช้สารสกัดจากน้ำมารูลาเป็นสารต้านอนุมูลอิสระสำหรับการใช้งานที่หลากหลาย เช่น ใช้ในผลิตภัณฑ์เสริมอาหารเพื่อให้เกิดผล เช่น ฤทธิ์ต้านไขมันในหลอดเลือดในอาสาสมัครที่มีสุขภาพดีและไม่ดีต่อสุขภาพ (มนุษย์และคนที่ไม่- สัตว์มนุษย์) และเป็นตัวแทนสำหรับการรักษาหรือป้องกันโรคที่เกี่ยวข้องกับการเสื่อมของระบบประสาท

ดังนั้น ในลักษณะหนึ่งของการประดิษฐ์นี้ มีการจัดให้มีสารสกัดที่ได้มาจากผลมารูลา ไม่รวมเมล็ด สารสกัดดังกล่าวได้รับโดยกระบวนการซึ่งประกอบรวมด้วยการนำน้ำที่เก็บจากผลมารูลาไปสกัดด้วยน้ำหนึ่งชนิดหรือมากกว่า สารละลาย ตัวทำละลายอินทรีย์และของผสมของสิ่งนั้น กล่าวคือ เพื่อให้ได้สารสกัดที่มีประโยชน์ทางชีวภาพตามที่ต้องการจากน้ำมารูลา

น้ำมารูลาที่ได้จากผลมารูลาอาจถูกกรองก่อนการสกัดเพื่อขจัดเศษผลไม้ เช่น เศษเมล็ดพืชและสิ่งที่ไม่ละลายน้ำอื่นๆ การกรองอาจดำเนินการโดยใช้วิธีการใดๆ ที่เป็นที่รู้จักในศิลปวิทยาการแขนงนี้สำหรับการกรองเครื่องดื่ม เช่น แต่ไม่จำกัดต่อ การกรองด้วยดินเบา (DE) และการกรองด้วยเมมเบรน

ในบางรูปลักษณ์ น้ำมารูลาที่ได้จากผลมารูลาจะถูกพาสเจอร์ไรซ์ก่อนการสกัดเพื่อชะลอการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์โดยการลดจำนวนของเชื้อโรคที่มีชีวิตในนั้น โดยปกติแล้ว การพาสเจอไรซ์จะดำเนินการโดยการให้น้ำผลไม้มีอุณหภูมิต่ำกว่าจุดเดือด ในบางรูปลักษณ์ การพาสเจอไรซ์ทำได้โดยวิธีอื่นหนึ่งวิธีหรือมากกว่าที่รู้จักในศิลปวิทยาการแขนงนี้ เช่น ควบคุมโดยหน่วยงานความปลอดภัยด้านอาหารแห่งชาติ (เช่น USDA ในสหรัฐอเมริกาและสำนักงานมาตรฐานอาหารในสหราชอาณาจักร) ตัวอย่างที่ไม่จำกัดบางตัวอย่าง ได้แก่ การพาสเจอร์ไรซ์ที่อุณหภูมิสูง/ใช้เวลาสั้น (HTST) การพาสเจอร์ไรซ์ที่ยืดอายุการเก็บรักษา (ESL) การพาสเจอร์ไรซ์ที่อุณหภูมิสูงพิเศษ (UHT หรือความร้อนสูงพิเศษ) และการพาสเจอร์ไรซ์แบบแบตช์หรือถัง

คำว่า 'สารสกัด' ที่ใช้ในคำขอนี้หมายถึงผลิตภัณฑ์ที่ละลายน้ำได้ซึ่งได้รับจากส่วนใดส่วนหนึ่งของผลมารูลาหรือส่วนใดๆ ที่ได้มาจากส่วนนั้น โดยไม่รวมเมล็ด แต่รวมถึงมีโซคาร์ป เอนโดคาร์ป เปลือก (ผิวชั้นนอกหนา) หนึ่งส่วนหรือมากกว่า และ/หรือผิวหนัง (exocarp) โดยใช้วิธีที่เลือกจากการแสดงออก การดูดซึม การทำให้แห้ง การทำแห้งเยือกแข็ง การกลั่น และการรวมกันของสองกระบวนการเหล่านี้หรือมากกว่า

สารที่สกัดแยกจากกันหรือรวมกันอาจถูกสร้างเป็นสูตรผสมที่ต้องการซึ่งรวมถึงสารละลายที่เป็นน้ำ ของแข็ง เช่น ผงแห้ง เม็ดหรือเม็ด สารเข้มข้น เช่น กึ่งของเหลวที่มีความคงตัวของน้ำเชื่อมซึ่งอาจ ได้จากการระเหยของเหลวทั้งหมดหรือเกือบทั้งหมดของสารสกัดหรือรูปแบบอื่น ๆ โดยทั่วไป วิธีการสกัดวัสดุอาจแตกต่างกันไป โดยอนุโลม ขึ้นอยู่กับอายุของผลมารูลา, ชนิดย่อย, ฤดูกาลเก็บเกี่ยว, บริเวณการเจริญเติบโต, สารที่จะสกัด, ความคงตัวของสารเหล่านั้น และปัจจัยอื่น ๆ ซึ่งเป็นที่รู้จักของบุคคลที่เชี่ยวชาญในศิลปวิทยาการแขนงนี้

ในบางรูปลักษณ์ สารสกัดของการประดิษฐ์ได้มาจากการสัมผัสน้ำมารูล่ากับสารละลายที่มีน้ำเพื่อสกัดสารดังกล่าวจากส่วนผสมหนึ่งอย่างหรือมากกว่าหรือการรวมกันของพวกมัน 'สารละลายที่มีน้ำ' อาจอยู่ในเงื่อนไขทั่วไปส่วนใหญ่น้ำ (ในบางรูปลักษณ์น้ำที่มีความเข้มข้นของแร่ธาตุตามธรรมชาติที่แตกต่างกัน) หรือน้ำกลั่นหรือบริสุทธิ์อย่างอื่น (กลั่นหรือทำให้บริสุทธิ์ในวิธีการอื่นใด) สารละลายเกลือที่มีน้ำประกอบรวมด้วยเกลือหนึ่งชนิดหรือมากกว่าหรือ a ของผสมของน้ำกับตัวทำละลายมีขั้วที่ผสมน้ำได้หนึ่งชนิดหรือมากกว่า เช่น C₁-ค₄ แอลกอฮอล์และคีโตน

ในบางรูปลักษณ์ ตัวทำละลายที่มีน้ำเป็นของผสมของน้ำและแอลกอฮอล์อย่างน้อยหนึ่งชนิด ในบางรูปลักษณ์เพิ่มเติม ตัวทำละลายที่มีน้ำเป็นส่วนผสมของน้ำและเอทานอล ที่ซึ่งอัตราส่วนน้ำ:เอทานอลเป็นหนึ่งใน 1:1, 1:2 . . 1:5 . . . 1:10 . . . 1:100 . . . 1:1,000 . . . ฯลฯ ตามลำดับ หรือ 2:1, 3:1 . . 5:1 . . . 10:1 . . . 100:1 . . . 1,000:1 เป็นต้น ตามลำดับ อัตราส่วนระหว่างกลางอื่นๆ รวมอยู่ด้วย

การสกัดอย่างเป็นทางเลือกอาจใช้ตัวทำละลายอินทรีย์เพียงอย่างเดียวหรือใช้ร่วมกับตัวทำละลายดังกล่าวตัวอื่น ในบางรูปลักษณ์ กระบวนการสกัดเป็นกระบวนการหลายขั้นตอนโดยที่ผลไม้มารูลา (น้ำผลไม้) ถูกสัมผัสก่อนด้วยตัวทำละลายหนึ่งตัวและจากนั้นด้วยตัวทำละลายที่แตกต่างกัน เพื่อเพิ่มผลผลิตสูงสุดหรือเพิ่มคุณค่าสารสกัดด้วยส่วนประกอบที่ต้องการหนึ่งอย่างหรือมากกว่า

โดยทั่วไป ตัวทำละลายอินทรีย์คือแอลกอฮอล์อย่างน้อยหนึ่งชนิด เช่น เมทานอล เอทานอลและไอโซโพรพิลแอลกอฮอล์ หรือคีโตน เช่น อะซีโตน เมื่อใช้เอทานอล อาจใช้เป็นสารละลายเอทานอลที่เป็นน้ำ เช่น เอทานอลระหว่าง 40 ถึง 60% สารละลายที่คล้ายกันอาจใช้กับตัวทำละลายอินทรีย์ที่ผสมน้ำได้อื่นๆ สารสกัดที่ได้จากการสกัดด้วยแอลกอฮอล์ต่อไปนี้เป็นสารสกัด I

ควรทำความเข้าใจในบริบทของการประดิษฐ์นี้ว่าการสกัดด้วยเอทานอลหรือการสกัดอื่นใดที่เปิดเผยในที่นี้ อาจดำเนินการที่อุณหภูมิใดก็ได้ที่สะดวก ผู้ที่มีทักษะในศิลปวิทยาการนี้จะเห็นได้ชัดว่าการสกัดที่มีประสิทธิภาพมากขึ้นจะเกิดขึ้นหากน้ำผลไม้ถูกกวน เช่น การกวนหรือเขย่า และ/หรือหากส่วนผสมได้รับความร้อนจนถึงอุณหภูมิที่สูงกว่าอุณหภูมิห้อง (สูงกว่า 25-27°C .). อาจใช้อุณหภูมิในการสกัดที่ต่ำกว่า เช่น อุณหภูมิห้องที่ต่ำกว่า ในบางรูปลักษณ์ กระบวนการสกัดถูกดำเนินการที่อุณหภูมิห้องหรือที่อุณหภูมิระหว่าง 25 ถึง 30°ซ

นอกจากนี้ยังควรเข้าใจในบริบทของการประดิษฐ์นี้ว่าการสกัดสามารถทำได้ตามระยะเวลาที่สะดวก

บุคคลที่มีความชำนาญในศิลปวิทยาการแขนงนี้จะต้องตระหนักเพิ่มเติมว่ากระบวนการเพื่อให้ได้มาซึ่งสารสกัดของการประดิษฐ์อาจเกี่ยวข้องกับการบดผลไม้มารูลาเพื่อให้ได้ชิ้นส่วนที่เล็กกว่าของผลไม้ทั้งหมด ซึ่งสารสกัดอาจได้รับโดยวิธีการสกัดแบบอื่นหนึ่งวิธีหรือมากกว่า เช่น การกลั่น อีกทางหนึ่ง สารสกัดอาจได้จากการแสดงออก กล่าวคือ โดยการบีบน้ำออกจากผลไม้

ดังนั้น ในบางรูปลักษณ์ ก่อนที่จะสัมผัสน้ำผลไม้กับตัวทำละลายหนึ่งชนิดหรือมากกว่าตามที่เปิดเผยไว้ ผลไม้ เช่น ผลไม้ทั้งผล โดยไม่รวมเมล็ดหรือส่วนใดๆ ของผลไม้ อาจถูกบำบัดล่วงหน้าโดยการทำให้เป็นสี การแสดงออก หรือกระบวนการอื่นใด

น้ำที่ได้จากผลมารูลาอาจถูกเก็บไว้ก่อนการสกัดหรือการปรับสภาพ เช่น การทำให้แห้งเป็นระยะเวลานาน การเก็บรักษาอาจอยู่ที่อุณหภูมิและสภาวะใดก็ได้ ซึ่งอยู่ภายใต้การรักษาความสดของน้ำผลไม้และการป้องกันหรือลดการย่อยสลาย อุณหภูมิดังกล่าวอาจสูงหรือต่ำกว่าอุณหภูมิห้อง ในบางรูปลักษณ์ น้ำผลไม้อาจถูกเก็บไว้ในตู้เย็นเป็นเวลาหลายสัปดาห์หรือในช่องแช่แข็งเป็นเวลาหลายปี ในกรณีที่ใช้น้ำผลไม้แช่แข็ง กระบวนการอาจประกอบด้วยขั้นตอนการละลายน้ำแข็งก่อนการสกัดหรือแปรรูป

การทำให้น้ำผลไม้แห้งอาจทำได้โดยการให้ความร้อนแก่น้ำผลไม้ที่เป็นของเหลวภายใต้สุญญากาศหรือภายใต้ความดันบรรยากาศ ที่อุณหภูมิที่ตั้งไว้ล่วงหน้าซึ่งอาจเป็นอุณหภูมิห้องหรือสูงกว่าสภาพแวดล้อม ในหนึ่งชุดหรือในปริมาณที่น้อยกว่าเพื่อควบคุมปริมาณความชื้นของน้ำผลไม้ สารสกัด ในตัวอย่างแบบไม่จำกัดที่เปิดเผยไว้ในที่นี้ การทำให้แห้งทำได้โดยการเทน้ำผลไม้ลงบนพื้นผิว เช่น ถาด ในบางกรณีจะคลุมด้วยกระดาษฟอยล์ (เช่น อลูมิเนียมฟอยล์) เพื่อให้น้ำผลไม้มีความร้อนเท่ากันและได้ชั้นที่สม่ำเสมอกันอย่างมาก ของสารสกัดมารูล่าแห้ง

สารเข้มข้นเปียก (น้ำเชื่อม) ที่ได้จากการอบแห้งจะมีสีเหลืองถึงน้ำตาลเข้ม ขึ้นอยู่กับความเข้มข้นและชนิดของสารสกัด วัสดุที่แห้งจะถูกบดเป็นผงและมีสีทองสว่างถึงสีน้ำตาลเข้มขึ้นอยู่กับชนิดของสารสกัด ของแห้งจะละลายน้ำได้

สารสกัดมารูลาซึ่งได้รับหลังจากนั้นประกอบด้วยสารระเหยในปริมาณต่างๆ กัน โดยปริมาณจะขึ้นอยู่กับระยะเวลาของระยะเวลาการทำให้แห้งและอุณหภูมิที่ใช้ โดยไม่ต้องการผูกมัดตามทฤษฎี เมื่อกำจัดส่วนประกอบที่ระเหยได้ออกแล้ว สารสกัดเข้มข้น ซึ่งได้แก่ ในบางรูปลักษณ์ สารสกัดแบบผง มีส่วนประกอบออกฤทธิ์ที่มีความเข้มข้นสูงกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับน้ำผลไม้ทั้งหมด ซึ่งการมีอยู่และการรวมกันให้ฤทธิ์สูงซึ่ง ไม่พบในผลไม้ทั้งหมดและซึ่งแสดงให้เห็นในที่นี้

ดังนั้น, สารสกัดได้มาโดยกระบวนการซึ่งประกอบรวมด้วยการสัมผัสน้ำมารูลากับตัวทำละลายที่เป็นน้ำตามที่กำหนดเพื่อให้ได้สารแขวนลอยซึ่งสารสกัดที่เป็นของเหลวอาจถูกแยกออกจากกัน

ในบางรูปลักษณ์ กระบวนการซึ่งประกอบรวมด้วย:

ในบางรูปลักษณ์ น้ำผลไม้ที่เก็บรวบรวมจะถูกทำให้แห้งหรือผ่านการบำบัดตามที่เปิดเผยก่อนการสกัด

ในรูปลักษณ์เพิ่มเติม การแยกสิ่งสกัดที่เป็นของเหลวตามขั้นตอน (iii) อาจโดยวิธีการหมุนเหวี่ยงสารแขวนลอยที่ได้รับในขั้นตอน (ii) เพื่อแยกสิ่งสกัดที่เป็นของเหลวออกจากมวลของแข็ง

ในบางรูปลักษณ์เพิ่มเติม กระบวนการประกอบรวมด้วย:

ในรูปลักษณ์เพิ่มเติม กระบวนการซึ่งประกอบรวมด้วย:

ในบางรูปลักษณ์ กระบวนการซึ่งประกอบรวมด้วย:

ควรสังเกตว่าการแยกสารสกัดของเหลวอาจทำซ้ำได้มากกว่าหนึ่งครั้ง โดยใช้ตัวทำละลายชนิดเดียวกันหรือต่างกันในปริมาณที่สอง และส่วนลอยเหนือตะกอนที่ได้จากแต่ละขั้นตอนอาจนำมารวมกันและบำบัดเพิ่มเติมเพื่อแยก ทำให้เข้มข้น หรือดำเนินการต่อไป สารสกัด. ดังนั้น สารลอยเหนือตะกอนสองชนิดหรือมากกว่าอาจถูกรวมเข้าด้วยกันและตัวทำละลายและ/หรือน้ำบางส่วนอาจถูกกำจัดออก ตัวอย่างเช่น โดยใช้วิธีใดวิธีหนึ่งในการกำจัดตัวทำละลาย

เมื่อวัตถุตั้งต้นประกอบด้วยวัตถุที่เป็นของแข็ง หรือในกรณีที่ผลมารูล่าถูกแปรรูปเป็นผงแห้งหรือกึ่งแห้งหรือเป็นเม็ด สารสกัดอาจถูกแยกอย่างน้อยออกเป็นเฟสของแข็งและเฟสน้ำ โดยแต่ละเฟสมี ฤทธิ์ทางชีวภาพตามที่เปิดเผยไว้นี้

สารสกัดจากการประดิษฐ์ที่ได้มาจากการใช้หนึ่งกระบวนการหรือมากกว่าตามที่เปิดเผยไว้ในที่นี้ อาจแสดงคุณลักษณะอย่างหนึ่งหรือมากกว่าดังต่อไปนี้:

ดังนั้น การประดิษฐ์ยังจัดให้มีสารสกัดมารูลาที่แสดงคุณลักษณะโดยความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของ FRAP ที่เทียบเท่าวิตามินซีขั้นต่ำ 1,000 และ 1,500 มก. ต่อ 100 มล. ซึ่งเปรียบเทียบกับ FRAP ที่วัดจากน้ำมารูลาที่ไม่ผ่านการบำบัดระหว่าง 260 ถึง 600 มก. วิตามินซีต่อ 100 มล. กล่าวอีกนัยหนึ่ง ความจุ FRAP ของสารสกัดตามการประดิษฐ์อยู่ระหว่าง 2- และ 3 เท่าของกิจกรรมที่สังเกตได้ในน้ำผลไม้ดั้งเดิมที่ไม่ผ่านการบำบัด

ในบางรูปลักษณ์ สารสกัดที่มีความจุ FRAP ข้างต้นคือสารสกัด I

การประดิษฐ์นี้ยังจัดให้มีสารสกัดที่มีเศษส่วนพอลิฟีนอลที่หมดสิ้นแล้ว สารสกัดดังกล่าวถูกกำหนดให้เป็นสารสกัด II ส่วนโพลีฟีนอลิก, ในที่นี้เป็นสารสกัด III, อาจถูกแยกออกจากน้ำมารูลาโดย, ตัวอย่างเช่น, โครมาโตกราฟีของน้ำมารูลาเพื่อให้สารสกัด II (หมดสิ้นไป) และสารสกัด III (ส่วนฟีนอลิกที่แยกออก) ในบางรูปลักษณ์ การลดลงของเศษส่วนโพลีฟีนอลทำได้โดยกระบวนการซึ่งประกอบรวมด้วยการกรองน้ำมารูลา ตัวอย่างเช่น โดยการส่งผ่านน้ำผ่านผ้าขาวหนึ่งชั้นหรือมากกว่า (ที่มีเกรดต่างกัน เช่น จากผ้าทอแบบเปิดไปจนถึงแบบละเอียดพิเศษที่ใช้ตาม คุณภาพและปริมาณของน้ำผลไม้), ปั่นแยกน้ำผลไม้ที่กรองแล้วเพื่อขจัดเศษผลไม้, การใช้น้ำผลไม้ใสกับโครมาโทกราฟี, เช่น, คอลัมน์โครมาโตกราฟีโดยใช้คอลัมน์ที่อัดแน่นด้วย Sepabeads ion exchange และ adsorbent resins หรือ C₁₈- ซิลิกาหรือเรซินที่ถูกพันธะสำหรับการปฏิสัมพันธ์ที่ไม่ชอบน้ำและโครมาโตกราฟีแบบเฟสย้อนกลับ รวบรวมเศษส่วนและรวมเศษส่วนที่มีปริมาณของแข็งที่ละลายน้ำได้ทั้งหมด (TSS) เท่ากัน

ในบางรูปลักษณ์ เศษส่วนโพลีฟีนอลอาจถูกรวบรวมจากตัวกลางที่ใช้สำหรับโครมาโตกราฟี เช่น จากเม็ดบีดโดยการผสมตัวกลาง เช่น เม็ดบีดกับสารละลายแอลกอฮอล์ (เอทานอล เมทานอล ฯลฯ) เศษส่วนแอลกอฮอล์อาจรวมตัวกันและระเหยจนแห้ง

ตามรูปลักษณ์บางส่วน เพื่อให้ได้สารสกัดที่มีอัตราส่วนโพลีฟีนอลต่อวิตามินซีเพิ่มขึ้น ส่วนของโพลีฟีนอล (เช่น สารสกัด III) อาจถูกแยกออกจากน้ำผลไม้และจากนั้นเติมลงในส่วนของโพลีฟีนอลที่พร่อง (เช่น สารสกัด II) . ในบางรูปลักษณ์ สารสกัด II ถูกรวมกับสารสกัด I

ในบางรูปลักษณ์ สารสกัด II แสดงคุณลักษณะโดยความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของ FRAP อย่างน้อยระหว่าง 250 และ 500 มก. เทียบเท่าวิตามินซีต่อ 100 มล.

ตามที่ใช้ในที่นี้ 'โพลีฟีนอล' หมายถึงกลุ่มของสารที่แสดงคุณลักษณะโดยการมีอยู่ของฟีนอลมากกว่าหนึ่งหน่วยหรือหน่วยการสร้างต่อโมเลกุล โพลีฟีนอลโดยทั่วไปแบ่งออกเป็นแทนนินที่ไฮโดรไลซ์ได้ (เอสเทอร์ของกรดแกลลิกของกลูโคสและน้ำตาลอื่นๆ) และฟีนิลโพรพานอยด์ เช่น ลิกนิน ฟลาโวนอยด์ และแทนนินแบบควบแน่น ในบางรูปลักษณ์ โพลีฟีนอลที่ได้รับจากน้ำมาคูลาประกอบรวมด้วยแทนนินที่ย่อยสลายได้, คาเทชินและกรดไฮดรอกซีซินนามิกและ/หรืออนุพันธ์ของพวกมัน

ในอีกลักษณะหนึ่ง การประดิษฐ์นี้จัดให้มีการใช้สารสกัดจากการประดิษฐ์อย่างน้อยหนึ่งรายการสำหรับการเตรียมองค์ประกอบ

ในบางรูปลักษณ์ องค์ประกอบคือองค์ประกอบทางเภสัชกรรม

ในรูปลักษณ์เพิ่มเติม สารสกัดคือส่วนผสมออกฤทธิ์ที่มีอยู่ในองค์ประกอบพร้อมกับตัวพา, สารเพิ่มปริมาณหรือส่วนเติมเนื้อยาที่ยอมรับได้ทางเภสัชกรรม

ตัวเลือกของตัวพาจะถูกกำหนดเป็นบางส่วนโดยสารสกัดเฉพาะ รวมทั้งโดยวิธีการเฉพาะที่ใช้เพื่อบริหารให้องค์ประกอบซึ่งประกอบรวมด้วย ดังนั้น มีสูตรผสมที่เหมาะสมที่หลากหลายขององค์ประกอบทางเภสัชกรรมของการประดิษฐ์นี้ สูตรผสมต่อไปนี้สำหรับการบริหารให้ทางปาก, ละอองลอย, ทางหลอดเลือด, ใต้ผิวหนัง, ทางหลอดเลือดดำ, เข้ากล้าม, ในช่องท้อง, ทางทวารหนักและทางช่องคลอดเป็นเพียงตัวอย่างเท่านั้นและไม่มีทางจำกัด

สูตรผสมที่เหมาะสมสำหรับการบริหารให้ทางปากสามารถประกอบด้วย (a) สารละลายที่เป็นของเหลว เช่น ปริมาณที่มีประสิทธิผลของสารสกัดที่ละลายในสารเพิ่มปริมาณ เช่น น้ำ น้ำเกลือ หรือน้ำส้ม; (ข) แคปซูล ซอง ยาเม็ด ยาอม และยาอม โดยแต่ละชนิดบรรจุสารสกัดในรูปของแข็งหรือเม็ดในปริมาณที่กำหนดไว้ล่วงหน้า (c) ผง; (d) สารแขวนลอยในของเหลวที่เหมาะสม; และ (e) อิมัลชันที่เหมาะสม สูตรผสมของเหลวอาจรวมถึงสารเพิ่มปริมาณ เช่น น้ำและแอลกอฮอล์ ตัวอย่างเช่น เอทานอล เบนซิลแอลกอฮอล์ และโพลีเอทิลีนแอลกอฮอล์ ไม่ว่าจะมีหรือไม่มีการเติมสารลดแรงตึงผิว สารแขวนลอย หรือสารอิมัลซิไฟเออร์ที่ยอมรับได้ทางเภสัชกรรม รูปแบบแคปซูลสามารถเป็นเจลาตินชนิดเปลือกแข็งหรือเปลือกนิ่มธรรมดาที่มี ตัวอย่างเช่น สารลดแรงตึงผิว สารหล่อลื่น และสารตัวเติมเฉื่อย เช่น แลคโตส ซูโครส แคลเซียมฟอสเฟต และแป้งข้าวโพด รูปแบบยาเม็ดอาจรวมถึงแลคโตส ซูโครส แมนนิทอล แป้งข้าวโพด แป้งมันฝรั่ง กรดอัลจินิก ไมโครคริสตัลไลน์เซลลูโลส อะคาเซีย เจลาติน กัวร์กัม คอลลอยด์ซิลิคอนไดออกไซด์ โซเดียมครอสคาร์เมลโลส ทัลก์ แมกนีเซียมสเตียเรต แคลเซียมสเตียเรต สังกะสีสเตียเรต , กรดสเตียริกและส่วนเติมเนื้อยาอื่นๆ สารแต่งสี สารเจือจาง สารบัฟเฟอร์ สารช่วยแตกตัว สารทำให้ชื้น สารกันเสีย สารแต่งกลิ่น และตัวพาที่เข้ากันได้ทางเภสัชวิทยา รูปแบบยาอมสามารถประกอบรวมด้วยสารออกฤทธิ์ในสารปรุงแต่งกลิ่นรส ซึ่งโดยปกติคือซูโครสและอะคาเซียหรือทรากาแคนธ์ รวมทั้งพาสซีย์ซึ่งประกอบรวมด้วยสารออกฤทธิ์ในเบสเฉื่อย เช่น เจลาตินและกลีเซอรีนหรือซูโครสและอะคาเซีย อิมัลชัน เจล และสิ่งที่คล้ายกันที่มี นอกเหนือไปจากสารสกัด สารพาดังที่เป็นที่รู้จักในศิลปวิทยาการแขนงนี้

สารสกัดหรือองค์ประกอบของการประดิษฐ์นี้ เช่น องค์ประกอบทางเภสัชกรรม เพียงอย่างเดียวหรือในการรวมกันกับส่วนประกอบที่เหมาะสมอื่นๆ สามารถถูกทำให้เป็นสูตรละอองลอยที่จะบริหารให้ผ่านทางการสูดดม สูตรละอองลอยเหล่านี้สามารถใส่ลงในสารขับดันที่ยอมรับได้ที่มีความดัน เช่น ไดคลอโรไดฟลูออโรมีเทน โพรเพน ไนโตรเจน และอื่นๆ ในทำนองเดียวกัน นอกจากนี้ยังอาจถูกผสมสูตรเป็นเภสัชภัณฑ์สำหรับการเตรียมแบบไม่ใช้ความดัน เช่น ในเครื่องพ่นฝอยละอองหรือเครื่องฉีดน้ำ

สูตรผสมที่เหมาะสมสำหรับการบริหารให้ทางหลอดเลือดรวมถึงสารละลายสำหรับการฉีดที่ปราศจากเชื้อไอโซโทนิกที่มีน้ำและไม่ใช่น้ำ ซึ่งสามารถมีสารต้านออกซิแดนท์, บัฟเฟอร์, แบคทีเรียและตัวถูกละลายที่ทำให้สูตรผสมไอโซโทนิกมีเลือดของผู้รับที่ตั้งใจไว้ และปราศจากเชื้อที่มีน้ำและไม่ใช่น้ำ สารแขวนลอยที่รวมถึงสารแขวนลอย สารช่วยละลาย สารทำให้ข้น สารทำให้คงตัว และสารกันบูด สารประกอบสามารถถูกบริหารให้ในสารเพิ่มปริมาณที่ยอมรับได้ทางสรีรวิทยาในตัวพาทางเภสัชกรรม เช่น ของเหลวปราศจากเชื้อหรือของผสมของของเหลวที่รวมถึงน้ำ น้ำเกลือ เดกซ์โทรสในน้ำและสารละลายน้ำตาลที่เกี่ยวข้อง แอลกอฮอล์ เช่น เอทานอล ไอโซโพรพานอล หรือเฮกซาเดซิลแอลกอฮอล์ ไกลคอล เช่น โพรพิลีนไกลคอลหรือโพลีเอทิลีนไกลคอล, กลีเซอรอลคีตาล เช่น 2,2-ไดเมทิล-1,3-ไดออกโซเลน-4-เมทานอล, อีเทอร์ เช่น โพลี(เอทิลีนไกลคอล) 400, น้ำมัน, กรดไขมัน, ไขมัน แอซิดเอสเทอร์หรือกลีเซอไรด์ หรือกลีเซอไรด์ของกรดไขมันอะซิติเลตที่มีหรือไม่มีการเติมสารลดแรงตึงผิวที่ยอมรับได้ทางเภสัชกรรม เช่น สบู่หรือผงซักฟอก สารแขวนลอย เช่น เพคติน คาร์โบเมอร์ เมทิลเซลลูโลส ไฮดรอกซีโพรพิลเมทิลเซลลูโลส หรือคาร์บอกซีเมทิลเซลลูโลส หรือสารทำอิมัลชัน และ สารเสริมทางเภสัชกรรมอื่น ๆ

น้ำมันที่สามารถใช้ในสูตรทางหลอดเลือด ได้แก่ น้ำมันปิโตรเลียม สัตว์ พืช หรือน้ำมันสังเคราะห์ ตัวอย่างเฉพาะของน้ำมัน ได้แก่ ถั่วลิสง ถั่วเหลือง งา เมล็ดฝ้าย ข้าวโพด มะกอก น้ำมันเบนซิน และแร่ธาตุ กรดไขมันที่เหมาะสมสำหรับใช้ในสูตรผสมทางหลอดเลือดรวมถึงกรดโอเลอิก กรดสเตียริก และกรดไอโซสเตียริก เอทิลโอลีเอตและไอโซโพรพิลไมริสเตตคือตัวอย่างของเอสเทอร์ของกรดไขมันที่เหมาะสม สบู่ที่เหมาะสมสำหรับใช้ในสูตรผสมทางหลอดเลือดรวมถึงไขมันอัลคาไลโลหะ แอมโมเนียม และเกลือไตรเอทาโนลามีน และสารซักฟอกที่เหมาะสมรวมถึง (a) สารชะล้างที่มีประจุบวก เช่น ตัวอย่างเช่น ไดเมทิลไดอัลคิลแอมโมเนียมเฮไลด์และอัลคิลไพริดิเนียมเฮไลด์ (b) สารชะล้างประจุลบ เช่น ตัวอย่างเช่น อัลคิล แอริล และโอเลฟินซัลโฟเนต อัลคิล โอเลฟิน อีเทอร์ และโมโนกลีเซอไรด์ซัลเฟต และซัลโฟซัคซิเนต (c) สารชะล้างแบบไม่มีไอออน เช่น ตัวอย่างเช่น แฟตตีเอมีนออกไซด์ กรดไขมันอัลคาโนลาไมด์ และโพลิออกซีเอทิลีนโพลิโพรพิลีนโคพอลิเมอร์ (d) สารชะล้างแอมโฟเทอริก เช่น ตัวอย่างเช่น เกลือแอมโมเนียมควอเทอร์นารีของอัลคิล-β-อะมิโนไพรโอเนตและ 2-อัลคิล-อิมิดาโซลีน และ (3) ของผสมของพวกมัน

สูตรผสมที่ไม่ผ่านทางเดินอาหารโดยทั่วไปมีตั้งแต่ประมาณ 0.5 ถึงประมาณ 25% โดยน้ำหนักของสารสกัดในสารละลาย สามารถใช้สารกันบูดและบัฟเฟอร์ที่เหมาะสมในสูตรดังกล่าว เพื่อลดหรือกำจัดการระคายเคืองที่ตำแหน่งที่ทำการฉีด องค์ประกอบดังกล่าวอาจมีสารลดแรงตึงผิวแบบไม่มีประจุหนึ่งชนิดหรือมากกว่าที่มีความสมดุลของไฮโดรฟิล-ไลโปฟิล (HLB) ตั้งแต่ประมาณ 12 ถึงประมาณ 17 ปริมาณของสารลดแรงตึงผิวในสูตรผสมดังกล่าวมีตั้งแต่ประมาณ 5 ถึงประมาณ 15% โดยน้ำหนัก สารลดแรงตึงผิวที่เหมาะสมประกอบด้วยเอสเทอร์ของกรดไขมันโพลีเอทิลีนซอร์บิแทน เช่น ซอร์บิแทนโมโนโอลีเอตและสารเพิ่มน้ำหนักโมเลกุลสูงของเอทิลีนออกไซด์ที่มีเบสที่ไม่ชอบน้ำ ซึ่งก่อรูปขึ้นจากการควบแน่นของโพรพิลีนออกไซด์กับโพรพิลีนไกลคอล สูตรผสมที่ไม่ผ่านทางเดินอาหารสามารถนำเสนอในภาชนะปิดผนึกแบบหน่วยขนาดยาหรือหลายขนาดยา เช่น หลอดแก้วและหลอดเล็ก และสามารถเก็บไว้ในสภาวะแห้งเยือกแข็ง (ไลโอฟิไลซ์) ซึ่งต้องการเพียงการเติมตัวพาของเหลวปลอดเชื้อ ตัวอย่างเช่น น้ำ สำหรับฉีดทันทีก่อนใช้งาน สารละลายสำหรับฉีดและสารแขวนลอยภายนอกสามารถเตรียมได้จากผง แกรนูล และยาเม็ดที่ปราศจากเชื้อของชนิดที่บรรยายไว้ก่อนหน้านี้

สารสกัดและองค์ประกอบของการประดิษฐ์นี้อาจถูกทำให้เป็นสูตรผสมที่ฉีดได้ ข้อกำหนดสำหรับตัวพาทางเภสัชกรรมที่มีประสิทธิผลสำหรับองค์ประกอบที่ฉีดได้เป็นที่ทราบกันดีต่อทักษะทั่วไปในศิลปวิทยาการแขนงนี้ ดู เภสัชกรรมและการประกอบวิชาชีพเภสัชกรรม J. B. Lippincott Co., Philadelphia, Pa., Banker and Chalmers, eds., หน้า 238-250 (1982) และ คู่มือ ASHP เกี่ยวกับยาฉีด ในอีก 4^ไทย ed. หน้า 622-630 (1986)

นอกจากนี้ สารสกัดของการประดิษฐ์นี้อาจถูกสร้างเป็นยาเหน็บโดยการผสมกับเบสหลายชนิด เช่น เบสที่เป็นอิมัลซิไฟเออร์หรือเบสที่ละลายน้ำได้ สูตรผสมที่เหมาะสมสำหรับการบริหารให้ทางช่องคลอดอาจถูกนำเสนอเป็นเพสซารี, ผ้าอนามัยแบบสอด, ครีม, เจล, แป้งเพสต์, โฟมหรือสูตรสเปรย์ที่มีนอกเหนือไปจากสารออกฤทธิ์ สารพาเช่นที่รู้จักในศิลปวิทยาการแขนงนี้ว่าเหมาะสม

ตามที่ระบุไว้ข้างต้น สารสกัดและส่วนประกอบของการประดิษฐ์อาจถูกผลิต นำเสนอ และ/หรือจัดเก็บในรูปแบบใดๆ ได้แก่ ในรูปของของเหลว สารเข้มข้น ผงแห้ง สารละลาย อิมัลชัน หรือสารละลายสต็อก หรือ เข้มข้นของสต็อก

ในบางรูปลักษณ์ องค์ประกอบทางเภสัชกรรมมีไว้สำหรับการบำบัดหรือการป้องกันโรคหรือความผิดปกติอย่างน้อยหนึ่งชนิดที่เกี่ยวข้องกับความเสียหายจากความเครียดออกซิเดชัน

ความเครียดออกซิเดชันเป็นผลมาจากความไม่สมดุลของสภาวะสมดุลของโปรออกซิแดนท์/สารต้านอนุมูลอิสระที่นำไปสู่การสร้างสายพันธุ์ออกซิเจนที่ทำปฏิกิริยาเป็นพิษ อนุมูลอิสระเกิดขึ้นเมื่อออกซิเจนทำปฏิกิริยากับโมเลกุลบางชนิดและเริ่มปฏิกิริยาลูกโซ่ของความเสียหายระหว่างส่วนประกอบของเซลล์ที่สำคัญ ดังนั้นการอักเสบและกระบวนการออกซิเดชั่นจึงเชื่อมโยงถึงกัน นอกจากนี้ ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันยังสามารถกระตุ้นความเป็นพิษของเซลล์เม็ดเลือด กระตุ้นการปลดปล่อยไซโตไคน์ที่อักเสบ และกระตุ้นการผลิตโกรทแฟคเตอร์ ความเครียดออกซิเดทีฟมีบทบาทสำคัญในการก่อตัวของคราบจุลินทรีย์และการอักเสบของหลอดเลือดโดยธรรมชาติอาจเป็นตัวทำนายที่แข็งแกร่งของหลอดเลือด

ดังนั้น ตามที่ใช้ในที่นี้ 'ความเสียหายจากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน' หมายถึงความเสียหายต่อเซลล์ เนื้อเยื่อ และ/หรืออวัยวะของสัตว์ รวมถึงมนุษย์ ซึ่งเกิดจากความไม่สมดุลระหว่างการผลิตออกซิเจนที่ทำปฏิกิริยาและความสามารถของระบบชีวภาพในการเตรียมพร้อม ล้างพิษตัวกลางปฏิกิริยาหรือซ่อมแซมความเสียหายที่เกิดขึ้นได้อย่างง่ายดาย บ่อยครั้งที่การรบกวนในสถานะรีดอกซ์ปกตินี้อาจทำให้เกิดผลกระทบที่เป็นพิษผ่านการผลิตเปอร์ออกไซด์และอนุมูลอิสระที่ทำลายส่วนประกอบทั้งหมดหรือบางส่วนของเซลล์ รวมทั้งโปรตีน ไขมัน และดีเอ็นเอ

ในบางรูปลักษณ์ ความเสียหายจากความเครียดออกซิเดชันเกี่ยวข้องกับความผิดปกติหรือโรคที่เลือกมาจากหลอดเลือดแดงแข็ง, โรคพาร์กินสัน, หัวใจล้มเหลว, กล้ามเนื้อหัวใจตาย, โรคหรือความผิดปกติของระบบประสาท, โรคตา, อาการอ่อนล้าเรื้อรังและอื่น ๆ

โรคหลอดเลือดแข็งตัวซึ่งเป็นสาเหตุการเจ็บป่วยและการเสียชีวิตอันดับต้น ๆ ของผู้ที่มีวิถีชีวิตแบบตะวันตก พัฒนาขึ้นจากปัจจัยเสี่ยงต่าง ๆ ภาวะโคเลสเตอรอลในเลือดสูงเป็นปัจจัยเสี่ยงที่สำคัญสำหรับหลอดเลือด และการลดความเข้มข้นของโคเลสเตอรอลในพลาสมาโดยการรักษาด้วยยาจะลดอุบัติการณ์ของโรคหัวใจและหลอดเลือด รอยโรค atherosclerotic มีลักษณะเฉพาะคือความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชั่นที่เร่งขึ้นและการก่อตัวของสายพันธุ์ออกซิเจนที่มีปฏิกิริยา (ROS) ซึ่งโจมตีไขมันในไลโปโปรตีนเช่นเดียวกับในแมคโครฟาจของหลอดเลือดแดง การปรับเปลี่ยนออกซิเดชันของไลโปโปรตีนความหนาแน่นต่ำ (LDL) มีบทบาทสำคัญในการเกิดโรคของหลอดเลือด Oxidized LDL (Ox-LDL) เป็นตัวการหลักในการพัฒนารอยโรคหลอดเลือด เนื่องจากกระตุ้นการสะสมของคอเลสเตอรอลมาโครฟาจและการสร้างโฟมเซลล์ ตรงกันข้ามกับการเกิดไขมันในหลอดเลือดของ LDL ระดับไลโปโปรตีนความหนาแน่นสูง (HDL) ในซีรั่มมีความสัมพันธ์แบบผกผันกับความเสี่ยงของหลอดเลือดแดงแข็งตัว HDL ออกแรงยับยั้งการเกิดออกซิเดชันของ LDL และผลกระทบนี้อาจเกี่ยวข้องกับเอนไซม์พาราออกโซเนส 1 (PON1) ที่เกี่ยวข้อง

หลอดเลือดยังเป็นกระบวนการหรือความผิดปกติที่เกี่ยวข้องกับการสะสมของคราบพลัคที่ด้านในของหลอดเลือดแดง รวมถึงในหัวใจ สมอง แขน ขา และกระดูกเชิงกราน ดังนั้น คำนี้ยังอาจหมายถึงการสะสมที่เพิ่มขึ้นของเซลล์กล้ามเนื้อเรียบ เซลล์ภูมิคุ้มกัน (เช่น ลิมโฟไซต์ มาโครฟาจ หรือโมโนไซต์) ผลิตภัณฑ์ไขมัน (เช่น ไลโปโปรตีนหรือคอเลสเตอรอล) ของเสียจากเซลล์ แคลเซียม หรือสารอื่นๆ ภายใน เยื่อบุชั้นในของหลอดเลือดส่งผลให้หลอดเลือดตีบหรืออุดตันและเกิดโรคที่เกี่ยวข้องกับหลอดเลือด

เนื่องจากภาวะหลอดเลือดแดงแข็งแสดงอยู่ภายในหลอดเลือดแดงขนาดใหญ่และขนาดกลาง การรักษาหรือการป้องกันมักส่งผลต่อการพัฒนาของการอักเสบเรื้อรังภายในหลอดเลือดแดง

สารสกัดของการประดิษฐ์นี้จึงเหมาะสำหรับการรักษาและการป้องกันสภาวะต่างๆ เช่นกัน ซึ่งรวมถึงภาวะหลอดเลือดแดงแข็งของหลอดเลือดหัวใจที่ก่อให้เกิดโรคหลอดเลือดหัวใจ กล้ามเนื้อหัวใจตาย หลอดเลือดหัวใจตีบ และโรคหลอดเลือดหัวใจตีบตัน หลอดเลือดของหลอดเลือดแดงที่ส่งระบบประสาทส่วนกลางทำให้เกิดโรคหลอดเลือดสมองและภาวะสมองขาดเลือดชั่วคราว หลอดเลือดของการไหลเวียนส่วนปลายทำให้เกิด claudication เป็นระยะ ๆ และเนื้อตายเน่า; หลอดเลือดของหลอดเลือดแดงของการไหลเวียนของ splanchnic ทำให้เกิด mesenteric ischemia; และหลอดเลือดแดงไตตีบ

ดังนั้น องค์ประกอบของการประดิษฐ์ยังเหมาะสมเพิ่มเติมสำหรับใช้ในการบำบัดหรือป้องกันโรคหรือความผิดปกติอย่างน้อยหนึ่งชนิดที่เกี่ยวข้องกับความเข้มข้นของไขมันไตรกลีเซอไรด์ในซีรั่มที่เพิ่มขึ้นหนึ่งชนิดหรือมากกว่า, ความเข้มข้นของโคเลสเตอรอลในซีรัมและความเข้มข้นของโคเลสเตอรอลทั้งหมดและ LDL ในซีรัมและ HDL- ที่ลดลง ความเข้มข้นของคอเลสเตอรอล

ตามที่ใช้ในที่นี้ โรคหรือความผิดปกติดังกล่าวที่เกี่ยวข้องกับความเข้มข้นของลิพิดไตรกลีเซอไรด์ในเลือดที่เพิ่มขึ้น, ความเข้มข้นของคอเลสเตอรอลในเลือดและความเข้มข้นของคอเลสเตอรอลรวมและ LDL ในซีรัมและความเข้มข้นของคอเลสเตอรอล HDL ที่ลดลง เกี่ยวข้องกับระดับคอเลสเตอรอลสูงผิดปกติ (โคเลสเตอรอลในเลือดสูง) และ/หรือระดับ LDL ที่สูง หรือไตรกลีเซอไรด์ และ/หรือความเข้มข้นของ HDL ที่ทำหน้าที่ต่ำกว่า เช่น โรคหลอดเลือดหัวใจหรือโรคหัวใจและหลอดเลือดในรูปแบบอื่นๆ รวมทั้งโรคหรือความผิดปกติที่เกี่ยวข้องกับการพัฒนาไขมันในหลอดเลือดแดง (เช่น หลอดเลือดแดงแข็ง) เช่น ภาวะไขมันในเลือดต่ำ โรคหลอดเลือดส่วนปลาย เบาหวาน และ ความดันโลหิตสูง.

ความเครียดออกซิเดทีฟยังเชื่อมโยงกับการตายของเซลล์ประสาทที่เกี่ยวข้องกับสภาวะความเสื่อมของระบบประสาทต่างๆ โรคเกี่ยวกับระบบประสาทคือภาวะที่เซลล์ของสมองและไขสันหลังสูญเสียไป โดยปกติแล้ว การเสื่อมสภาพของระบบประสาทจะเริ่มนานก่อนที่ผู้ป่วยจะมีอาการใดๆ เนื่องจากเซลล์สมองได้รับออกซิเจนปฏิกิริยาอย่างต่อเนื่องซึ่งเกิดจากการเผาผลาญออกซิเดชัน ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันจึงเป็นหนึ่งในปัจจัยที่จูงใจให้เกิดความผิดปกติทางระบบประสาทในผู้ใหญ่ และมีส่วนในการทำให้เกิดโรคของความผิดปกติบางอย่าง เช่น โรคพาร์กินสัน

สารสกัดหรือองค์ประกอบของการประดิษฐ์ยังใช้สำหรับการบำบัดหรือการป้องกันโรคหรือความผิดปกติที่เกี่ยวข้องกับการเสื่อมของระบบประสาทอย่างน้อยหนึ่งชนิด

'โรคหรือความผิดปกติของระบบประสาทเสื่อม' ในบริบทของการประดิษฐ์นี้ อ้างอิงถึงสภาวะหนึ่งอย่างหรือมากกว่าที่เซลล์ของสมองและไขสันหลังสูญเสียไปอันเป็นผลจากการเสื่อมสภาพของเซลล์ประสาทหรือปลอกไมอีลินของพวกมัน ซึ่งเมื่อเวลาผ่านไปจะนำไปสู่ความผิดปกติ และความพิการอันเป็นผลจากสิ่งนี้ ดังนั้น โรคหรือความผิดปกติของระบบประสาทคือโรคที่เกี่ยวข้องกับสภาวะที่ก่อให้เกิดปัญหาเกี่ยวกับการเคลื่อนไหว เช่น การเคลื่อนไหวผิดปกติ และรวมถึงสภาวะที่ส่งผลต่อความจำและเกี่ยวข้องกับภาวะสมองเสื่อม ตัวอย่างที่ไม่จำกัดบางตัวอย่างของโรคหรือความผิดปกติของระบบประสาทรวมถึงโรคพิษสุราเรื้อรัง, โรคอเล็กซานเดอร์, โรคอัลเปอร์, โรคอัลไซเมอร์, โรคกล้ามเนื้ออ่อนแรงด้านข้างเส้นโลหิตตีบ (โรคลู เกห์ริก), ataxia telangiectasia, โรคแบตเทน (ยังรู้จักในชื่อโรคสปีลเมเยอร์-โวกต์-โจเกรน-แบทเทน) โรคสมองจากฟองน้ำในวัว (BSE), โรค canavan, สมองพิการ, กลุ่มอาการค็อกเคย์น, การเสื่อมของคอร์ติโคบาซัล, โรค Creutzfeldt-Jakob, การเสื่อมของกล้ามเนื้อส่วนหน้า, โรคฮันติงตัน, ภาวะสมองเสื่อมที่เกี่ยวข้องกับเอชไอวี, โรคเคนเนดี, โรค Krabbe, ภาวะสมองเสื่อมจากร่างกายที่มีไขมันต่ำ, โรคระบบประสาท, Machado- โรคโจเซฟ (spinocerebellar ataxia ชนิดที่ 3), การฝ่อหลายระบบ, โรคปลอกประสาทเสื่อมแข็ง, โรคลมหลับ, โรค Niemann Pick, โรคพาร์กินสัน, โรค Pelizaeus-Merzbacher, โรค Pick, โรคเส้นโลหิตตีบด้านข้างหลัก, โรค prion, อัมพาตเหนือศีรษะแบบก้าวหน้า, โรค Refsum's, โรค Sandhoffs, โรคของเด็ก การเสื่อมของไขสันหลังแบบกึ่งเฉียบพลันรองจากเปอร์นิซิโอ โรคโลหิตจางจากเรา, spinocerebellar ataxia, การฝ่อของกล้ามเนื้อไขสันหลัง, โรค Steele-Richardson-Olszewski และ tabes dorsalis

ในอีกลักษณะหนึ่ง การประดิษฐ์นี้จัดให้มีวิธีการสำหรับการบำบัดหรือการป้องกันโรคหรือความผิดปกติอย่างน้อยหนึ่งชนิดที่เกี่ยวข้องกับความเสียหายจากความเครียดออกซิเดชันในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ซึ่งประกอบรวมด้วยการบริหารให้สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมดังกล่าวด้วยปริมาณที่มีประสิทธิผลของสารสกัดตามการประดิษฐ์ หรือองค์ประกอบทางเภสัชกรรมที่ประกอบรวมด้วยของสิ่งนั้น

ในลักษณะเพิ่มเติมของการประดิษฐ์นี้มีการจัดให้มีวิธีการสำหรับการบำบัดหรือการป้องกันโรคหรือความผิดปกติอย่างน้อยหนึ่งชนิดที่เกี่ยวข้องกับความเข้มข้นของไขมันไตรกลีเซอไรด์ในซีรั่มที่เพิ่มขึ้นหนึ่งชนิดหรือมากกว่า, ความเข้มข้นของโคเลสเตอรอลในซีรัมและซีรั่มทั้งหมดและความเข้มข้นของโคเลสเตอรอล LDL และ HDL ที่ลดลง - ความเข้มข้นของคอเลสเตอรอลในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ซึ่งประกอบรวมด้วยการบริหารให้สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมดังกล่าวด้วยปริมาณที่มีประสิทธิผลของสารสกัดตามการประดิษฐ์หรือองค์ประกอบทางเภสัชกรรมที่ประกอบรวมด้วยสิ่งนั้น

ในอีกลักษณะหนึ่งของมัน การประดิษฐ์นี้จัดให้มีวิธีการสำหรับการบำบัดหรือการป้องกันโรคหรือความผิดปกติที่เกี่ยวข้องกับการเสื่อมของระบบประสาทอย่างน้อยหนึ่งชนิดในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมซึ่งประกอบรวมด้วยการบริหารให้สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมดังกล่าวด้วยปริมาณที่มีประสิทธิผลของสารสกัดตามการประดิษฐ์หรือองค์ประกอบทางเภสัชกรรมซึ่งประกอบรวมด้วย ของมัน

ในลักษณะเพิ่มเติม การประดิษฐ์นี้จัดให้มีสารต้านอนุมูลอิสระซึ่งประกอบรวมด้วยสารสกัดของการประดิษฐ์

ในรูปลักษณ์เพิ่มเติม การประดิษฐ์นี้จัดให้มีสารลดโคเลสเตอรอลซึ่งประกอบรวมด้วยสารสกัดของการประดิษฐ์

ภายในขอบเขตของการประดิษฐ์นี้ คำว่า 'การรักษาและ/หรือการป้องกัน' หมายถึงการบริหารให้ปริมาณทางการรักษาขององค์ประกอบของการประดิษฐ์นี้ซึ่งมีประสิทธิผลในการปรับปรุงอาการที่ไม่พึงประสงค์ที่เกี่ยวข้องกับโรค เพื่อป้องกันการแสดงอาการดังกล่าว อาการก่อนที่จะเกิดขึ้น, เพื่อชะลอการดำเนินของโรค, ชะลอการเสื่อมสภาพของอาการ, เพื่อเพิ่มระยะการโจมตีของโรค, ชะลอความเสียหายที่แก้ไขไม่ได้ซึ่งเกิดจากระยะเรื้อรังที่ก้าวหน้าของโรค, เพื่อชะลอการโจมตีของโรคดังกล่าว ระยะลุกลามเพื่อลดความรุนแรงหรือรักษาโรค เพื่อเพิ่มอัตราการรอดชีวิตหรือฟื้นตัวอย่างรวดเร็ว หรือเพื่อป้องกันไม่ให้เกิดโรคขึ้น หรือรวมกันตั้งแต่ 2 อย่างขึ้นไป

สารสกัดหรือองค์ประกอบของการประดิษฐ์อาจถูกบริหารให้โดยวิธีการใดๆ ที่เป็นที่รู้จักต่อบุคคลที่มีความชำนาญในศิลปวิทยาการแขนงนี้ โดยปกติแล้ว การบริหารให้สารสกัดหรือองค์ประกอบทางเภสัชกรรมซึ่งประกอบรวมด้วยสิ่งนั้นเป็นปริมาณที่มีประสิทธิผลของสารสกัดที่ประกอบรวมในองค์ประกอบ 'ปริมาณที่มีประสิทธิผล' สำหรับจุดประสงค์ในที่นี้ถูกกำหนดโดยการพิจารณาที่อาจทราบในศิลปวิทยาการแขนงนี้ ปริมาณต้องมีประสิทธิผลเพื่อให้บรรลุผลการรักษาที่ต้องการตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ทั้งนี้ขึ้นอยู่กับชนิดและความรุนแรงของโรคที่จะรักษาและระบบการรักษา ปริมาณที่มีประสิทธิผลโดยทั่วไปกำหนดในการทดลองทางคลินิกที่ออกแบบอย่างเหมาะสม (เช่น การศึกษาช่วงขนาดยา) และบุคคลที่เชี่ยวชาญในศิลปวิทยาการแขนงนี้จะทราบวิธีดำเนินการทดลองดังกล่าวอย่างเหมาะสมเพื่อกำหนดปริมาณที่มีประสิทธิผล ตามที่ทราบโดยทั่วไป ปริมาณที่มีประสิทธิภาพขึ้นอยู่กับปัจจัยหลายอย่างรวมถึงความสัมพันธ์ของลิแกนด์กับตัวรับ โปรไฟล์การกระจายของมันภายในร่างกาย พารามิเตอร์ทางเภสัชวิทยาที่หลากหลาย เช่น ครึ่งชีวิตในร่างกาย ผลข้างเคียงที่ไม่ต้องการ ถ้า ใด ๆ ตามปัจจัยต่าง ๆ เช่น อายุและเพศ เป็นต้น

สารสกัดของการประดิษฐ์ยังอาจถูกใช้เพื่อเตรียมองค์ประกอบสำหรับใช้ในการประยุกต์ใช้ที่ไม่ใช่เภสัชภัณฑ์ที่หลากหลาย ในบางรูปลักษณ์ องค์ประกอบคือองค์ประกอบต่อต้านอนุมูลอิสระสำหรับใช้เป็นสารกันบูดสำหรับการใช้งานที่หลากหลายในอุตสาหกรรมอาหาร, อุตสาหกรรมเครื่องสำอาง, การรักษาโรค ฯลฯ และสำหรับการยับยั้งการเกิดออกซิเดชัน LDL ของทองแดงที่เหนี่ยวนำด้วยไอออนทองแดง ในหลอดทดลอง หรือ ในร่างกาย

สารสกัดที่เปิดเผยในที่นี้อาจใช้เป็นอาหารเสริมหรือเป็นส่วนประกอบที่ออกฤทธิ์ของอาหารเสริมดังกล่าวเพิ่มเติม ในบางรูปลักษณ์ อาหารเสริมเหมาะสำหรับการบริโภคโดยทั้งมนุษย์และสัตว์ที่ไม่ใช่มนุษย์ สำหรับการจัดการความเป็นอยู่ที่ดี และการรักษาและการป้องกันสภาวะและความผิดปกติที่เกี่ยวข้องกับความเสียหายจากออกซิเดชัน

ภายในบริบทของการประดิษฐ์นี้ ผลิตภัณฑ์เสริมอาหารซึ่งขึ้นอยู่กับธรรมชาติและรูปแบบทางกายภาพของมัน เช่น ไลโปฟิลิกหรือชอบน้ำในธรรมชาติ อาจประกอบรวมเพิ่มเติมด้วยอิมัลซิไฟเออร์ สารทำให้คงตัว สารต้านอนุมูลอิสระและสารเติมแต่งอื่นๆ หนึ่งชนิดหรือมากกว่า การใช้งานทำจากอิมัลซิไฟเออร์ที่เข้ากันได้ในอาหาร เช่น ฟอสโฟลิพิด ตัวอย่างเช่น เลซิติน, พอลิออกซีเอทิลีนซอร์บิแทนโมโนหรือไตรสเตียเรต, โมโนลอเรต, โมโนพาลมิเทต, โมโนหรือไตรโอลีเอต, โมโนหรือไดกลีเซอไรด์ อิมัลซิไฟเออร์ สารทำให้คงตัว สารต้านอนุมูลอิสระ และสารเติมแต่งเหล่านี้อาจถูกเติมลงในสารสกัดของการประดิษฐ์ตามการใช้ขั้นสุดท้ายของสารสกัดดังกล่าว

อาหารเสริมที่เปิดเผยในที่นี้อาจมีสารออกฤทธิ์ทางชีวภาพสังเคราะห์หรือจากธรรมชาติ เช่น กรดอะมิโน กรดไขมัน วิตามิน แร่ธาตุ โพลีฟีนอล ฯลฯ ซึ่งสามารถเติมได้โดยการผสมแบบแห้งหรือแบบเปียกเข้ากับองค์ประกอบดังกล่าวก่อนการพาสเจอร์ไรส์และ/หรือการทำให้แห้ง

ในบางรูปลักษณ์ ผลิตภัณฑ์เสริมอาหารคือสูตรสมบูรณ์ทางโภชนาการ ผลิตภัณฑ์นม เครื่องดื่มแช่เย็นหรือคงตัวในชั้นวาง เกลือแร่หรือน้ำบริสุทธิ์ เครื่องดื่มที่เป็นของเหลว ซุป ผลิตภัณฑ์เสริมอาหาร อาหารทดแทน โภชนาการแบบแท่ง ลูกกวาด, นมหรือผลิตภัณฑ์นมหมัก, โยเกิร์ต, นมผง, ผลิตภัณฑ์โภชนาการสำหรับลำไส้, สูตรสำหรับทารก, ผลิตภัณฑ์โภชนาการสำหรับทารก, ผลิตภัณฑ์จากธัญพืชหรือผลิตภัณฑ์จากธัญพืชหมัก, ไอศกรีม, ช็อคโกแลต, กาแฟ ผลิตภัณฑ์ทำอาหาร เช่น มายองเนส มะเขือเทศบด หรือน้ำสลัด หรืออาหารสัตว์เลี้ยง ตามรูปลักษณ์เหล่านี้ สารสกัดของการประดิษฐ์อาจถูกกระจายไปในอาหารหรือเครื่องดื่มเพื่อให้มีปริมาณสารอาหารที่ออกฤทธิ์ทางชีวภาพในแต่ละวัน ซึ่งส่วนใหญ่ขึ้นอยู่กับชนิดของอาหารที่สารสกัดถูกกระจาย ผลที่ต้องการ และเนื้อเยื่อเป้าหมาย . ปริมาณของอาหารเสริมที่แต่ละบุคคลจะบริโภคเพื่อให้ได้ผลที่เป็นประโยชน์นั้นขึ้นอยู่กับปัจจัยต่างๆ อย่างใดอย่างหนึ่งหรือหลายอย่าง เช่น ประเภทของอาหารเสริมและ/หรืออาหารและอายุและน้ำหนักของผู้บริโภค

ผลิตภัณฑ์เสริมอาหารสำหรับการบริหารให้ทางปากอาจอยู่ในรูปแคปซูล แคปซูลเจลาติน แคปซูลนิ่ม ยาเม็ด ยาเม็ดเคลือบน้ำตาล ยาเม็ด เพสต์หรือพาสทิล กัม หรือสารละลายหรืออิมัลชันที่ดื่มได้ น้ำเชื่อมหรือเจล ด้วยขนาดยาประมาณ 0.1 ถึง 100% ของสารสกัดของการประดิษฐ์ ซึ่งสามารถถ่ายโดยตรงกับน้ำหรือโดยวิธีอื่นใดที่ทราบ สารเสริมนี้อาจรวมถึงสารให้ความหวาน สารเพิ่มความคงตัว สารต้านอนุมูลอิสระ สารเติมแต่ง สารแต่งกลิ่นหรือสี

เป็นที่ชื่นชมว่าคุณลักษณะบางอย่างของการประดิษฐ์ ซึ่งอธิบายไว้ในบริบทของรูปลักษณ์ที่แยกจากกัน เพื่อความชัดเจน อาจถูกจัดให้มีร่วมกันในรูปลักษณ์เดียว ในทางกลับกัน คุณลักษณะต่างๆ ของการประดิษฐ์ ซึ่งอธิบายไว้ในบริบทของรูปลักษณ์เดียวเพื่อความกระชับ อาจถูกจัดให้มีแยกต่างหากหรือในการรวมกันย่อยที่เหมาะสมใดๆ หรือตามที่เหมาะสมในรูปลักษณ์อื่นๆ ที่อธิบายไว้ของการประดิษฐ์ คุณลักษณะบางอย่างที่อธิบายไว้ในบริบทของรูปลักษณ์ต่างๆ จะไม่ได้รับการพิจารณาคุณลักษณะที่จำเป็นของรูปลักษณ์เหล่านั้น เว้นแต่รูปลักษณ์จะไม่ทำงานโดยไม่มีองค์ประกอบเหล่านั้น

ตามที่ใช้ในที่นี้ กระบวนการ สารสกัด หรือส่วนประกอบของการประดิษฐ์อาจรวมถึงขั้นตอนหรือส่วนผสมหรือชิ้นส่วนเพิ่มเติม เฉพาะในกรณีที่ขั้นตอน ส่วนผสม หรือส่วนประกอบเพิ่มเติมไม่เปลี่ยนแปลงลักษณะพื้นฐานและแปลกใหม่ของกระบวนการ สารสกัด และองค์ประกอบที่อ้างสิทธิ์ ตามที่ใช้ในที่นี้ รูปเอกพจน์ “a”, “an” และ “the” รวมถึงการอ้างอิงพหูพจน์ เว้นแต่บริบทจะระบุเป็นอย่างอื่นอย่างชัดเจน

รูปลักษณ์และลักษณะต่างๆ ของการประดิษฐ์นี้ตามที่อธิบายไว้ข้างต้นและตามที่อ้างสิทธิ์ในส่วนการอ้างสิทธิ์ด้านล่าง พบการสนับสนุนการทดลองในตัวอย่างต่อไปนี้

1. การทำให้แห้งของน้ำ Marula

ผลมารูลาถูกเก็บจากพื้นดินภายใน 10 วันนับจากเวลาที่ผลร่วงหล่นจากต้น และถูกบีบด้วยเครื่องอัดไฮดรอลิกที่มีแรงดันต่ำกว่า 35 บาร์ (เครื่องคั้นมะกอก Enorossi รุ่น 250) น้ำผลไม้ถูกรวบรวมและเก็บไว้แช่แข็งที่ −20° C เป็นระยะเวลาต่างกันถึง 3 ปี ทันทีก่อนที่จะอบแห้ง น้ำผลไม้จะถูกละลายน้ำแข็งและเจาะรูบนถาดอะลูมิเนียมฟอยล์ เพื่อสร้างชั้นที่สม่ำเสมอ หนา 0.7 ซม. ถาดที่มีน้ำผลไม้ถูกวางไว้ในเตาอบสุญญากาศ (Tuttnauer, ตู้อบฆ่าเชื้อแบบแห้ง รุ่น 11-900) ตั้งไว้ที่ 57° C และ −760 มม. ปรอท เป็นระยะเวลา 3 วัน หลังจากการอบแห้ง ซึ่งมีความชื้นประมาณ 1% สารที่เป็นของแข็งจะถูกบดเพื่อให้ได้ผงซึ่งละลายได้ง่ายในน้ำ ผงถูกเก็บไว้ใน desiccator ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลาหลายเดือน

2. การเตรียมสารสกัดจาก Marula

A. สารสกัดเอทานอล (ในที่นี้เรียกว่า 'สารสกัด I')

สำหรับการเตรียมสารสกัด I นำน้ำมารูลาแห้ง 15 กรัมมาบดเป็นผง แขวนในเอทานอล 50% 50 มล. แล้ววางบนเชคเกอร์เป็นเวลา 20 นาที สารแขวนลอยถูกหมุนเหวี่ยงและส่วนลอยเหนือตะกอนถูกถ่ายโอนไปยังขวดกลม ทำซ้ำขั้นตอนนี้ด้วยเอทานอล 50% อีก 25 มล. ส่วนเหนือตะกอนทั้งสองถูกรวมเข้าด้วยกันและเอธานอลและน้ำบางส่วนถูกกำจัดออกโดยใช้เครื่องระเหยแบบหมุน สารละลายที่เป็นน้ำ 30 มล. สุดท้ายมีความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระ FRAP (เฟอร์ริกรีดิวซ์แอนติออกซิแดนต์) ที่ 1,390 มก. เทียบเท่าวิตามินซีต่อ 100 มล. (3 เท่าของความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระเมื่อเทียบกับวิตามินซี 460 มก. เทียบเท่าต่อ 100 มล. ที่วัดได้ในน้ำผลไม้ดั้งเดิม) . สารสกัด I อาจถูกสร้างใหม่ในน้ำ

B. เศษส่วนที่พร่องโพลีฟีนอล (ในที่นี้เรียกว่า 'สารสกัด II'):

สำหรับการเตรียมสารสกัด II น้ำมารูลาทั้งหมดถูกส่งผ่านผ้า 8 ชั้นและปั่นแยกเพื่อเอาเศษเนื้อเยื่อผลไม้ออก น้ำใส 200 มล. ถูกนำไปใช้กับคอลัมน์ Sepabeads 20 มล. ที่อัตราการไหล 0.4 มล./นาที รวบรวมเศษส่วน 12 มล. เศษส่วนที่มีความเข้มข้นของของแข็งที่ละลายน้ำได้ทั้งหมด (TSS) เท่ากันกับน้ำผลไม้ใส (12.9%) ถูกนำมารวมกัน ฤทธิ์ต้านออกซิเดชันของ FRAP ที่วัดได้ในส่วนนี้คือ 379 มก. เทียบเท่าวิตามินซีต่อ 100 มล. ประมาณ 83% ของค่าที่วัดได้ในน้ำใสที่ใช้กับคอลัมน์

C. เศษส่วนโพลีฟีนอล (ในที่นี้เรียกว่า 'สารสกัด III')

สำหรับการเตรียมสารสกัด III การสกัดแบบกลุ่มถูกใช้เพื่อปลดปล่อยโพลีฟีนอลออกจากเม็ดบีดที่อธิบายไว้ข้างต้น เม็ดบีดถูกถ่ายโอนไปยังขวดแก้วก้นกว้างและผสมอย่างเข้มงวดกับสารละลายเอทานอล 85% สารละลายเอทานอลถูกนำกลับมาใช้ใหม่และทำซ้ำขั้นตอนนี้จนกระทั่งสารละลายสกัดไม่มีสี สารละลายเอทานอลที่รวบรวมได้ถูกนำมารวมกัน วางในขวดกลม และระเหยให้แห้งด้วยเครื่องระเหยแบบหมุน ฟิล์มแห้งละลายในน้ำ 1 มล. ผลิตภัณฑ์ที่ได้มีกิจกรรม FRAP เทียบเท่าวิตามินซี 5,735 มก. ต่อ 100 มล. ซึ่งเป็น ˜12 เท่าของกิจกรรมที่วัดได้ในน้ำผลไม้ดั้งเดิม

เพื่อให้ได้เครื่องดื่มมารูลาเสริมโพลีฟีนอล 15 มล. ของน้ำผลไม้ที่พร่องโพลีฟีนอล (สารสกัด II) ผสมกับเศษส่วนโพลีฟีนอลที่แยกได้ (สารสกัด III); น้ำถูกเติมลงในปริมาตรสุดท้ายของเครื่องดื่มมารูล่า 25 มล. (ประกอบด้วยสารสกัดที่อธิบายไว้ในที่นี้ II และ III) ที่มีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ FRAP เทียบเท่าวิตามินซี 446 มก. ต่อ 100 มล. ซึ่ง 50% มาจากวิตามินซีและ 50% โดยโพลีฟีนอลเมื่อเปรียบเทียบกับ ˜75% และ 25% ตามลำดับ ในน้ำผลไม้ดั้งเดิม

โพลีฟีนอลทั้งหมดถูกกำหนดหาทางสเปกโตรโฟโตเมตริกโดยวิธีการของ Singleton ที่ดัดแปลงสำหรับปริมาตรขนาดเล็ก [Singleton V L, et al, Am J. Emology และการปลูกองุ่น 16:144-158, 1965]. กรดแกลลิก (GA) เป็นมาตรฐาน สารละลาย GA สต็อกถูกเตรียมในน้ำที่ความเข้มข้น 2 มิลลิโมลาร์ ใช้ปริมาตร 10, 20, 40 และ 60 ไมโครลิตรสำหรับเส้นโค้งมาตรฐาน ผลลัพธ์จะแสดงเป็นค่าเทียบเท่าของ GA (GAE) ในบางครั้ง pyrogallol แทนที่ GA เป็นมาตรฐาน

3. วิธีในหลอดทดลอง

รูปที่. 1 แสดงความเข้มข้นของโพลีฟีนอลทั้งหมดในน้ำมารูลาที่กรองแล้ว สารสกัดเอทานอลของน้ำมารูลาแห้ง (สารสกัด I) และผลิตภัณฑ์ที่ได้จากการรวมสารสกัด II และ III ที่อธิบายไว้ในที่นี้ ความเข้มข้นรวมเท่ากับ 7.15, 8.34 และ 9.35 มก. ของกรดแกลลิกเทียบเท่า (GAE)/มล. ตามลำดับ

รูปที่. 2 นำเสนอโครมาโตแกรม HPLC ของน้ำมะรุมและสารสกัดน้ำผลไม้ สารสกัดจากน้ำผลไม้แต่ละส่วนถูกล้าง (1:3) ด้วยเมทานอล 80% ที่เสริมด้วย NaF 2 มิลลิโมลาร์เพื่อสกัดสารต้านอนุมูลอิสระ สารแขวนลอยถูกหมุนเหวี่ยงและส่วนลอยเหนือตะกอนถูกกรองผ่านตัวกรอง 0.45 ไมโครเมตรก่อนการฉีด วิเคราะห์ตัวอย่าง 20 ไมโครลิตรโดยใช้ระบบ LaChrom Merck Hitachi HPLC ซึ่งประกอบด้วยปั๊ม L7100, เตาอบแบบคอลัมน์ L7350 (ตั้งค่าที่ 28° C), เครื่องผสมสารขจัดแก๊ส L-7614 และหัวฉีดด้วยมือ Rheodyne ควบคู่กับเครื่องตรวจจับความยาวหลายคลื่น (Jasco MD- 2010 Plus), อินเทอร์เฟซ (Jasco LC-Net II/ADC) และซอฟต์แวร์ทางวิทยาศาสตร์ (EZChrom Elite Client/Server เวอร์ชัน 3.1.6 บิลด์ 3.1.6.2433) คอลัมน์ Purospher®Star RP-18 แบบปิดท้าย (คาร์ทริดจ์ LichroCART® 250×4 มม. ขนาดอนุภาค 5 μm) พร้อมคอลัมน์ป้องกัน Lichrospher®100 RP-18 แบบปิดปลาย (คาร์ทริดจ์ LichroCART® 4×4 มม. ขนาดอนุภาค 5 μm ) ถูกใช้.

ปลายคอลัมน์เชื่อมต่อกับตัวเก็บเศษส่วน (Pharmacia Fine Chemicals, FRAC-100) เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย (A) กรดฟอสฟอริก (0.1%), pH 2.4 และ (B) เมทานอล; เกรเดียนต์ของสารละลายถูกกำหนดให้เป็นเมทานอล 0 ถึง 100% ใน 30 นาที อัตราการไหลคือ 0.6 มล. นาที⁻¹.

ความเข้มข้นของวิตามินซีได้รับการประเมินจากพื้นที่ใต้จุดสูงสุดของโครมาโตแกรมที่สอดคล้องกันโดยใช้วิตามินซีเกรด HPLC (Fluka) สำหรับการสอบเทียบ เมทานอลเป็นเกรด HPLC (LiChrosolv Merck); น้ำถูกทำให้บริสุทธิ์และกรองโดยใช้ขั้นตอนที่ทราบ กรดฟอสฟอริก (ฟรุตทารมณ์) และ NaF (ซิกมา) อยู่ในระดับวิเคราะห์ได้ คลังมาตรฐานฟีนอลถูกสร้างขึ้นโดยใช้คาเทชิน กรดคลอโรเจนิก คาเฟอีน และกรดแทนนิกจากซิกมา และกรด 2-ไฮดรอกซีเบนโซอิก (ซาลิไซลิก) เควอซิทิน-3-เบต้า-กลูโคไซด์ และกรดเอลลาจิกจาก Fluka

เนื่องจากโครมาโตแกรมของ HPLC ระบุว่าสารสกัด I, II, III แต่ละชนิดมีองค์ประกอบเฉพาะสำหรับสารประกอบฟีนอล [กรดฟีนอล (PA) และแทนนิน (T)] และวิตามินซี สารสกัดทั้งสามมีความแตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญในองค์ประกอบของสารต้านอนุมูลอิสระเมื่อเปรียบเทียบกับของแท้ น้ำผลไม้.

ความสามารถในการกำจัดอนุมูลอิสระของผลิตภัณฑ์น้ำผลไม้มารูลาได้รับการวิเคราะห์โดยการทดสอบ DPPH [Malterud K M, Farbort TL, Huse ACE, Bredo Sund R. สารต้านอนุมูลอิสระและผลการกำจัดอนุมูลของอาร์ทราควิโนนและแอนโทโรน เภสัชวิทยา. 2536:47:77-85]. DPPH (1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl) เป็นสารสร้างอนุมูลอิสระที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในการตรวจสอบความสามารถในการกำจัดอนุมูลอิสระ (ความสามารถของสารประกอบในการบริจาคอิเล็กตรอน) ของสารต้านอนุมูลอิสระต่างๆ อนุมูล DPPH มีสีม่วงเข้มเนื่องจากอิเลคตรอนบกพร่อง และการไล่อนุมูลสามารถติดตามได้ทางสเปกโตรโฟโตเมตริกโดยการสูญเสียการดูดกลืนแสงที่ 517 นาโนเมตร เนื่องจากมีการสร้างรูปแบบที่ไม่ใช่อนุมูลสีเหลืองอ่อน

ส่วนลงตัวของผลิตภัณฑ์น้ำผลไม้ Marula (1.0 μl) ผสมกับ DPPH/L 0.1 มิลลิโมลในเอทานอล 1 มล. และตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงของความหนาแน่นของแสงที่ 517 นาโนเมตรอย่างต่อเนื่อง ความสามารถของสารสกัดจากน้ำมารูลาในการขจัดอนุมูลอิสระเมื่อเปรียบเทียบกับความสามารถในการกำจัดอนุมูลอิสระของน้ำมารูลากรอง (มะเดื่อ 3A และ 3B).

ที่ความเข้มข้น 1.0 ไมโครลิตร/มล. น้ำมารูลาที่ผ่านการกรองทำให้ความหนาแน่นเชิงแสงลดลง 30% ที่ 517 นาโนเมตร ในขณะที่ผลิตภัณฑ์ที่ได้จากการรวมสารสกัด II และ III ที่อธิบายไว้ในที่นี้ (เช่น น้ำมารูลาอุดมด้วยโพลีฟีนอลในระดับสูง) ทำให้ความหนาแน่นของแสงลดลง 21% ที่ 517 นาโนเมตร ความสามารถในการกำจัดอนุมูลที่โดดเด่นที่สุดถูกแสดงโดยสารสกัด I ซึ่งเหนี่ยวนำให้ความหนาแน่นของแสงลดลง 54% ที่ 517 นาโนเมตร (รูปที่. 3A). ที่ความเข้มข้นสูงขึ้น (2.0 ไมโครลิตร/มล.) น้ำมารูลาที่ผ่านการกรองและหมุนเหวี่ยงทำให้ความหนาแน่นเชิงแสงลดลง 60% ที่ 517 นาโนเมตร ในทำนองเดียวกัน ผลิตภัณฑ์ที่ได้จากการรวมสารสกัดที่อธิบายไว้ในที่นี้ II และ III เหนี่ยวนำให้ความหนาแน่นเชิงแสงลดลง 43% ที่ 517 นาโนเมตร และความสามารถในการกำจัดอนุมูลที่โดดเด่นที่สุดได้รับการจัดแสดงอีกครั้งโดยสารสกัด I ซึ่งเหนี่ยวนำให้ลดลง 89% ในออปติคัล ความหนาแน่นที่ 517 นาโนเมตร (รูปที่. 3B).

LDL ถูกแยกได้จากพลาสมาจากอาสาสมัครที่มีภาวะไขมันในเลือดปกติที่มีสุขภาพดี โดยการหมุนเหวี่ยงพิเศษแบบเกรเดียนต์ความหนาแน่นแบบไม่ต่อเนื่อง [Aviram, M. (1983) การแยกไลโปโปรตีนในพลาสมาโดยการหมุนเหวี่ยงแบบเกรเดียนต์ความหนาแน่นสูงแบบไม่ต่อเนื่องในผู้ป่วยไขมันในเลือดสูง ชีวเคมี แพทย์ 30, 111-118]. LDL ถูกล้างที่ d=1.063 กรัม/มล., ไดอะไลซ์เทียบกับ NaCl 150 มิลลิโมล/ลิตร, 1 มิลลิโมล/ลิตร Na₂EDTA (pH 7.4) ที่ 4° C จากนั้น LDL ถูกฆ่าเชื้อโดยการกรอง (0.45 μM) เก็บไว้ภายใต้ไนโตรเจนในที่มืดที่ 4° C และใช้ภายใน 2 สัปดาห์ ความเข้มข้นของโปรตีน LDL ถูกกำหนดด้วยโฟลินฟีนอลรีเอเจนต์ ก่อนการเกิดออกซิเดชัน LDL ถูกไดอะไลซ์กับสารละลายน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (PBS) ที่ปราศจาก EDTA, pH 7.4 และที่ 4° C

LDL (โปรตีน 100 ไมโครกรัม/มล.) ถูกบ่มเป็นเวลาสิบนาทีที่อุณหภูมิห้องโดยเพิ่มความเข้มข้นของสารสกัดจากน้ำมารูลา จากนั้น CuSO 5 ไมโครโมล/ลิตร₄ ถูกเติมและหลอดถูกบ่มเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่ 37° C เมื่อสิ้นสุดการบ่ม ขอบเขตของการเกิดออกซิเดชันของ LDL ถูกกำหนดโดยการวัดปริมาณที่สร้างขึ้นของสารที่ทำปฏิกิริยากรดไทโอบาร์บิทูริก (TBARS) และของลิพิดเปอร์ออกไซด์ [Aviram M, Vaya J. เครื่องหมายสำหรับออกซิเดชันไลโปโปรตีนความหนาแน่นต่ำ วิธีการ เอนไซม์. 2544; 335:244-56; และ Buege J. A. , Aust S. D. Microsomal lipid peroxidation วิธีการ เอนไซม์. 52: 302-310 (2521)]. การทดสอบลิพิดเปอร์ออกไซด์ (PD) วิเคราะห์การก่อตัวของลิพิดเปอร์ออกไซด์ด้วยความสามารถในการเปลี่ยนไอโอไดด์เป็นไอโอดีนหลังจากการบ่มเป็นเวลา 18 ชั่วโมงที่ 25° C ตามที่วัดด้วยสเปกโตรโฟโตเมตริกที่ 365 นาโนเมตร [G. เจอร์เก้นส์. การทดสอบสเปกโตรโฟโตเมตริกสำหรับลิพิดเปอร์ออกไซด์ในไลโปโปรตีนในซีรั่มโดยใช้รีเอเจนต์ที่มีจำหน่ายทั่วไป J. ลิปิดเรส 30:627-630, 2529].

วัดการเกิดออกซิเดชันของ LDL เป็น TBARS (รูปที่. 4A) หรือในรูปของลิพิดเปอร์ออกไซด์ (รูปที่. 4B). การเพิ่มความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้นของสารสกัดน้ำมารูลายับยั้งการเกิดออกซิเดชัน LDL ของทองแดงที่เหนี่ยวนำด้วยไอออนในลักษณะที่ขึ้นกับปริมาณยา ไอซี₅₀ ค่า (การยับยั้งการเกิดออกซิเดชันของ LDL 50%) สำหรับน้ำมะรุมที่ผ่านการกรองและปั่นแยกคือ 0.80 ไมโครลิตร/มล. สำหรับ TBARS (รูปที่. 5A) และ 0.65 ไมโครลิตร/มล. สำหรับลิพิดเปอร์ออกไซด์ (รูปที่. 5B) รูปแบบ. ได้รับผลลัพธ์ที่ค่อนข้างต่ำกว่าสำหรับสารสกัด I (0.50 ไมโครลิตร/มล. สำหรับทั้ง TBARS และการก่อตัวของลิพิดเปอร์ออกไซด์) ในทางตรงกันข้าม ไอซี₅₀ ค่าสำหรับผลิตภัณฑ์ที่ได้จากการรวมสารสกัดที่อธิบายไว้ในที่นี้ II และ III มีค่าสูงสุด (1.35 และ 1.50 สำหรับ TBARS และสำหรับ lipid peroxides ตามลำดับ)

แมคโครฟาจ J-774A.1 ถูกบ่มล่วงหน้าด้วย 10 และ 30 ไมโครกรัม GAE เทียบเท่า/มล. ของผลิตภัณฑ์น้ำผลไม้มารูลา จากนั้นจึงวิเคราะห์เซลล์เพื่อหาสารก่อมะเร็งในหลอดเลือด ซึ่งได้รับการประเมินเป็นสถานะออกซิเดชันของแมคโครฟาจ และการสังเคราะห์คอเลสเตอรอล

สถานะออกซิเดชันของมาโครฟาจถูกกำหนดโดยการทดสอบโฟลว์ไซโตเมตริกด้วยไดคลอโรฟลูออเรสซิน-ไดอะซีเตต (DCFH-DA) DCFH-DA เป็นสีย้อมไม่มีขั้วที่กระจายเข้าสู่เซลล์ ในเซลล์จะถูกไฮโดรไลซ์เป็นอนุพันธ์ที่ไม่ใช่ฟลูออเรสเซนต์ 2′,7′-ไดคลอโรฟลูออเรสซิน (DCFH) ซึ่งมีขั้วและติดอยู่ภายในเซลล์ ภายใต้ความเครียดออกซิเดชัน DCFH จะถูกออกซิไดซ์เป็น DCF ซึ่งเป็นสารประกอบเรืองแสง J774 ก.1 (2×10⁶) มาโครฟาจถูกบ่มด้วย 2.5×10⁻⁵ mol/L DCFH-DA เป็นเวลา 30 นาทีที่ 37° C ปฏิกิริยาหยุดลงโดยการล้างด้วย PBS ที่ 4° C การเรืองแสงของเซลล์ถูกกำหนดด้วยเครื่องโฟลว์ไซโตเมทรี (FACS-SCAN, Becton Dickinson, San Jose, Calif., USA ). ทำการวัดที่ 510 ถึง 540 นาโนเมตรหลังจากกระตุ้นเซลล์ที่ 488 นาโนเมตรด้วยเลเซอร์อาร์กอนไอออน

การบ่มเชื้อ J-774 A.1 macrophages เป็นเวลา 18 ชั่วโมงที่ 37° C ด้วยสารสกัด I และน้ำมารูลากรอง ช่วยลดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันในเซลล์ที่วัดโดยการทดสอบ DCFH ได้ 6% และ 7% ตามลำดับ ผลิตภัณฑ์ที่ได้จากการรวมสารสกัดที่อธิบายไว้ในที่นี้ II และ III ไม่มีผลต่อสถานะความเครียดออกซิเดชันของมาโครฟาจ (รูปที่. 6).

LDL (1 มก./มล.) ถูกบ่มเป็นเวลา 18 ชั่วโมงที่ 37°ซ ด้วย CuSO ที่เตรียมขึ้นใหม่ 5 ไมโครโมล/ลิตร₄. ออกซิเดชันถูกยุติโดยการแช่เย็นที่ 4° C ขอบเขตของการเกิดออกซิเดชันของ LDL ถูกกำหนดโดยการทดสอบ TBARS

LDL และ Ox-LDL ถูกผันเข้ากับฟลูออโรไอโซไธโอไซยาเนต (FITC) สำหรับการศึกษาการดูดซึมของเซลล์ ไลโปโปรตีน (โปรตีน 2.5 มก./มล.) ถูกไดอะไลซ์ค้างคืนที่ 4° C เทียบกับการเปลี่ยนแปลงหลายอย่างของบัฟเฟอร์บอเรตที่มีบอเรต 0.1 โมลาร์, โซเดียมเตตระบอเรต 25 มิลลิโมลาร์, NaCl 75 มิลลิโมลาร์, pH 8.6 ก่อนการผันคำกริยา (1 ชั่วโมง) ค่า pH ของบัฟเฟอร์การฟอกเลือดจะเปลี่ยนเป็น 9.4 Fluorescein isothiocyanate (FITC; Sigma-Aldrich) ถูกละลายในไดเมทิลฟอร์มาไมด์ (Merck) และเติมหยดลงในสารละลายไลโปโปรตีนเพื่อให้ได้ความเข้มข้นสุดท้ายที่ 0.2 มก./มล. จากนั้นบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องโดยกวน ไลโปโปรตีนที่ควบกับ FITC ถูกแยกออกจาก FITC ที่ไม่ถูกประกบโดยโครมาโตกราฟีแบบแยกตามขนาดเหนือคอลัมน์ PD-10 (เทคโนโลยีชีวภาพ Amersham-Pharmacia) ที่ชะด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์ 10 มิลลิโมลาร์ pH 8.0 ไลโปโปรตีนที่ติดฉลาก FITC (2 มก./มล.) ถูกนำมาใช้ทันทีในการศึกษาการดูดซึม

J774 A.1 macrophages ถูกบ่มที่ 37° C เป็นเวลา 3 ชั่วโมงด้วย LDL ที่ควบกับ FITC หรือ Ox-LDL ที่ความเข้มข้นสุดท้ายที่ 25 ไมโครกรัมของโปรตีน/มล. การดูดซึมของไลโปโปรตีนถูกกำหนดโดยโฟลว์ไซโตเมตรี การวัดการเรืองแสงของเซลล์ที่กำหนดโดย FACS ทำได้ที่ 510 นาโนเมตรถึง 540 นาโนเมตรหลังจากกระตุ้นเซลล์ที่ 488 นาโนเมตรด้วยเลเซอร์ไอออนอาร์กอน การเรืองแสงของเซลล์ถูกวัดในรูปของค่าเฉลี่ยความเข้มของการเรืองแสง (MFI)

การบ่ม J-774 A.1 macrophages เป็นเวลา 18 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37° C ด้วยผลิตภัณฑ์จากน้ำ marula (10 μg/ml GAE) ไม่มีผลต่อการดูดซึม LDL โดย macrophages ที่ความเข้มข้นที่สูงขึ้นของ GAE 30 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร เฉพาะผลิตภัณฑ์ที่ประกอบรวมด้วยสารสกัด II และ III ที่อธิบายไว้ในที่นี้เท่านั้นที่ลดการดูดซึม LDL ของมาโครฟาจลง 9% (รูปที่. 7). การบ่ม J-774 A.1 macrophages เป็นเวลา 18 ชั่วโมงที่ 37° C ด้วยสารสกัด I ซึ่งเป็นผลิตภัณฑ์ที่ได้จากการรวมสารสกัด II และ III ที่อธิบายไว้ในที่นี้และน้ำมะรุมกรอง ที่ 10 μg/ml GAE หรือ 30 μg/ml GAE ลดการดูดซึมมาโครฟาจของ Ox-LDL ลง 12% และ 7% (สารสกัด I) 27% (น้ำมารูล่าที่มีปริมาณโพลีฟีนอลสูง) และ 8% และ 6% (น้ำมารูล่ากรอง) ตามลำดับ (รูปที่. 8).

J774 A.1 มาโครฟาจถูกบ่มด้วย [³โคเลสเตอรอลที่ติดฉลาก H] (2 μCi/mL) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 37° C ตามด้วยการล้างเซลล์ใน PBS เย็นจัด (×3) และบ่มต่อไปในกรณีที่ไม่มีหรือมีโปรตีน HDL 100 μg/ml เป็นเวลา 3 ครั้ง ชั่วโมงที่ 37° C เซลลูลาร์และสื่อ [³ฉลาก H] ถูกวัดปริมาณและการไหลของคอเลสเตอรอลที่มี HDL เป็นสื่อกลางคำนวณเป็นอัตราส่วนของ [³H]-ฉลากในสื่อ/([³H]-ฉลากในสื่อ+[³H]-ป้ายกำกับในเซลล์) การบ่ม J-774 A.1 macrophages เป็นเวลา 18 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37° C ด้วยน้ำมะรุมกรอง (10 μg/ml GAE) เพิ่มการไหลออกของคอเลสเตอรอลจาก macrophages ไปยัง HDL ถึง ˜10% อย่างไรก็ตาม ผลิตภัณฑ์น้ำผลไม้มารูลาอื่นๆ ทั้งหมดไม่ส่งผลต่อการไหลออกของคอเลสเตอรอลที่มี HDL เป็นสื่อกลางที่ความเข้มข้นใดๆ ที่ใช้ (รูปที่. 9).

J774 A.1 มาโครฟาจถูกบ่มด้วย [³H] อะซีเตต ตามด้วยการสกัดไขมันในเซลล์ด้วยเฮกเซน:ไอโซโพรพานอล (3:2, v/v) และการแยกด้วยโครมาโตกราฟีแบบชั้นบาง (TLC) บนแผ่นซิลิกาเจล มองเห็นจุดของโคเลสเตอรอลที่ไม่ผ่านการเอสเทอไรด์ด้วยไอไอโอดีน ขูดลงในขวดแก้วที่แวววาว และนับกัมมันตภาพรังสี การบ่ม J-774 A.1 macrophages เป็นเวลา 18 ชั่วโมงที่ 37° C ด้วยสารสกัด I ซึ่งเป็นผลิตภัณฑ์ที่ได้จากการรวมสารสกัด II และ III ที่อธิบายไว้ในที่นี้และน้ำมะรุมหลังจากการกรอง ทั้งหมดที่ความเข้มข้น 30 μg/ml GAE ลดลง การสังเคราะห์โคเลสเตอรอลในแมคโครฟาจ 18%, 7% และ 8% ตามลำดับ (รูปที่. 10).

หนู Wistar แรกเกิดได้รับมาจาก Harlan Laboratories เพาะเลี้ยงแอสโตรไซต์ของหนูปฐมภูมิที่เตรียมจากเยื่อหุ้มสมองของหนูแรกเกิดอายุ 1-2 วัน Wistar ขั้นตอนนี้ได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการการดูแลและการใช้สัตว์ของสถาบัน แอสโทรไซต์ถูกชุบในจาน 24 หลุมที่ 100,000 หรือ 80,000 เซลล์/0.5 มล./หลุม ตามลำดับ การทดลองทั้งหมดดำเนินการโดยมีซีรั่ม 2% (FCS) สื่อดั้งเดิมของเซลล์ถูกดูดออกและอาหารสดถูกเติมเข้าไปในเซลล์ การเจือจางของ H₂อ₂ และน้ำมารูล่าในอาหารเลี้ยงเชื้อนั้นทำขึ้นใหม่จากสารละลายสต็อกก่อนการทดลองแต่ละครั้งและถูกนำมาใช้ทันที การรักษาแต่ละครั้งดำเนินการใน tetraplicates ความเข้มข้นสุดท้ายของ H₂อ₂ คือ 200 μM

การทดสอบการเพาะเลี้ยงเซลล์ประสาท

การหาค่าความมีชีวิตของเซลล์—ความมีชีวิตของเซลล์ถูกกำหนดโดยใช้ชุดทดสอบสีเชิงพาณิชย์ (จัดทำโดย Roche) ตามการวัดกิจกรรมของ Lactate Dehydrogenase (LDH) ที่ปล่อยออกมาจากไซโตซอลของเซลล์ที่เสียหายไปยังส่วนเหนือตะกอน

ผลการป้องกันของสารสกัด—เพื่อกำหนดสภาวะที่เหมาะสม (ในแง่ของเวลาและปริมาณ) เพื่อให้น้ำผลไม้แสดงฤทธิ์ในการป้องกันสมมุติฐาน เซลล์ได้รับการปรับสภาพล่วงหน้าด้วยปริมาณที่แตกต่างกันของผลิตภัณฑ์น้ำผลไม้แต่ละชนิดสำหรับช่วงเวลาที่ต่างกัน และผลิตภัณฑ์ป้องกันผลต่อความเครียดจากอนุมูลอิสระ สร้างโดย H₂อ₂ ได้รับการประเมิน น้ำผลไม้ (ที่การเจือจาง 1:125, 1:500, 1:800 และ 1:4000) ถูกเติมร่วมกับ H₂อ₂ หรือบ่มล่วงหน้าเป็นเวลาสองชั่วโมงกับเซลล์ก่อนที่จะเติม ความเป็นพิษถูกตรวจสอบ 20 ชั่วโมงต่อมา รูปที่. 11 แสดงให้เห็นว่าที่ความเข้มข้นทั้งหมดที่ทดสอบและสำหรับผลิตภัณฑ์น้ำผลไม้ทั้งหมด การเติมน้ำผลไม้ร่วมกับ H₂อ₂ ไม่ได้ป้องกัน อย่างไรก็ตาม preincubation เป็นเวลา 2 ชั่วโมงกับเซลล์ก่อนหน้า H₂อ₂ นอกจากนี้มีผลในการป้องกันน้ำผลไม้ทั้งหมด ด้วยสารสกัด I แสดงให้เห็นถึงฤทธิ์ในการป้องกันที่มีประสิทธิภาพสูงสุดเมื่อใช้ที่ความเข้มข้นต่ำ (1:4000)

การทดลองกับสารสกัดมารูลาที่ความเข้มข้นต่ำ (การเจือจาง 1:1000-1:8000)—การทดลองต่อไปนี้ดำเนินการที่ความเข้มข้นต่ำของผลิตภัณฑ์ (การเจือจาง 1:1000-1:8000) ในปริมาณวิตามิน ˜55-450 ไมโครกรัม/100 มล. C เทียบเท่า

ทดสอบผลกระทบของระยะเวลาการบ่มล่วงหน้า (2 ชม. เทียบกับ 6 ชม.) ของเซลล์ด้วยผลิตภัณฑ์น้ำผลไม้และความเข้มข้นของผลิตภัณฑ์ (1:1000-1:8000) รูปที่. 12 แสดงให้เห็นว่าในขณะที่ 2 ชั่วโมงของการบ่มด้วยสารสกัด I ให้การป้องกันเพียง ˜20% ที่ความเข้มข้นที่ทดสอบทั้งหมด การบ่มล่วงหน้า 6 ชั่วโมงส่งผลให้มีการป้องกันมากกว่า 80%

ในการทดลองอื่น ผลของเวลาในการฟักตัวและความเข้มข้นถูกทดสอบด้วยการเจือจาง 2 ครั้ง (1:1000 หรือ 1:4000) ของน้ำผลไม้แต่ละชนิด น้ำมารูลากรองและสารสกัด I เป็นเวลา 2 หรือ 6 ชั่วโมงก่อนการเติม H₂อ₂ (รูปที่. 13). Extract I พบว่ามีประสิทธิภาพสูงสุด (การป้องกัน 70%) น้ำมารูล่าที่ผ่านการกรองยังแสดงกิจกรรมการป้องกันที่สำคัญ (การป้องกัน 40%)

4. พิธีสารทางคลินิก

อาสาสมัครสุขภาพดี 10 คน (ตารางที่ 1) ไม่สูบบุหรี่ และไม่มีความผิดปกติของการเผาผลาญ มีระดับคอเลสเตอรอลในพลาสมาต่ำกว่า 200 มก./ดล. และไม่ได้รับการรักษาด้วยยา ได้รับคัดเลือกเข้าร่วมการศึกษา ทุกวิชาลงนามในแบบฟอร์มยินยอมก่อนเข้าศึกษา โปรโตคอลการศึกษาได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการ Rambam Helsinki (หมายเลข 2452)

ผู้เข้าร่วมทั้งหมดดื่มน้ำผลไม้พาสเจอร์ไรส์ 200 มล. ต่อวันพร้อมอาหารมื้อหลัก เป็นระยะเวลา 3 สัปดาห์ ทุกวิชาที่เรียนก็ดำเนินไปตามวิถีชีวิตที่เป็นนิสัย ความดันโลหิตถูกวัดที่เวลาศูนย์ (ก่อนเข้ารับการศึกษา) หลังจาก 3 สัปดาห์ และเมื่อสิ้นสุดการศึกษา (หลังจาก 4 สัปดาห์ของการหยุดพัก) เก็บตัวอย่างเลือด (25 มล.) สำหรับการวิเคราะห์ที่เวลาศูนย์ (ค่าพื้นฐาน—ก่อนเข้าสู่การศึกษา) หลังจากดื่มน้ำผลไม้มารูล่า 3 สัปดาห์ และ 4 สัปดาห์หลังจากสิ้นสุดการบริโภคน้ำผลไม้ (ชะล้าง)

ตัวอย่างซีรั่มในเลือดทั้งหมดถูกแช่แข็งที่ −80° C จนกระทั่งวิเคราะห์ การวิเคราะห์ทางชีวเคมีในซีรั่มดำเนินการโดยใช้ชุดตรวจวินิจฉัยที่มีจำหน่ายทั่วไป และรวมการวัดระดับน้ำตาล แคลเซียม การทำงานของไต (BUN ครีเอตินิน และอิเล็กโทรไลต์เนเทรียมและคาเลียม) การทำงานของตับ (CK, AST และโทบิลิรูบินทั้งหมด) โคเลสเตอรอลทั้งหมด HDL — คอเลสเตอรอล, คอเลสเตอรอล LDL และไตรกลีเซอไรด์ทั้งหมด วัดระดับกรดยูริก (เป็นสารต้านอนุมูลอิสระที่เป็นไปได้) ในซีรั่มโดยใช้ชุดเครื่องมือที่มีจำหน่ายทั่วไป

การวิเคราะห์ความเครียดออกซิเดทีฟของตัวอย่างซีรั่ม

Ferric-Reducing Antioxidant Power (FRAP): รีเอเจนต์การทำงาน FRAP เตรียมโดยการผสม acetate buffer 25 มล. สารละลาย 2,4,6-Tripyridyl-s-Triazine (TPTZ) 2.5 มล. และ FeCL 2.5 มล.₃*6H₂O วิธีการแก้ปัญหา สารละลายที่เป็นน้ำขนาด 1 mM FeSO₄*7H₂O ที่ความเข้มข้น 5, 10, 20, 30, 40, 50 และ 100 mM ถูกนำมาใช้สำหรับเส้นโค้งการสอบเทียบมาตรฐาน รีเอเจนต์ FRAP (เตรียมใหม่) ถูกทำให้ร้อนถึง 37° C และอ่านค่าเปล่าของรีเอเจนต์ที่ 593 นาโนเมตร สเปกโตรโฟโตเมตริก ตัวอย่างเซรั่ม (30 ไมโครลิตร) ผสมกับน้ำ 90 ไมโครลิตร จากนั้น 900 ไมโครลิตรของรีเอเจนต์ FRAP ถูกเติมและผสมอย่างรวดเร็ว ค่าการดูดซับถูกอ่านหลังจาก 0.5 วินาทีและทุกๆ 15 วินาทีในช่วง 4 นาที การเปลี่ยนแปลงการดูดกลืนแสง (ก_{593 นาโนเมตร}) ระหว่างความหนาแน่นเชิงแสงขั้นสุดท้ายและขั้นเริ่มต้นถูกคำนวณสำหรับแต่ละตัวอย่าง และจากนั้นจึงเกี่ยวข้องกับ Fe⁺² ความเข้มข้นในเส้นโค้งมาตรฐาน (ทดสอบแบบขนาน)

Serum Lipid Peroxidation

เซรั่มถูกเจือจาง 1:4 (v:v) ด้วยน้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (PBS) แล้วบ่มในที่ที่ไม่มีหรือมีอยู่ 100 มิลลิโมล/ลิตรของเครื่องกำเนิดอนุมูลอิสระ 2,2′-azobis-2-amidinopropane ไฮโดรคลอไรด์ (AAPH) เป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37° C การหา lipid peroxidation ในซีรั่มถูกกำหนดโดยการวัดปริมาณที่สร้างขึ้นของสารที่ทำปฏิกิริยากรดไทโอบาร์บิทูริก (TBARS) และของ lipid peroxides โดยใช้วิธีสเปกโตรโฟโตเมตริก การทดสอบลิพิดเปอร์ออกไซด์ (PD) จะวิเคราะห์การก่อตัวของลิพิดเปอร์ออกไซด์ด้วยความสามารถในการเปลี่ยนไอโอไดด์เป็นไอโอดีนหลังจากการบ่มเป็นเวลา 18 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 25° C โดยวัดด้วยสเปกโตรโฟโตเมตริกที่ 365 นาโนเมตร

จากผลการศึกษาระบุว่า การบริโภคไม่มีผลอย่างมีนัยสำคัญต่อความดันโลหิต ระดับกลูโคสและแคลเซียมในซีรั่มไม่มีการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญหลังการบริโภค และการทดสอบการทำงานของไตไม่ได้รับผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญจากการบริโภคอย่างต่อเนื่อง ในทำนองเดียวกัน การบริโภคส่งผลให้ระดับอิเล็กโทรไลต์ในเลือดและการทำงานของตับไม่เปลี่ยนแปลงอย่างมาก อย่างไรก็ตาม ระดับไตรกลีเซอไรด์ในซีรั่มลดลง 7% หลังการบริโภค โดยผลจะคงอยู่หลังจากระยะเวลาการชะล้าง 4 สัปดาห์ (ตารางที่ 2)

การบริโภคเป็นระยะเวลา 3 สัปดาห์อย่างมีนัยสำคัญ (p<0.02) ลดความเข้มข้นของคอเลสเตอรอลรวมในซีรั่มลง 8% (ตารางที่ 3)

การลดลงนี้อาจเกี่ยวข้องกับการลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (p<0.01) ในระดับ LDL-คอเลสเตอรอล 17% อย่างไรก็ตาม การลดลงเหล่านี้ไม่คงอยู่หลังจากช่วงการชะล้าง เนื่องจากระดับของคอเลสเตอรอลรวม รวมทั้งของคอเลสเตอรอลชนิด LDL กลับสู่ระดับพื้นฐานหลังจากช่วงการชะล้างเป็นเวลา 4 สัปดาห์ ซึ่งในระหว่างนั้นผู้ทดลองไม่ได้กินน้ำผลไม้ ระดับ HDL-โคเลสเตอรอลในเลือดเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (p<0.03) 10% หลังจากการบริโภคน้ำผลไม้และการลดลงนี้ยังคงอยู่แม้ว่าจะอยู่ในระดับที่ต่ำกว่า (เพียง 7%) หลังจากช่วงชะล้าง

ตารางที่ 4 แสดงผลต่อความเครียดออกซิเดชันในซีรั่ม ตัวอย่างซีรั่มถูกออกซิเดชั่นที่เกิดจาก AAPH การสร้างลิพิดเปอร์ออกไซด์ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (p<0.03) ในตัวอย่างซีรั่มที่ได้รับหลังการบริโภคเป็นเวลา 3 สัปดาห์ อย่างไรก็ตาม ผลกระทบนี้ไม่คงอยู่หลังจากช่วงเวลาการชะล้าง ในตัวอย่างซีรั่มที่ได้รับหลังการบริโภค “พลังในการต้านอนุมูลอิสระ” ที่วัดโดยการทดสอบ FRAP นั้นเพิ่มขึ้นในช่วงระยะเวลาการบริโภค และยิ่งเพิ่มขึ้นไปอีก จนสูงถึง 8% หลังช่วงการชะล้าง การลดลงของความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันในซีรั่มอาจเป็นผลมาจากการลดลงของความเข้มข้นของลิพิดในซีรั่ม (สารตั้งต้นที่มีอยู่สำหรับออกซิเดชันน้อยลง เช่นเดียวกับผลของสารต้านอนุมูลอิสระที่มีศักยภาพของน้ำมารูล่า)

ผลของการบริโภคน้ำผลไม้พาสเจอร์ไรส์ต่อความเครียดออกซิเดชันในซีรั่มสรุปได้ใน มะเดื่อ 14A-B. ตัวอย่างซีรั่มถูกออกซิเดชั่นที่เกิดจาก AAPH การเกิดลิพิดเปอร์ออกไซด์ (รูปที่. 14ก) ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (p<0.03) ในตัวอย่างซีรัมที่ได้มาหลังจากการบริโภคน้ำผลไม้ในช่วง 3 สัปดาห์ ผลกระทบนี้ไม่คงอยู่หลังจากช่วงเวลาการชะล้าง ความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระ วัดโดยการทดสอบ FRAP (รูปที่. 14B) เพิ่มขึ้นในตัวอย่างซีรั่มที่ได้มาหลังจากการบริโภคน้ำมารูลาพาสเจอร์ไรส์ และเพิ่มขึ้นอย่างน่าประหลาดใจ เพิ่มขึ้นถึง 8% อย่างมีนัยสำคัญหลังจากช่วงชะล้าง