สารสกัดจาก Sclerocarya birrea (US8445040B2)

นี่คือใบสมัครระดับชาติที่ยื่นภายใต้ 35 U.S.C. §371 เป็นเวทีระดับชาติของ PCT/IL2009/000192 ซึ่งยื่นเมื่อวันที่ 19 กุมภาพันธ์ 2009 โดยอ้างสิทธิ์ในผลประโยชน์ภายใต้ 35 U.S.C. §119(e) ของคำขอชั่วคราวของสหรัฐฯ เลขที่ 61/064,125 ซึ่งยื่นเมื่อวันที่ 19 กุมภาพันธ์ 2008 เนื้อหาของแต่ละรายการถูกรวมไว้ในที่นี้โดยการอ้างอิงอย่างครบถ้วน
ยื่นสิ่งประดิษฐ์
การประดิษฐ์นี้โดยทั่วไปเกี่ยวข้องกับสารสกัดที่ละลายน้ำได้จาก Sclerocarya เบอร์เรีย ผลไม้และการใช้ประโยชน์
ความเป็นมาของการประดิษฐ์
มารูล่า (Sclerocarya birrea, วงศ์: Anacardiaceae) เป็นไม้ต้นผลัดใบขนาดกลางถึงขนาดใหญ่ ลำต้นตั้งตรง มงกุฎกลม พืชนี้ใช้เป็นแหล่งอาหารในปัจจุบันเช่นเดียวกับที่ใช้ในสมัยโบราณ ผลของมารูลานั้นรับประทานได้ โดยทั่วไปจะรับประทานแบบดิบหรือนำไปแปรรูปเป็นผลิตภัณฑ์อาหารต่างๆ เช่น เยลลี่ และยังนำไปต้มเป็นเบียร์ที่มีแอลกอฮอล์ ซึ่งชาว Vhavenda รู้จักกันในชื่อ Mukumbi
การใช้และการใช้มารูลาในทางการแพทย์รวมถึงการใช้เปลือกและใบในการรักษาโรคที่เกี่ยวข้องกับแบคทีเรียและโรคเบาหวาน [1,2] และอาการท้องร่วงตามที่เปิดเผยในสิ่งพิมพ์สิทธิบัตรของออสเตรเลียเลขที่ 2000/29790 [3].
สิ่งพิมพ์ต่างประเทศ เลขที่ WO 03/092634 [4] เปิดเผยการใช้น้ำมันมารูลาในการเตรียมเฉพาะที่เพื่อยับยั้งการก่อตัวของเนื้อเยื่อแผลเป็นบนผิวหนัง
ผล Marula แสดงให้เห็นว่ามีความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดเพิ่มขึ้น [5] มีความสามารถในการยับยั้งการเกิดฟอสโฟลิปิดเปอร์ออกซิเดชั่น และมีฤทธิ์ในการขับอนุมูลซุปเปอร์ออกไซด์แอนไอออน [6] สิ่งพิมพ์ต่างประเทศ เลขที่ WO 06/097806 [7] เปิดเผยว่าส่วนต่าง ๆ ของพืชมารูลา เช่น เปลือก ใบ ผล ราก และเมล็ดมีสารต้านอนุมูลอิสระที่ไม่ชอบน้ำ ซึ่งอาจได้รับจากพืชโดยวิธีการทำให้เป็นสีและ/หรือการสกัด
สิ่งพิมพ์
  • [1] Ojewole J. A et al., ไฟโตเทอร์เรส 2004, 18(8):601-8.
  • [2] Eloff J.N และคณะ เจ เอ็ทโนฟาร์มาคอล. 2001, 76(3):305-8.
  • [3] สิ่งพิมพ์สิทธิบัตรของออสเตรเลีย เลขที่ 2000/29790.
  • [4] สิ่งพิมพ์ต่างประเทศฉบับที่ ว03/092634.
  • [5] Mdluli, K. M และ Owusu-Apenten, R. , วารสารชีวเคมีอาหาร. 2003, 27: 67-82.
  • [6] ตัวอย่าง E. R et al. การวิจัยทางวิทยาศาสตร์และเรียงความ 2006, 1(30):087-092.
  • [7] สิ่งพิมพ์ต่างประเทศฉบับที่ วอ06/097806.
สรุปสาระสำคัญของการประดิษฐ์
แม้ว่าผลมารูลาจะได้รับรายงานว่าอุดมไปด้วยสารต้านอนุมูลอิสระ แต่จนถึงขณะนี้ยังไม่มีรายงานการเตรียมและการใช้สารสกัดจากผลมารูลาในการรักษาโรคและความผิดปกติต่างๆ เช่น โรคหลอดเลือดแดงแข็งและโรคเกี่ยวกับความเสื่อมของระบบประสาท
ผลลัพธ์ที่น่าประหลาดใจที่เปิดเผยในที่นี้ บ่งชี้ว่าสารสกัดที่เตรียมจากน้ำมารูลาไม่เพียงแต่คงตัวเป็นเวลานานเท่านั้น แต่ที่สำคัญกว่านั้นยังมีประโยชน์ในการรักษาที่แตกต่างกัน และในบางกรณีดีกว่าที่แสดงให้เห็นโดยน้ำมารูลาที่ไม่ผ่านการบำบัด สารสกัดของการประดิษฐ์ได้พิสูจน์ให้เห็นแล้วว่าส่งผลดีต่อไขมันในเลือด ดังที่แสดงโดยการลดลงของ LDL ในซีรั่ม โดยการเพิ่มขึ้นของ HDL ในซีรั่ม และโดยการลดทอนของความเครียดออกซิเดชันในซีรั่ม; สารสกัดได้แสดงให้เห็นถึงประสิทธิภาพในการรักษาความเสียหายจากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน, หลอดเลือด, การเสื่อมของระบบประสาทและความผิดปกติที่เกี่ยวข้อง
สารสกัดจากน้ำมารูล่าของการประดิษฐ์นี้ยังมีประสิทธิผลในการป้องกันการเสื่อมของระบบประสาท ดังที่เห็นได้จากอิทธิพลของการป้องกันต่อเซลล์ประสาทที่ได้รับความเสียหายจากอนุมูลอิสระ
การประดิษฐ์นี้ยังเปิดเผยการใช้สารสกัดจากน้ำมารูลาเป็นสารต้านอนุมูลอิสระสำหรับการใช้งานที่หลากหลาย เช่น ใช้ในผลิตภัณฑ์เสริมอาหารเพื่อให้เกิดผล เช่น ฤทธิ์ต้านไขมันในหลอดเลือดในอาสาสมัครที่มีสุขภาพดีและไม่ดีต่อสุขภาพ (มนุษย์และคนที่ไม่- สัตว์มนุษย์) และเป็นตัวแทนสำหรับการรักษาหรือป้องกันโรคที่เกี่ยวข้องกับการเสื่อมของระบบประสาท
ดังนั้น ในลักษณะหนึ่งของการประดิษฐ์นี้ มีการจัดให้มีสารสกัดที่ได้มาจากผลมารูลา ไม่รวมเมล็ด สารสกัดดังกล่าวได้รับโดยกระบวนการซึ่งประกอบรวมด้วยการนำน้ำที่เก็บจากผลมารูลาไปสกัดด้วยน้ำหนึ่งชนิดหรือมากกว่า สารละลาย ตัวทำละลายอินทรีย์และของผสมของสิ่งนั้น กล่าวคือ เพื่อให้ได้สารสกัดที่มีประโยชน์ทางชีวภาพตามที่ต้องการจากน้ำมารูลา
น้ำมารูลาที่ได้จากผลมารูลาอาจถูกกรองก่อนการสกัดเพื่อขจัดเศษผลไม้ เช่น เศษเมล็ดพืชและสิ่งที่ไม่ละลายน้ำอื่นๆ การกรองอาจดำเนินการโดยใช้วิธีการใดๆ ที่เป็นที่รู้จักในศิลปวิทยาการแขนงนี้สำหรับการกรองเครื่องดื่ม เช่น แต่ไม่จำกัดต่อ การกรองด้วยดินเบา (DE) และการกรองด้วยเมมเบรน
ในบางรูปลักษณ์ น้ำมารูลาที่ได้จากผลมารูลาจะถูกพาสเจอร์ไรซ์ก่อนการสกัดเพื่อชะลอการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์โดยการลดจำนวนของเชื้อโรคที่มีชีวิตในนั้น โดยปกติแล้ว การพาสเจอไรซ์จะดำเนินการโดยการให้น้ำผลไม้มีอุณหภูมิต่ำกว่าจุดเดือด ในบางรูปลักษณ์ การพาสเจอไรซ์ทำได้โดยวิธีอื่นหนึ่งวิธีหรือมากกว่าที่รู้จักในศิลปวิทยาการแขนงนี้ เช่น ควบคุมโดยหน่วยงานความปลอดภัยด้านอาหารแห่งชาติ (เช่น USDA ในสหรัฐอเมริกาและสำนักงานมาตรฐานอาหารในสหราชอาณาจักร) ตัวอย่างที่ไม่จำกัดบางตัวอย่าง ได้แก่ การพาสเจอร์ไรซ์ที่อุณหภูมิสูง/ใช้เวลาสั้น (HTST) การพาสเจอร์ไรซ์ที่ยืดอายุการเก็บรักษา (ESL) การพาสเจอร์ไรซ์ที่อุณหภูมิสูงพิเศษ (UHT หรือความร้อนสูงพิเศษ) และการพาสเจอร์ไรซ์แบบแบตช์หรือถัง
คำว่า 'สารสกัด' ที่ใช้ในคำขอนี้หมายถึงผลิตภัณฑ์ที่ละลายน้ำได้ซึ่งได้รับจากส่วนใดส่วนหนึ่งของผลมารูลาหรือส่วนใดๆ ที่ได้มาจากส่วนนั้น โดยไม่รวมเมล็ด แต่รวมถึงมีโซคาร์ป เอนโดคาร์ป เปลือก (ผิวชั้นนอกหนา) หนึ่งส่วนหรือมากกว่า และ/หรือผิวหนัง (exocarp) โดยใช้วิธีที่เลือกจากการแสดงออก การดูดซึม การทำให้แห้ง การทำแห้งเยือกแข็ง การกลั่น และการรวมกันของสองกระบวนการเหล่านี้หรือมากกว่า
สารที่สกัดแยกจากกันหรือรวมกันอาจถูกสร้างเป็นสูตรผสมที่ต้องการซึ่งรวมถึงสารละลายที่เป็นน้ำ ของแข็ง เช่น ผงแห้ง เม็ดหรือเม็ด สารเข้มข้น เช่น กึ่งของเหลวที่มีความคงตัวของน้ำเชื่อมซึ่งอาจ ได้จากการระเหยของเหลวทั้งหมดหรือเกือบทั้งหมดของสารสกัดหรือรูปแบบอื่น ๆ โดยทั่วไป วิธีการสกัดวัสดุอาจแตกต่างกันไป โดยอนุโลม ขึ้นอยู่กับอายุของผลมารูลา, ชนิดย่อย, ฤดูกาลเก็บเกี่ยว, บริเวณการเจริญเติบโต, สารที่จะสกัด, ความคงตัวของสารเหล่านั้น และปัจจัยอื่น ๆ ซึ่งเป็นที่รู้จักของบุคคลที่เชี่ยวชาญในศิลปวิทยาการแขนงนี้
ในบางรูปลักษณ์ สารสกัดของการประดิษฐ์ได้มาจากการสัมผัสน้ำมารูล่ากับสารละลายที่มีน้ำเพื่อสกัดสารดังกล่าวจากส่วนผสมหนึ่งอย่างหรือมากกว่าหรือการรวมกันของพวกมัน 'สารละลายที่มีน้ำ' อาจอยู่ในเงื่อนไขทั่วไปส่วนใหญ่น้ำ (ในบางรูปลักษณ์น้ำที่มีความเข้มข้นของแร่ธาตุตามธรรมชาติที่แตกต่างกัน) หรือน้ำกลั่นหรือบริสุทธิ์อย่างอื่น (กลั่นหรือทำให้บริสุทธิ์ในวิธีการอื่นใด) สารละลายเกลือที่มีน้ำประกอบรวมด้วยเกลือหนึ่งชนิดหรือมากกว่าหรือ a ของผสมของน้ำกับตัวทำละลายมีขั้วที่ผสมน้ำได้หนึ่งชนิดหรือมากกว่า เช่น C1-ค4 แอลกอฮอล์และคีโตน
ในบางรูปลักษณ์ ตัวทำละลายที่มีน้ำเป็นของผสมของน้ำและแอลกอฮอล์อย่างน้อยหนึ่งชนิด ในบางรูปลักษณ์เพิ่มเติม ตัวทำละลายที่มีน้ำเป็นส่วนผสมของน้ำและเอทานอล ที่ซึ่งอัตราส่วนน้ำ:เอทานอลเป็นหนึ่งใน 1:1, 1:2 . . 1:5 . . . 1:10 . . . 1:100 . . . 1:1,000 . . . ฯลฯ ตามลำดับ หรือ 2:1, 3:1 . . 5:1 . . . 10:1 . . . 100:1 . . . 1,000:1 เป็นต้น ตามลำดับ อัตราส่วนระหว่างกลางอื่นๆ รวมอยู่ด้วย
การสกัดอย่างเป็นทางเลือกอาจใช้ตัวทำละลายอินทรีย์เพียงอย่างเดียวหรือใช้ร่วมกับตัวทำละลายดังกล่าวตัวอื่น ในบางรูปลักษณ์ กระบวนการสกัดเป็นกระบวนการหลายขั้นตอนโดยที่ผลไม้มารูลา (น้ำผลไม้) ถูกสัมผัสก่อนด้วยตัวทำละลายหนึ่งตัวและจากนั้นด้วยตัวทำละลายที่แตกต่างกัน เพื่อเพิ่มผลผลิตสูงสุดหรือเพิ่มคุณค่าสารสกัดด้วยส่วนประกอบที่ต้องการหนึ่งอย่างหรือมากกว่า
โดยทั่วไป ตัวทำละลายอินทรีย์คือแอลกอฮอล์อย่างน้อยหนึ่งชนิด เช่น เมทานอล เอทานอลและไอโซโพรพิลแอลกอฮอล์ หรือคีโตน เช่น อะซีโตน เมื่อใช้เอทานอล อาจใช้เป็นสารละลายเอทานอลที่เป็นน้ำ เช่น เอทานอลระหว่าง 40 ถึง 60% สารละลายที่คล้ายกันอาจใช้กับตัวทำละลายอินทรีย์ที่ผสมน้ำได้อื่นๆ สารสกัดที่ได้จากการสกัดด้วยแอลกอฮอล์ต่อไปนี้เป็นสารสกัด I
ควรทำความเข้าใจในบริบทของการประดิษฐ์นี้ว่าการสกัดด้วยเอทานอลหรือการสกัดอื่นใดที่เปิดเผยในที่นี้ อาจดำเนินการที่อุณหภูมิใดก็ได้ที่สะดวก ผู้ที่มีทักษะในศิลปวิทยาการนี้จะเห็นได้ชัดว่าการสกัดที่มีประสิทธิภาพมากขึ้นจะเกิดขึ้นหากน้ำผลไม้ถูกกวน เช่น การกวนหรือเขย่า และ/หรือหากส่วนผสมได้รับความร้อนจนถึงอุณหภูมิที่สูงกว่าอุณหภูมิห้อง (สูงกว่า 25-27°C .). อาจใช้อุณหภูมิในการสกัดที่ต่ำกว่า เช่น อุณหภูมิห้องที่ต่ำกว่า ในบางรูปลักษณ์ กระบวนการสกัดถูกดำเนินการที่อุณหภูมิห้องหรือที่อุณหภูมิระหว่าง 25 ถึง 30°ซ
นอกจากนี้ยังควรเข้าใจในบริบทของการประดิษฐ์นี้ว่าการสกัดสามารถทำได้ตามระยะเวลาที่สะดวก
บุคคลที่มีความชำนาญในศิลปวิทยาการแขนงนี้จะต้องตระหนักเพิ่มเติมว่ากระบวนการเพื่อให้ได้มาซึ่งสารสกัดของการประดิษฐ์อาจเกี่ยวข้องกับการบดผลไม้มารูลาเพื่อให้ได้ชิ้นส่วนที่เล็กกว่าของผลไม้ทั้งหมด ซึ่งสารสกัดอาจได้รับโดยวิธีการสกัดแบบอื่นหนึ่งวิธีหรือมากกว่า เช่น การกลั่น อีกทางหนึ่ง สารสกัดอาจได้จากการแสดงออก กล่าวคือ โดยการบีบน้ำออกจากผลไม้
ดังนั้น ในบางรูปลักษณ์ ก่อนที่จะสัมผัสน้ำผลไม้กับตัวทำละลายหนึ่งชนิดหรือมากกว่าตามที่เปิดเผยไว้ ผลไม้ เช่น ผลไม้ทั้งผล โดยไม่รวมเมล็ดหรือส่วนใดๆ ของผลไม้ อาจถูกบำบัดล่วงหน้าโดยการทำให้เป็นสี การแสดงออก หรือกระบวนการอื่นใด
น้ำที่ได้จากผลมารูลาอาจถูกเก็บไว้ก่อนการสกัดหรือการปรับสภาพ เช่น การทำให้แห้งเป็นระยะเวลานาน การเก็บรักษาอาจอยู่ที่อุณหภูมิและสภาวะใดก็ได้ ซึ่งอยู่ภายใต้การรักษาความสดของน้ำผลไม้และการป้องกันหรือลดการย่อยสลาย อุณหภูมิดังกล่าวอาจสูงหรือต่ำกว่าอุณหภูมิห้อง ในบางรูปลักษณ์ น้ำผลไม้อาจถูกเก็บไว้ในตู้เย็นเป็นเวลาหลายสัปดาห์หรือในช่องแช่แข็งเป็นเวลาหลายปี ในกรณีที่ใช้น้ำผลไม้แช่แข็ง กระบวนการอาจประกอบด้วยขั้นตอนการละลายน้ำแข็งก่อนการสกัดหรือแปรรูป
การทำให้น้ำผลไม้แห้งอาจทำได้โดยการให้ความร้อนแก่น้ำผลไม้ที่เป็นของเหลวภายใต้สุญญากาศหรือภายใต้ความดันบรรยากาศ ที่อุณหภูมิที่ตั้งไว้ล่วงหน้าซึ่งอาจเป็นอุณหภูมิห้องหรือสูงกว่าสภาพแวดล้อม ในหนึ่งชุดหรือในปริมาณที่น้อยกว่าเพื่อควบคุมปริมาณความชื้นของน้ำผลไม้ สารสกัด ในตัวอย่างแบบไม่จำกัดที่เปิดเผยไว้ในที่นี้ การทำให้แห้งทำได้โดยการเทน้ำผลไม้ลงบนพื้นผิว เช่น ถาด ในบางกรณีจะคลุมด้วยกระดาษฟอยล์ (เช่น อลูมิเนียมฟอยล์) เพื่อให้น้ำผลไม้มีความร้อนเท่ากันและได้ชั้นที่สม่ำเสมอกันอย่างมาก ของสารสกัดมารูล่าแห้ง
สารเข้มข้นเปียก (น้ำเชื่อม) ที่ได้จากการอบแห้งจะมีสีเหลืองถึงน้ำตาลเข้ม ขึ้นอยู่กับความเข้มข้นและชนิดของสารสกัด วัสดุที่แห้งจะถูกบดเป็นผงและมีสีทองสว่างถึงสีน้ำตาลเข้มขึ้นอยู่กับชนิดของสารสกัด ของแห้งจะละลายน้ำได้
สารสกัดมารูลาซึ่งได้รับหลังจากนั้นประกอบด้วยสารระเหยในปริมาณต่างๆ กัน โดยปริมาณจะขึ้นอยู่กับระยะเวลาของระยะเวลาการทำให้แห้งและอุณหภูมิที่ใช้ โดยไม่ต้องการผูกมัดตามทฤษฎี เมื่อกำจัดส่วนประกอบที่ระเหยได้ออกแล้ว สารสกัดเข้มข้น ซึ่งได้แก่ ในบางรูปลักษณ์ สารสกัดแบบผง มีส่วนประกอบออกฤทธิ์ที่มีความเข้มข้นสูงกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับน้ำผลไม้ทั้งหมด ซึ่งการมีอยู่และการรวมกันให้ฤทธิ์สูงซึ่ง ไม่พบในผลไม้ทั้งหมดและซึ่งแสดงให้เห็นในที่นี้
ดังนั้น, สารสกัดได้มาโดยกระบวนการซึ่งประกอบรวมด้วยการสัมผัสน้ำมารูลากับตัวทำละลายที่เป็นน้ำตามที่กำหนดเพื่อให้ได้สารแขวนลอยซึ่งสารสกัดที่เป็นของเหลวอาจถูกแยกออกจากกัน
ในบางรูปลักษณ์ กระบวนการซึ่งประกอบรวมด้วย:
  • (i) การเก็บน้ำจากผลมารูลา
  • (ii) การสัมผัสน้ำผลไม้ดังกล่าวกับสารละลายที่มีน้ำหนึ่งหรือมากกว่า ตัวทำละลายอินทรีย์ที่มีขั้วผสมน้ำได้ และของผสมเพื่อให้ได้สารแขวนลอย และ
  • (iii) แยกสารแขวนลอยที่เป็นของเหลวออกจากสารแขวนลอยดังกล่าว
ในบางรูปลักษณ์ น้ำผลไม้ที่เก็บรวบรวมจะถูกทำให้แห้งหรือผ่านการบำบัดตามที่เปิดเผยก่อนการสกัด
ในรูปลักษณ์เพิ่มเติม การแยกสิ่งสกัดที่เป็นของเหลวตามขั้นตอน (iii) อาจโดยวิธีการหมุนเหวี่ยงสารแขวนลอยที่ได้รับในขั้นตอน (ii) เพื่อแยกสิ่งสกัดที่เป็นของเหลวออกจากมวลของแข็ง
ในบางรูปลักษณ์เพิ่มเติม กระบวนการประกอบรวมด้วย:
  • (i) การเก็บน้ำจากผลมารูลา
  • (ii) ทำให้น้ำผลไม้แห้งเป็นของแข็งหรือกึ่งของแข็ง;
  • (ii) การสัมผัสน้ำผลไม้แห้งหรือกึ่งแห้งที่ได้รับในขั้นตอน (ii) กับสารละลายที่มีน้ำหนึ่งหรือมากกว่า ตัวทำละลายอินทรีย์ และของผสมเพื่อให้ได้สารแขวนลอย และ
  • (iii) เลือกปั่นแยกสารแขวนลอยเพื่อแยกสารสกัดของเหลวออกจากมวลของแข็ง
ในรูปลักษณ์เพิ่มเติม กระบวนการซึ่งประกอบรวมด้วย:
  • (i) การให้น้ำจากผลมารูลา น้ำผลไม้ดังกล่าวอยู่ในรูปที่เลือกจากน้ำสดทั้งหมด น้ำผลไม้ที่เก็บทั้งผล น้ำผลไม้พาสเจอร์ไรส์ น้ำผลไม้แห้ง และน้ำผลไม้กึ่งแห้ง
  • (ii) การสัมผัสน้ำกับสารละลายที่เป็นน้ำ ตัวทำละลายอินทรีย์ และของผสมของสารละลายหนึ่งชนิดหรือมากกว่าเพื่อให้ได้สารแขวนลอย และ
  • (iii) เลือกปั่นแยกสารแขวนลอยเพื่อแยกสารสกัดของเหลวออกจากมวลของแข็ง
ในบางรูปลักษณ์ กระบวนการซึ่งประกอบรวมด้วย:
  • (i) การให้น้ำจากผลมารูลา น้ำผลไม้ดังกล่าวอยู่ในรูปที่เลือกจากน้ำสดทั้งหมด น้ำผลไม้ที่เก็บทั้งผล น้ำผลไม้พาสเจอร์ไรส์ น้ำผลไม้แห้ง และน้ำผลไม้กึ่งแห้ง
  • (ii) การสัมผัสน้ำกับสารละลายที่เป็นน้ำ ตัวทำละลายอินทรีย์ และของผสมของสารละลายหนึ่งชนิดหรือมากกว่าเพื่อให้ได้สารแขวนลอย และ
  • (iii) แยกสารสกัดที่เป็นของเหลวออกจากมวลของแข็ง
ควรสังเกตว่าการแยกสารสกัดของเหลวอาจทำซ้ำได้มากกว่าหนึ่งครั้ง โดยใช้ตัวทำละลายชนิดเดียวกันหรือต่างกันในปริมาณที่สอง และส่วนลอยเหนือตะกอนที่ได้จากแต่ละขั้นตอนอาจนำมารวมกันและบำบัดเพิ่มเติมเพื่อแยก ทำให้เข้มข้น หรือดำเนินการต่อไป สารสกัด. ดังนั้น สารลอยเหนือตะกอนสองชนิดหรือมากกว่าอาจถูกรวมเข้าด้วยกันและตัวทำละลายและ/หรือน้ำบางส่วนอาจถูกกำจัดออก ตัวอย่างเช่น โดยใช้วิธีใดวิธีหนึ่งในการกำจัดตัวทำละลาย
เมื่อวัตถุตั้งต้นประกอบด้วยวัตถุที่เป็นของแข็ง หรือในกรณีที่ผลมารูล่าถูกแปรรูปเป็นผงแห้งหรือกึ่งแห้งหรือเป็นเม็ด สารสกัดอาจถูกแยกอย่างน้อยออกเป็นเฟสของแข็งและเฟสน้ำ โดยแต่ละเฟสมี ฤทธิ์ทางชีวภาพตามที่เปิดเผยไว้นี้
สารสกัดจากการประดิษฐ์ที่ได้มาจากการใช้หนึ่งกระบวนการหรือมากกว่าตามที่เปิดเผยไว้ในที่นี้ อาจแสดงคุณลักษณะอย่างหนึ่งหรือมากกว่าดังต่อไปนี้:
    • 1. มีความเสถียรสูงที่อุณหภูมิห้องเป็นระยะเวลานาน
    • 2. อาจขึ้นรูปได้หลายรูปแบบ ได้แก่ ของเหลว ของแข็ง หรือกึ่งของแข็ง
    • 3. อาจกลายเป็นสารละลายที่มีสารเติมแต่งหลายชนิด
    • 4. อาจสร้างเป็นอาหารเสริมสำหรับมนุษย์บริโภค;
    • 5. มีกิจกรรมทางชีวภาพที่หลากหลายเมื่อเปรียบเทียบกับน้ำผลไม้ดั้งเดิม ตามที่เปิดเผยเพิ่มเติมในที่นี้ และ
    • 6. มีความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระ FRAP (Ferric-Reducing Antioxidant Power) มากกว่าน้ำผลไม้ดั้งเดิม
ดังนั้น การประดิษฐ์ยังจัดให้มีสารสกัดมารูลาที่แสดงคุณลักษณะโดยความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของ FRAP ที่เทียบเท่าวิตามินซีขั้นต่ำ 1,000 และ 1,500 มก. ต่อ 100 มล. ซึ่งเปรียบเทียบกับ FRAP ที่วัดจากน้ำมารูลาที่ไม่ผ่านการบำบัดระหว่าง 260 ถึง 600 มก. วิตามินซีต่อ 100 มล. กล่าวอีกนัยหนึ่ง ความจุ FRAP ของสารสกัดตามการประดิษฐ์อยู่ระหว่าง 2- และ 3 เท่าของกิจกรรมที่สังเกตได้ในน้ำผลไม้ดั้งเดิมที่ไม่ผ่านการบำบัด
ในบางรูปลักษณ์ สารสกัดที่มีความจุ FRAP ข้างต้นคือสารสกัด I
การประดิษฐ์นี้ยังจัดให้มีสารสกัดที่มีเศษส่วนพอลิฟีนอลที่หมดสิ้นแล้ว สารสกัดดังกล่าวถูกกำหนดให้เป็นสารสกัด II ส่วนโพลีฟีนอลิก, ในที่นี้เป็นสารสกัด III, อาจถูกแยกออกจากน้ำมารูลาโดย, ตัวอย่างเช่น, โครมาโตกราฟีของน้ำมารูลาเพื่อให้สารสกัด II (หมดสิ้นไป) และสารสกัด III (ส่วนฟีนอลิกที่แยกออก) ในบางรูปลักษณ์ การลดลงของเศษส่วนโพลีฟีนอลทำได้โดยกระบวนการซึ่งประกอบรวมด้วยการกรองน้ำมารูลา ตัวอย่างเช่น โดยการส่งผ่านน้ำผ่านผ้าขาวหนึ่งชั้นหรือมากกว่า (ที่มีเกรดต่างกัน เช่น จากผ้าทอแบบเปิดไปจนถึงแบบละเอียดพิเศษที่ใช้ตาม คุณภาพและปริมาณของน้ำผลไม้), ปั่นแยกน้ำผลไม้ที่กรองแล้วเพื่อขจัดเศษผลไม้, การใช้น้ำผลไม้ใสกับโครมาโทกราฟี, เช่น, คอลัมน์โครมาโตกราฟีโดยใช้คอลัมน์ที่อัดแน่นด้วย Sepabeads ion exchange และ adsorbent resins หรือ C18- ซิลิกาหรือเรซินที่ถูกพันธะสำหรับการปฏิสัมพันธ์ที่ไม่ชอบน้ำและโครมาโตกราฟีแบบเฟสย้อนกลับ รวบรวมเศษส่วนและรวมเศษส่วนที่มีปริมาณของแข็งที่ละลายน้ำได้ทั้งหมด (TSS) เท่ากัน
ในบางรูปลักษณ์ เศษส่วนโพลีฟีนอลอาจถูกรวบรวมจากตัวกลางที่ใช้สำหรับโครมาโตกราฟี เช่น จากเม็ดบีดโดยการผสมตัวกลาง เช่น เม็ดบีดกับสารละลายแอลกอฮอล์ (เอทานอล เมทานอล ฯลฯ) เศษส่วนแอลกอฮอล์อาจรวมตัวกันและระเหยจนแห้ง
ตามรูปลักษณ์บางส่วน เพื่อให้ได้สารสกัดที่มีอัตราส่วนโพลีฟีนอลต่อวิตามินซีเพิ่มขึ้น ส่วนของโพลีฟีนอล (เช่น สารสกัด III) อาจถูกแยกออกจากน้ำผลไม้และจากนั้นเติมลงในส่วนของโพลีฟีนอลที่พร่อง (เช่น สารสกัด II) . ในบางรูปลักษณ์ สารสกัด II ถูกรวมกับสารสกัด I
ในบางรูปลักษณ์ สารสกัด II แสดงคุณลักษณะโดยความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของ FRAP อย่างน้อยระหว่าง 250 และ 500 มก. เทียบเท่าวิตามินซีต่อ 100 มล.
ตามที่ใช้ในที่นี้ 'โพลีฟีนอล' หมายถึงกลุ่มของสารที่แสดงคุณลักษณะโดยการมีอยู่ของฟีนอลมากกว่าหนึ่งหน่วยหรือหน่วยการสร้างต่อโมเลกุล โพลีฟีนอลโดยทั่วไปแบ่งออกเป็นแทนนินที่ไฮโดรไลซ์ได้ (เอสเทอร์ของกรดแกลลิกของกลูโคสและน้ำตาลอื่นๆ) และฟีนิลโพรพานอยด์ เช่น ลิกนิน ฟลาโวนอยด์ และแทนนินแบบควบแน่น ในบางรูปลักษณ์ โพลีฟีนอลที่ได้รับจากน้ำมาคูลาประกอบรวมด้วยแทนนินที่ย่อยสลายได้, คาเทชินและกรดไฮดรอกซีซินนามิกและ/หรืออนุพันธ์ของพวกมัน
ในอีกลักษณะหนึ่ง การประดิษฐ์นี้จัดให้มีการใช้สารสกัดจากการประดิษฐ์อย่างน้อยหนึ่งรายการสำหรับการเตรียมองค์ประกอบ
ในบางรูปลักษณ์ องค์ประกอบคือองค์ประกอบทางเภสัชกรรม
ในรูปลักษณ์เพิ่มเติม สารสกัดคือส่วนผสมออกฤทธิ์ที่มีอยู่ในองค์ประกอบพร้อมกับตัวพา, สารเพิ่มปริมาณหรือส่วนเติมเนื้อยาที่ยอมรับได้ทางเภสัชกรรม
ตัวเลือกของตัวพาจะถูกกำหนดเป็นบางส่วนโดยสารสกัดเฉพาะ รวมทั้งโดยวิธีการเฉพาะที่ใช้เพื่อบริหารให้องค์ประกอบซึ่งประกอบรวมด้วย ดังนั้น มีสูตรผสมที่เหมาะสมที่หลากหลายขององค์ประกอบทางเภสัชกรรมของการประดิษฐ์นี้ สูตรผสมต่อไปนี้สำหรับการบริหารให้ทางปาก, ละอองลอย, ทางหลอดเลือด, ใต้ผิวหนัง, ทางหลอดเลือดดำ, เข้ากล้าม, ในช่องท้อง, ทางทวารหนักและทางช่องคลอดเป็นเพียงตัวอย่างเท่านั้นและไม่มีทางจำกัด
สูตรผสมที่เหมาะสมสำหรับการบริหารให้ทางปากสามารถประกอบด้วย (a) สารละลายที่เป็นของเหลว เช่น ปริมาณที่มีประสิทธิผลของสารสกัดที่ละลายในสารเพิ่มปริมาณ เช่น น้ำ น้ำเกลือ หรือน้ำส้ม; (ข) แคปซูล ซอง ยาเม็ด ยาอม และยาอม โดยแต่ละชนิดบรรจุสารสกัดในรูปของแข็งหรือเม็ดในปริมาณที่กำหนดไว้ล่วงหน้า (c) ผง; (d) สารแขวนลอยในของเหลวที่เหมาะสม; และ (e) อิมัลชันที่เหมาะสม สูตรผสมของเหลวอาจรวมถึงสารเพิ่มปริมาณ เช่น น้ำและแอลกอฮอล์ ตัวอย่างเช่น เอทานอล เบนซิลแอลกอฮอล์ และโพลีเอทิลีนแอลกอฮอล์ ไม่ว่าจะมีหรือไม่มีการเติมสารลดแรงตึงผิว สารแขวนลอย หรือสารอิมัลซิไฟเออร์ที่ยอมรับได้ทางเภสัชกรรม รูปแบบแคปซูลสามารถเป็นเจลาตินชนิดเปลือกแข็งหรือเปลือกนิ่มธรรมดาที่มี ตัวอย่างเช่น สารลดแรงตึงผิว สารหล่อลื่น และสารตัวเติมเฉื่อย เช่น แลคโตส ซูโครส แคลเซียมฟอสเฟต และแป้งข้าวโพด รูปแบบยาเม็ดอาจรวมถึงแลคโตส ซูโครส แมนนิทอล แป้งข้าวโพด แป้งมันฝรั่ง กรดอัลจินิก ไมโครคริสตัลไลน์เซลลูโลส อะคาเซีย เจลาติน กัวร์กัม คอลลอยด์ซิลิคอนไดออกไซด์ โซเดียมครอสคาร์เมลโลส ทัลก์ แมกนีเซียมสเตียเรต แคลเซียมสเตียเรต สังกะสีสเตียเรต , กรดสเตียริกและส่วนเติมเนื้อยาอื่นๆ สารแต่งสี สารเจือจาง สารบัฟเฟอร์ สารช่วยแตกตัว สารทำให้ชื้น สารกันเสีย สารแต่งกลิ่น และตัวพาที่เข้ากันได้ทางเภสัชวิทยา รูปแบบยาอมสามารถประกอบรวมด้วยสารออกฤทธิ์ในสารปรุงแต่งกลิ่นรส ซึ่งโดยปกติคือซูโครสและอะคาเซียหรือทรากาแคนธ์ รวมทั้งพาสซีย์ซึ่งประกอบรวมด้วยสารออกฤทธิ์ในเบสเฉื่อย เช่น เจลาตินและกลีเซอรีนหรือซูโครสและอะคาเซีย อิมัลชัน เจล และสิ่งที่คล้ายกันที่มี นอกเหนือไปจากสารสกัด สารพาดังที่เป็นที่รู้จักในศิลปวิทยาการแขนงนี้
สารสกัดหรือองค์ประกอบของการประดิษฐ์นี้ เช่น องค์ประกอบทางเภสัชกรรม เพียงอย่างเดียวหรือในการรวมกันกับส่วนประกอบที่เหมาะสมอื่นๆ สามารถถูกทำให้เป็นสูตรละอองลอยที่จะบริหารให้ผ่านทางการสูดดม สูตรละอองลอยเหล่านี้สามารถใส่ลงในสารขับดันที่ยอมรับได้ที่มีความดัน เช่น ไดคลอโรไดฟลูออโรมีเทน โพรเพน ไนโตรเจน และอื่นๆ ในทำนองเดียวกัน นอกจากนี้ยังอาจถูกผสมสูตรเป็นเภสัชภัณฑ์สำหรับการเตรียมแบบไม่ใช้ความดัน เช่น ในเครื่องพ่นฝอยละอองหรือเครื่องฉีดน้ำ
สูตรผสมที่เหมาะสมสำหรับการบริหารให้ทางหลอดเลือดรวมถึงสารละลายสำหรับการฉีดที่ปราศจากเชื้อไอโซโทนิกที่มีน้ำและไม่ใช่น้ำ ซึ่งสามารถมีสารต้านออกซิแดนท์, บัฟเฟอร์, แบคทีเรียและตัวถูกละลายที่ทำให้สูตรผสมไอโซโทนิกมีเลือดของผู้รับที่ตั้งใจไว้ และปราศจากเชื้อที่มีน้ำและไม่ใช่น้ำ สารแขวนลอยที่รวมถึงสารแขวนลอย สารช่วยละลาย สารทำให้ข้น สารทำให้คงตัว และสารกันบูด สารประกอบสามารถถูกบริหารให้ในสารเพิ่มปริมาณที่ยอมรับได้ทางสรีรวิทยาในตัวพาทางเภสัชกรรม เช่น ของเหลวปราศจากเชื้อหรือของผสมของของเหลวที่รวมถึงน้ำ น้ำเกลือ เดกซ์โทรสในน้ำและสารละลายน้ำตาลที่เกี่ยวข้อง แอลกอฮอล์ เช่น เอทานอล ไอโซโพรพานอล หรือเฮกซาเดซิลแอลกอฮอล์ ไกลคอล เช่น โพรพิลีนไกลคอลหรือโพลีเอทิลีนไกลคอล, กลีเซอรอลคีตาล เช่น 2,2-ไดเมทิล-1,3-ไดออกโซเลน-4-เมทานอล, อีเทอร์ เช่น โพลี(เอทิลีนไกลคอล) 400, น้ำมัน, กรดไขมัน, ไขมัน แอซิดเอสเทอร์หรือกลีเซอไรด์ หรือกลีเซอไรด์ของกรดไขมันอะซิติเลตที่มีหรือไม่มีการเติมสารลดแรงตึงผิวที่ยอมรับได้ทางเภสัชกรรม เช่น สบู่หรือผงซักฟอก สารแขวนลอย เช่น เพคติน คาร์โบเมอร์ เมทิลเซลลูโลส ไฮดรอกซีโพรพิลเมทิลเซลลูโลส หรือคาร์บอกซีเมทิลเซลลูโลส หรือสารทำอิมัลชัน และ สารเสริมทางเภสัชกรรมอื่น ๆ
น้ำมันที่สามารถใช้ในสูตรทางหลอดเลือด ได้แก่ น้ำมันปิโตรเลียม สัตว์ พืช หรือน้ำมันสังเคราะห์ ตัวอย่างเฉพาะของน้ำมัน ได้แก่ ถั่วลิสง ถั่วเหลือง งา เมล็ดฝ้าย ข้าวโพด มะกอก น้ำมันเบนซิน และแร่ธาตุ กรดไขมันที่เหมาะสมสำหรับใช้ในสูตรผสมทางหลอดเลือดรวมถึงกรดโอเลอิก กรดสเตียริก และกรดไอโซสเตียริก เอทิลโอลีเอตและไอโซโพรพิลไมริสเตตคือตัวอย่างของเอสเทอร์ของกรดไขมันที่เหมาะสม สบู่ที่เหมาะสมสำหรับใช้ในสูตรผสมทางหลอดเลือดรวมถึงไขมันอัลคาไลโลหะ แอมโมเนียม และเกลือไตรเอทาโนลามีน และสารซักฟอกที่เหมาะสมรวมถึง (a) สารชะล้างที่มีประจุบวก เช่น ตัวอย่างเช่น ไดเมทิลไดอัลคิลแอมโมเนียมเฮไลด์และอัลคิลไพริดิเนียมเฮไลด์ (b) สารชะล้างประจุลบ เช่น ตัวอย่างเช่น อัลคิล แอริล และโอเลฟินซัลโฟเนต อัลคิล โอเลฟิน อีเทอร์ และโมโนกลีเซอไรด์ซัลเฟต และซัลโฟซัคซิเนต (c) สารชะล้างแบบไม่มีไอออน เช่น ตัวอย่างเช่น แฟตตีเอมีนออกไซด์ กรดไขมันอัลคาโนลาไมด์ และโพลิออกซีเอทิลีนโพลิโพรพิลีนโคพอลิเมอร์ (d) สารชะล้างแอมโฟเทอริก เช่น ตัวอย่างเช่น เกลือแอมโมเนียมควอเทอร์นารีของอัลคิล-β-อะมิโนไพรโอเนตและ 2-อัลคิล-อิมิดาโซลีน และ (3) ของผสมของพวกมัน
สูตรผสมที่ไม่ผ่านทางเดินอาหารโดยทั่วไปมีตั้งแต่ประมาณ 0.5 ถึงประมาณ 25% โดยน้ำหนักของสารสกัดในสารละลาย สามารถใช้สารกันบูดและบัฟเฟอร์ที่เหมาะสมในสูตรดังกล่าว เพื่อลดหรือกำจัดการระคายเคืองที่ตำแหน่งที่ทำการฉีด องค์ประกอบดังกล่าวอาจมีสารลดแรงตึงผิวแบบไม่มีประจุหนึ่งชนิดหรือมากกว่าที่มีความสมดุลของไฮโดรฟิล-ไลโปฟิล (HLB) ตั้งแต่ประมาณ 12 ถึงประมาณ 17 ปริมาณของสารลดแรงตึงผิวในสูตรผสมดังกล่าวมีตั้งแต่ประมาณ 5 ถึงประมาณ 15% โดยน้ำหนัก สารลดแรงตึงผิวที่เหมาะสมประกอบด้วยเอสเทอร์ของกรดไขมันโพลีเอทิลีนซอร์บิแทน เช่น ซอร์บิแทนโมโนโอลีเอตและสารเพิ่มน้ำหนักโมเลกุลสูงของเอทิลีนออกไซด์ที่มีเบสที่ไม่ชอบน้ำ ซึ่งก่อรูปขึ้นจากการควบแน่นของโพรพิลีนออกไซด์กับโพรพิลีนไกลคอล สูตรผสมที่ไม่ผ่านทางเดินอาหารสามารถนำเสนอในภาชนะปิดผนึกแบบหน่วยขนาดยาหรือหลายขนาดยา เช่น หลอดแก้วและหลอดเล็ก และสามารถเก็บไว้ในสภาวะแห้งเยือกแข็ง (ไลโอฟิไลซ์) ซึ่งต้องการเพียงการเติมตัวพาของเหลวปลอดเชื้อ ตัวอย่างเช่น น้ำ สำหรับฉีดทันทีก่อนใช้งาน สารละลายสำหรับฉีดและสารแขวนลอยภายนอกสามารถเตรียมได้จากผง แกรนูล และยาเม็ดที่ปราศจากเชื้อของชนิดที่บรรยายไว้ก่อนหน้านี้
สารสกัดและองค์ประกอบของการประดิษฐ์นี้อาจถูกทำให้เป็นสูตรผสมที่ฉีดได้ ข้อกำหนดสำหรับตัวพาทางเภสัชกรรมที่มีประสิทธิผลสำหรับองค์ประกอบที่ฉีดได้เป็นที่ทราบกันดีต่อทักษะทั่วไปในศิลปวิทยาการแขนงนี้ ดู เภสัชกรรมและการประกอบวิชาชีพเภสัชกรรม J. B. Lippincott Co., Philadelphia, Pa., Banker and Chalmers, eds., หน้า 238-250 (1982) และ คู่มือ ASHP เกี่ยวกับยาฉีด ในอีก 4ไทย ed. หน้า 622-630 (1986)
นอกจากนี้ สารสกัดของการประดิษฐ์นี้อาจถูกสร้างเป็นยาเหน็บโดยการผสมกับเบสหลายชนิด เช่น เบสที่เป็นอิมัลซิไฟเออร์หรือเบสที่ละลายน้ำได้ สูตรผสมที่เหมาะสมสำหรับการบริหารให้ทางช่องคลอดอาจถูกนำเสนอเป็นเพสซารี, ผ้าอนามัยแบบสอด, ครีม, เจล, แป้งเพสต์, โฟมหรือสูตรสเปรย์ที่มีนอกเหนือไปจากสารออกฤทธิ์ สารพาเช่นที่รู้จักในศิลปวิทยาการแขนงนี้ว่าเหมาะสม
ตามที่ระบุไว้ข้างต้น สารสกัดและส่วนประกอบของการประดิษฐ์อาจถูกผลิต นำเสนอ และ/หรือจัดเก็บในรูปแบบใดๆ ได้แก่ ในรูปของของเหลว สารเข้มข้น ผงแห้ง สารละลาย อิมัลชัน หรือสารละลายสต็อก หรือ เข้มข้นของสต็อก
ในบางรูปลักษณ์ องค์ประกอบทางเภสัชกรรมมีไว้สำหรับการบำบัดหรือการป้องกันโรคหรือความผิดปกติอย่างน้อยหนึ่งชนิดที่เกี่ยวข้องกับความเสียหายจากความเครียดออกซิเดชัน
ความเครียดออกซิเดชันเป็นผลมาจากความไม่สมดุลของสภาวะสมดุลของโปรออกซิแดนท์/สารต้านอนุมูลอิสระที่นำไปสู่การสร้างสายพันธุ์ออกซิเจนที่ทำปฏิกิริยาเป็นพิษ อนุมูลอิสระเกิดขึ้นเมื่อออกซิเจนทำปฏิกิริยากับโมเลกุลบางชนิดและเริ่มปฏิกิริยาลูกโซ่ของความเสียหายระหว่างส่วนประกอบของเซลล์ที่สำคัญ ดังนั้นการอักเสบและกระบวนการออกซิเดชั่นจึงเชื่อมโยงถึงกัน นอกจากนี้ ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันยังสามารถกระตุ้นความเป็นพิษของเซลล์เม็ดเลือด กระตุ้นการปลดปล่อยไซโตไคน์ที่อักเสบ และกระตุ้นการผลิตโกรทแฟคเตอร์ ความเครียดออกซิเดทีฟมีบทบาทสำคัญในการก่อตัวของคราบจุลินทรีย์และการอักเสบของหลอดเลือดโดยธรรมชาติอาจเป็นตัวทำนายที่แข็งแกร่งของหลอดเลือด
ดังนั้น ตามที่ใช้ในที่นี้ 'ความเสียหายจากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน' หมายถึงความเสียหายต่อเซลล์ เนื้อเยื่อ และ/หรืออวัยวะของสัตว์ รวมถึงมนุษย์ ซึ่งเกิดจากความไม่สมดุลระหว่างการผลิตออกซิเจนที่ทำปฏิกิริยาและความสามารถของระบบชีวภาพในการเตรียมพร้อม ล้างพิษตัวกลางปฏิกิริยาหรือซ่อมแซมความเสียหายที่เกิดขึ้นได้อย่างง่ายดาย บ่อยครั้งที่การรบกวนในสถานะรีดอกซ์ปกตินี้อาจทำให้เกิดผลกระทบที่เป็นพิษผ่านการผลิตเปอร์ออกไซด์และอนุมูลอิสระที่ทำลายส่วนประกอบทั้งหมดหรือบางส่วนของเซลล์ รวมทั้งโปรตีน ไขมัน และดีเอ็นเอ
ในบางรูปลักษณ์ ความเสียหายจากความเครียดออกซิเดชันเกี่ยวข้องกับความผิดปกติหรือโรคที่เลือกมาจากหลอดเลือดแดงแข็ง, โรคพาร์กินสัน, หัวใจล้มเหลว, กล้ามเนื้อหัวใจตาย, โรคหรือความผิดปกติของระบบประสาท, โรคตา, อาการอ่อนล้าเรื้อรังและอื่น ๆ
โรคหลอดเลือดแข็งตัวซึ่งเป็นสาเหตุการเจ็บป่วยและการเสียชีวิตอันดับต้น ๆ ของผู้ที่มีวิถีชีวิตแบบตะวันตก พัฒนาขึ้นจากปัจจัยเสี่ยงต่าง ๆ ภาวะโคเลสเตอรอลในเลือดสูงเป็นปัจจัยเสี่ยงที่สำคัญสำหรับหลอดเลือด และการลดความเข้มข้นของโคเลสเตอรอลในพลาสมาโดยการรักษาด้วยยาจะลดอุบัติการณ์ของโรคหัวใจและหลอดเลือด รอยโรค atherosclerotic มีลักษณะเฉพาะคือความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชั่นที่เร่งขึ้นและการก่อตัวของสายพันธุ์ออกซิเจนที่มีปฏิกิริยา (ROS) ซึ่งโจมตีไขมันในไลโปโปรตีนเช่นเดียวกับในแมคโครฟาจของหลอดเลือดแดง การปรับเปลี่ยนออกซิเดชันของไลโปโปรตีนความหนาแน่นต่ำ (LDL) มีบทบาทสำคัญในการเกิดโรคของหลอดเลือด Oxidized LDL (Ox-LDL) เป็นตัวการหลักในการพัฒนารอยโรคหลอดเลือด เนื่องจากกระตุ้นการสะสมของคอเลสเตอรอลมาโครฟาจและการสร้างโฟมเซลล์ ตรงกันข้ามกับการเกิดไขมันในหลอดเลือดของ LDL ระดับไลโปโปรตีนความหนาแน่นสูง (HDL) ในซีรั่มมีความสัมพันธ์แบบผกผันกับความเสี่ยงของหลอดเลือดแดงแข็งตัว HDL ออกแรงยับยั้งการเกิดออกซิเดชันของ LDL และผลกระทบนี้อาจเกี่ยวข้องกับเอนไซม์พาราออกโซเนส 1 (PON1) ที่เกี่ยวข้อง
หลอดเลือดยังเป็นกระบวนการหรือความผิดปกติที่เกี่ยวข้องกับการสะสมของคราบพลัคที่ด้านในของหลอดเลือดแดง รวมถึงในหัวใจ สมอง แขน ขา และกระดูกเชิงกราน ดังนั้น คำนี้ยังอาจหมายถึงการสะสมที่เพิ่มขึ้นของเซลล์กล้ามเนื้อเรียบ เซลล์ภูมิคุ้มกัน (เช่น ลิมโฟไซต์ มาโครฟาจ หรือโมโนไซต์) ผลิตภัณฑ์ไขมัน (เช่น ไลโปโปรตีนหรือคอเลสเตอรอล) ของเสียจากเซลล์ แคลเซียม หรือสารอื่นๆ ภายใน เยื่อบุชั้นในของหลอดเลือดส่งผลให้หลอดเลือดตีบหรืออุดตันและเกิดโรคที่เกี่ยวข้องกับหลอดเลือด
เนื่องจากภาวะหลอดเลือดแดงแข็งแสดงอยู่ภายในหลอดเลือดแดงขนาดใหญ่และขนาดกลาง การรักษาหรือการป้องกันมักส่งผลต่อการพัฒนาของการอักเสบเรื้อรังภายในหลอดเลือดแดง
สารสกัดของการประดิษฐ์นี้จึงเหมาะสำหรับการรักษาและการป้องกันสภาวะต่างๆ เช่นกัน ซึ่งรวมถึงภาวะหลอดเลือดแดงแข็งของหลอดเลือดหัวใจที่ก่อให้เกิดโรคหลอดเลือดหัวใจ กล้ามเนื้อหัวใจตาย หลอดเลือดหัวใจตีบ และโรคหลอดเลือดหัวใจตีบตัน หลอดเลือดของหลอดเลือดแดงที่ส่งระบบประสาทส่วนกลางทำให้เกิดโรคหลอดเลือดสมองและภาวะสมองขาดเลือดชั่วคราว หลอดเลือดของการไหลเวียนส่วนปลายทำให้เกิด claudication เป็นระยะ ๆ และเนื้อตายเน่า; หลอดเลือดของหลอดเลือดแดงของการไหลเวียนของ splanchnic ทำให้เกิด mesenteric ischemia; และหลอดเลือดแดงไตตีบ
ดังนั้น องค์ประกอบของการประดิษฐ์ยังเหมาะสมเพิ่มเติมสำหรับใช้ในการบำบัดหรือป้องกันโรคหรือความผิดปกติอย่างน้อยหนึ่งชนิดที่เกี่ยวข้องกับความเข้มข้นของไขมันไตรกลีเซอไรด์ในซีรั่มที่เพิ่มขึ้นหนึ่งชนิดหรือมากกว่า, ความเข้มข้นของโคเลสเตอรอลในซีรัมและความเข้มข้นของโคเลสเตอรอลทั้งหมดและ LDL ในซีรัมและ HDL- ที่ลดลง ความเข้มข้นของคอเลสเตอรอล
ตามที่ใช้ในที่นี้ โรคหรือความผิดปกติดังกล่าวที่เกี่ยวข้องกับความเข้มข้นของลิพิดไตรกลีเซอไรด์ในเลือดที่เพิ่มขึ้น, ความเข้มข้นของคอเลสเตอรอลในเลือดและความเข้มข้นของคอเลสเตอรอลรวมและ LDL ในซีรัมและความเข้มข้นของคอเลสเตอรอล HDL ที่ลดลง เกี่ยวข้องกับระดับคอเลสเตอรอลสูงผิดปกติ (โคเลสเตอรอลในเลือดสูง) และ/หรือระดับ LDL ที่สูง หรือไตรกลีเซอไรด์ และ/หรือความเข้มข้นของ HDL ที่ทำหน้าที่ต่ำกว่า เช่น โรคหลอดเลือดหัวใจหรือโรคหัวใจและหลอดเลือดในรูปแบบอื่นๆ รวมทั้งโรคหรือความผิดปกติที่เกี่ยวข้องกับการพัฒนาไขมันในหลอดเลือดแดง (เช่น หลอดเลือดแดงแข็ง) เช่น ภาวะไขมันในเลือดต่ำ โรคหลอดเลือดส่วนปลาย เบาหวาน และ ความดันโลหิตสูง.
ความเครียดออกซิเดทีฟยังเชื่อมโยงกับการตายของเซลล์ประสาทที่เกี่ยวข้องกับสภาวะความเสื่อมของระบบประสาทต่างๆ โรคเกี่ยวกับระบบประสาทคือภาวะที่เซลล์ของสมองและไขสันหลังสูญเสียไป โดยปกติแล้ว การเสื่อมสภาพของระบบประสาทจะเริ่มนานก่อนที่ผู้ป่วยจะมีอาการใดๆ เนื่องจากเซลล์สมองได้รับออกซิเจนปฏิกิริยาอย่างต่อเนื่องซึ่งเกิดจากการเผาผลาญออกซิเดชัน ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันจึงเป็นหนึ่งในปัจจัยที่จูงใจให้เกิดความผิดปกติทางระบบประสาทในผู้ใหญ่ และมีส่วนในการทำให้เกิดโรคของความผิดปกติบางอย่าง เช่น โรคพาร์กินสัน
สารสกัดหรือองค์ประกอบของการประดิษฐ์ยังใช้สำหรับการบำบัดหรือการป้องกันโรคหรือความผิดปกติที่เกี่ยวข้องกับการเสื่อมของระบบประสาทอย่างน้อยหนึ่งชนิด
'โรคหรือความผิดปกติของระบบประสาทเสื่อม' ในบริบทของการประดิษฐ์นี้ อ้างอิงถึงสภาวะหนึ่งอย่างหรือมากกว่าที่เซลล์ของสมองและไขสันหลังสูญเสียไปอันเป็นผลจากการเสื่อมสภาพของเซลล์ประสาทหรือปลอกไมอีลินของพวกมัน ซึ่งเมื่อเวลาผ่านไปจะนำไปสู่ความผิดปกติ และความพิการอันเป็นผลจากสิ่งนี้ ดังนั้น โรคหรือความผิดปกติของระบบประสาทคือโรคที่เกี่ยวข้องกับสภาวะที่ก่อให้เกิดปัญหาเกี่ยวกับการเคลื่อนไหว เช่น การเคลื่อนไหวผิดปกติ และรวมถึงสภาวะที่ส่งผลต่อความจำและเกี่ยวข้องกับภาวะสมองเสื่อม ตัวอย่างที่ไม่จำกัดบางตัวอย่างของโรคหรือความผิดปกติของระบบประสาทรวมถึงโรคพิษสุราเรื้อรัง, โรคอเล็กซานเดอร์, โรคอัลเปอร์, โรคอัลไซเมอร์, โรคกล้ามเนื้ออ่อนแรงด้านข้างเส้นโลหิตตีบ (โรคลู เกห์ริก), ataxia telangiectasia, โรคแบตเทน (ยังรู้จักในชื่อโรคสปีลเมเยอร์-โวกต์-โจเกรน-แบทเทน) โรคสมองจากฟองน้ำในวัว (BSE), โรค canavan, สมองพิการ, กลุ่มอาการค็อกเคย์น, การเสื่อมของคอร์ติโคบาซัล, โรค Creutzfeldt-Jakob, การเสื่อมของกล้ามเนื้อส่วนหน้า, โรคฮันติงตัน, ภาวะสมองเสื่อมที่เกี่ยวข้องกับเอชไอวี, โรคเคนเนดี, โรค Krabbe, ภาวะสมองเสื่อมจากร่างกายที่มีไขมันต่ำ, โรคระบบประสาท, Machado- โรคโจเซฟ (spinocerebellar ataxia ชนิดที่ 3), การฝ่อหลายระบบ, โรคปลอกประสาทเสื่อมแข็ง, โรคลมหลับ, โรค Niemann Pick, โรคพาร์กินสัน, โรค Pelizaeus-Merzbacher, โรค Pick, โรคเส้นโลหิตตีบด้านข้างหลัก, โรค prion, อัมพาตเหนือศีรษะแบบก้าวหน้า, โรค Refsum's, โรค Sandhoffs, โรคของเด็ก การเสื่อมของไขสันหลังแบบกึ่งเฉียบพลันรองจากเปอร์นิซิโอ โรคโลหิตจางจากเรา, spinocerebellar ataxia, การฝ่อของกล้ามเนื้อไขสันหลัง, โรค Steele-Richardson-Olszewski และ tabes dorsalis
ในอีกลักษณะหนึ่ง การประดิษฐ์นี้จัดให้มีวิธีการสำหรับการบำบัดหรือการป้องกันโรคหรือความผิดปกติอย่างน้อยหนึ่งชนิดที่เกี่ยวข้องกับความเสียหายจากความเครียดออกซิเดชันในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ซึ่งประกอบรวมด้วยการบริหารให้สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมดังกล่าวด้วยปริมาณที่มีประสิทธิผลของสารสกัดตามการประดิษฐ์ หรือองค์ประกอบทางเภสัชกรรมที่ประกอบรวมด้วยของสิ่งนั้น
ในลักษณะเพิ่มเติมของการประดิษฐ์นี้มีการจัดให้มีวิธีการสำหรับการบำบัดหรือการป้องกันโรคหรือความผิดปกติอย่างน้อยหนึ่งชนิดที่เกี่ยวข้องกับความเข้มข้นของไขมันไตรกลีเซอไรด์ในซีรั่มที่เพิ่มขึ้นหนึ่งชนิดหรือมากกว่า, ความเข้มข้นของโคเลสเตอรอลในซีรัมและซีรั่มทั้งหมดและความเข้มข้นของโคเลสเตอรอล LDL และ HDL ที่ลดลง - ความเข้มข้นของคอเลสเตอรอลในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ซึ่งประกอบรวมด้วยการบริหารให้สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมดังกล่าวด้วยปริมาณที่มีประสิทธิผลของสารสกัดตามการประดิษฐ์หรือองค์ประกอบทางเภสัชกรรมที่ประกอบรวมด้วยสิ่งนั้น
ในอีกลักษณะหนึ่งของมัน การประดิษฐ์นี้จัดให้มีวิธีการสำหรับการบำบัดหรือการป้องกันโรคหรือความผิดปกติที่เกี่ยวข้องกับการเสื่อมของระบบประสาทอย่างน้อยหนึ่งชนิดในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมซึ่งประกอบรวมด้วยการบริหารให้สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมดังกล่าวด้วยปริมาณที่มีประสิทธิผลของสารสกัดตามการประดิษฐ์หรือองค์ประกอบทางเภสัชกรรมซึ่งประกอบรวมด้วย ของมัน
ในลักษณะเพิ่มเติม การประดิษฐ์นี้จัดให้มีสารต้านอนุมูลอิสระซึ่งประกอบรวมด้วยสารสกัดของการประดิษฐ์
ในรูปลักษณ์เพิ่มเติม การประดิษฐ์นี้จัดให้มีสารลดโคเลสเตอรอลซึ่งประกอบรวมด้วยสารสกัดของการประดิษฐ์
ภายในขอบเขตของการประดิษฐ์นี้ คำว่า 'การรักษาและ/หรือการป้องกัน' หมายถึงการบริหารให้ปริมาณทางการรักษาขององค์ประกอบของการประดิษฐ์นี้ซึ่งมีประสิทธิผลในการปรับปรุงอาการที่ไม่พึงประสงค์ที่เกี่ยวข้องกับโรค เพื่อป้องกันการแสดงอาการดังกล่าว อาการก่อนที่จะเกิดขึ้น, เพื่อชะลอการดำเนินของโรค, ชะลอการเสื่อมสภาพของอาการ, เพื่อเพิ่มระยะการโจมตีของโรค, ชะลอความเสียหายที่แก้ไขไม่ได้ซึ่งเกิดจากระยะเรื้อรังที่ก้าวหน้าของโรค, เพื่อชะลอการโจมตีของโรคดังกล่าว ระยะลุกลามเพื่อลดความรุนแรงหรือรักษาโรค เพื่อเพิ่มอัตราการรอดชีวิตหรือฟื้นตัวอย่างรวดเร็ว หรือเพื่อป้องกันไม่ให้เกิดโรคขึ้น หรือรวมกันตั้งแต่ 2 อย่างขึ้นไป
สารสกัดหรือองค์ประกอบของการประดิษฐ์อาจถูกบริหารให้โดยวิธีการใดๆ ที่เป็นที่รู้จักต่อบุคคลที่มีความชำนาญในศิลปวิทยาการแขนงนี้ โดยปกติแล้ว การบริหารให้สารสกัดหรือองค์ประกอบทางเภสัชกรรมซึ่งประกอบรวมด้วยสิ่งนั้นเป็นปริมาณที่มีประสิทธิผลของสารสกัดที่ประกอบรวมในองค์ประกอบ 'ปริมาณที่มีประสิทธิผล' สำหรับจุดประสงค์ในที่นี้ถูกกำหนดโดยการพิจารณาที่อาจทราบในศิลปวิทยาการแขนงนี้ ปริมาณต้องมีประสิทธิผลเพื่อให้บรรลุผลการรักษาที่ต้องการตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ทั้งนี้ขึ้นอยู่กับชนิดและความรุนแรงของโรคที่จะรักษาและระบบการรักษา ปริมาณที่มีประสิทธิผลโดยทั่วไปกำหนดในการทดลองทางคลินิกที่ออกแบบอย่างเหมาะสม (เช่น การศึกษาช่วงขนาดยา) และบุคคลที่เชี่ยวชาญในศิลปวิทยาการแขนงนี้จะทราบวิธีดำเนินการทดลองดังกล่าวอย่างเหมาะสมเพื่อกำหนดปริมาณที่มีประสิทธิผล ตามที่ทราบโดยทั่วไป ปริมาณที่มีประสิทธิภาพขึ้นอยู่กับปัจจัยหลายอย่างรวมถึงความสัมพันธ์ของลิแกนด์กับตัวรับ โปรไฟล์การกระจายของมันภายในร่างกาย พารามิเตอร์ทางเภสัชวิทยาที่หลากหลาย เช่น ครึ่งชีวิตในร่างกาย ผลข้างเคียงที่ไม่ต้องการ ถ้า ใด ๆ ตามปัจจัยต่าง ๆ เช่น อายุและเพศ เป็นต้น
สารสกัดของการประดิษฐ์ยังอาจถูกใช้เพื่อเตรียมองค์ประกอบสำหรับใช้ในการประยุกต์ใช้ที่ไม่ใช่เภสัชภัณฑ์ที่หลากหลาย ในบางรูปลักษณ์ องค์ประกอบคือองค์ประกอบต่อต้านอนุมูลอิสระสำหรับใช้เป็นสารกันบูดสำหรับการใช้งานที่หลากหลายในอุตสาหกรรมอาหาร, อุตสาหกรรมเครื่องสำอาง, การรักษาโรค ฯลฯ และสำหรับการยับยั้งการเกิดออกซิเดชัน LDL ของทองแดงที่เหนี่ยวนำด้วยไอออนทองแดง ในหลอดทดลอง หรือ ในร่างกาย
สารสกัดที่เปิดเผยในที่นี้อาจใช้เป็นอาหารเสริมหรือเป็นส่วนประกอบที่ออกฤทธิ์ของอาหารเสริมดังกล่าวเพิ่มเติม ในบางรูปลักษณ์ อาหารเสริมเหมาะสำหรับการบริโภคโดยทั้งมนุษย์และสัตว์ที่ไม่ใช่มนุษย์ สำหรับการจัดการความเป็นอยู่ที่ดี และการรักษาและการป้องกันสภาวะและความผิดปกติที่เกี่ยวข้องกับความเสียหายจากออกซิเดชัน
ภายในบริบทของการประดิษฐ์นี้ ผลิตภัณฑ์เสริมอาหารซึ่งขึ้นอยู่กับธรรมชาติและรูปแบบทางกายภาพของมัน เช่น ไลโปฟิลิกหรือชอบน้ำในธรรมชาติ อาจประกอบรวมเพิ่มเติมด้วยอิมัลซิไฟเออร์ สารทำให้คงตัว สารต้านอนุมูลอิสระและสารเติมแต่งอื่นๆ หนึ่งชนิดหรือมากกว่า การใช้งานทำจากอิมัลซิไฟเออร์ที่เข้ากันได้ในอาหาร เช่น ฟอสโฟลิพิด ตัวอย่างเช่น เลซิติน, พอลิออกซีเอทิลีนซอร์บิแทนโมโนหรือไตรสเตียเรต, โมโนลอเรต, โมโนพาลมิเทต, โมโนหรือไตรโอลีเอต, โมโนหรือไดกลีเซอไรด์ อิมัลซิไฟเออร์ สารทำให้คงตัว สารต้านอนุมูลอิสระ และสารเติมแต่งเหล่านี้อาจถูกเติมลงในสารสกัดของการประดิษฐ์ตามการใช้ขั้นสุดท้ายของสารสกัดดังกล่าว
อาหารเสริมที่เปิดเผยในที่นี้อาจมีสารออกฤทธิ์ทางชีวภาพสังเคราะห์หรือจากธรรมชาติ เช่น กรดอะมิโน กรดไขมัน วิตามิน แร่ธาตุ โพลีฟีนอล ฯลฯ ซึ่งสามารถเติมได้โดยการผสมแบบแห้งหรือแบบเปียกเข้ากับองค์ประกอบดังกล่าวก่อนการพาสเจอร์ไรส์และ/หรือการทำให้แห้ง
ในบางรูปลักษณ์ ผลิตภัณฑ์เสริมอาหารคือสูตรสมบูรณ์ทางโภชนาการ ผลิตภัณฑ์นม เครื่องดื่มแช่เย็นหรือคงตัวในชั้นวาง เกลือแร่หรือน้ำบริสุทธิ์ เครื่องดื่มที่เป็นของเหลว ซุป ผลิตภัณฑ์เสริมอาหาร อาหารทดแทน โภชนาการแบบแท่ง ลูกกวาด, นมหรือผลิตภัณฑ์นมหมัก, โยเกิร์ต, นมผง, ผลิตภัณฑ์โภชนาการสำหรับลำไส้, สูตรสำหรับทารก, ผลิตภัณฑ์โภชนาการสำหรับทารก, ผลิตภัณฑ์จากธัญพืชหรือผลิตภัณฑ์จากธัญพืชหมัก, ไอศกรีม, ช็อคโกแลต, กาแฟ ผลิตภัณฑ์ทำอาหาร เช่น มายองเนส มะเขือเทศบด หรือน้ำสลัด หรืออาหารสัตว์เลี้ยง ตามรูปลักษณ์เหล่านี้ สารสกัดของการประดิษฐ์อาจถูกกระจายไปในอาหารหรือเครื่องดื่มเพื่อให้มีปริมาณสารอาหารที่ออกฤทธิ์ทางชีวภาพในแต่ละวัน ซึ่งส่วนใหญ่ขึ้นอยู่กับชนิดของอาหารที่สารสกัดถูกกระจาย ผลที่ต้องการ และเนื้อเยื่อเป้าหมาย . ปริมาณของอาหารเสริมที่แต่ละบุคคลจะบริโภคเพื่อให้ได้ผลที่เป็นประโยชน์นั้นขึ้นอยู่กับปัจจัยต่างๆ อย่างใดอย่างหนึ่งหรือหลายอย่าง เช่น ประเภทของอาหารเสริมและ/หรืออาหารและอายุและน้ำหนักของผู้บริโภค
ผลิตภัณฑ์เสริมอาหารสำหรับการบริหารให้ทางปากอาจอยู่ในรูปแคปซูล แคปซูลเจลาติน แคปซูลนิ่ม ยาเม็ด ยาเม็ดเคลือบน้ำตาล ยาเม็ด เพสต์หรือพาสทิล กัม หรือสารละลายหรืออิมัลชันที่ดื่มได้ น้ำเชื่อมหรือเจล ด้วยขนาดยาประมาณ 0.1 ถึง 100% ของสารสกัดของการประดิษฐ์ ซึ่งสามารถถ่ายโดยตรงกับน้ำหรือโดยวิธีอื่นใดที่ทราบ สารเสริมนี้อาจรวมถึงสารให้ความหวาน สารเพิ่มความคงตัว สารต้านอนุมูลอิสระ สารเติมแต่ง สารแต่งกลิ่นหรือสี
เป็นที่ชื่นชมว่าคุณลักษณะบางอย่างของการประดิษฐ์ ซึ่งอธิบายไว้ในบริบทของรูปลักษณ์ที่แยกจากกัน เพื่อความชัดเจน อาจถูกจัดให้มีร่วมกันในรูปลักษณ์เดียว ในทางกลับกัน คุณลักษณะต่างๆ ของการประดิษฐ์ ซึ่งอธิบายไว้ในบริบทของรูปลักษณ์เดียวเพื่อความกระชับ อาจถูกจัดให้มีแยกต่างหากหรือในการรวมกันย่อยที่เหมาะสมใดๆ หรือตามที่เหมาะสมในรูปลักษณ์อื่นๆ ที่อธิบายไว้ของการประดิษฐ์ คุณลักษณะบางอย่างที่อธิบายไว้ในบริบทของรูปลักษณ์ต่างๆ จะไม่ได้รับการพิจารณาคุณลักษณะที่จำเป็นของรูปลักษณ์เหล่านั้น เว้นแต่รูปลักษณ์จะไม่ทำงานโดยไม่มีองค์ประกอบเหล่านั้น
ตามที่ใช้ในที่นี้ กระบวนการ สารสกัด หรือส่วนประกอบของการประดิษฐ์อาจรวมถึงขั้นตอนหรือส่วนผสมหรือชิ้นส่วนเพิ่มเติม เฉพาะในกรณีที่ขั้นตอน ส่วนผสม หรือส่วนประกอบเพิ่มเติมไม่เปลี่ยนแปลงลักษณะพื้นฐานและแปลกใหม่ของกระบวนการ สารสกัด และองค์ประกอบที่อ้างสิทธิ์ ตามที่ใช้ในที่นี้ รูปเอกพจน์ “a”, “an” และ “the” รวมถึงการอ้างอิงพหูพจน์ เว้นแต่บริบทจะระบุเป็นอย่างอื่นอย่างชัดเจน
คำอธิบายสั้น ๆ ของภาพวาด
เพื่อทำความเข้าใจการประดิษฐ์และดูว่าอาจดำเนินการอย่างไรในทางปฏิบัติ ตอนนี้จะมีการอธิบายรูปลักษณ์ต่างๆ โดยใช้ตัวอย่างแบบไม่จำกัดเท่านั้น โดยอ้างอิงถึงภาพวาดประกอบ ซึ่งใน:
รูปที่. 1 แสดงความเข้มข้นของโพลีฟีนอลในสารสกัดจากน้ำมารูลา
มะเดื่อ 2เอ-ดี แสดงโครมาโตแกรม HPLC ที่ 270 (สีเขียว) และ 330 (สีน้ำเงิน) นาโนเมตร ที่ได้รับในเมทานอลของสารสกัด I (รูปที่. 2A) แยก II (รูปที่. 2B), แยก III (รูปที่. 2ค) และน้ำมารูล่า (รูปที่. 2D). จุดสูงสุดที่สอดคล้องกับแทนนิน (T) และกรดฟีนอลิก (PA) จะถูกระบุเป็นตัวเลข
มะเดื่อ 3A และ 3B แสดงความสามารถในการกำจัดอนุมูลอิสระของสารสกัดจากน้ำมะรุมที่ 1 ไมโครลิตร/มล. (รูปที่. 3A) และ 2 ไมโครลิตร/มล. (รูปที่. 3B).
มะเดื่อ 4A และ 4B แสดงความสามารถในการยับยั้งการเกิดออกซิเดชัน LDL ที่เหนี่ยวนำด้วยไอออนทองแดงของสารสกัดเมื่อเปรียบเทียบกับน้ำมารูลา (รูปที่ 4เอ — TBARS; รูปที่. 4B—ลิพิดเปอร์ออกซิเดส)
มะเดื่อ 5A และ 5B แสดงความสามารถในการยับยั้งการเกิดออกซิเดชัน LDL ที่เกิดจากไอออนทองแดงของสารสกัดเมื่อเปรียบเทียบกับน้ำมารูลา: IC50 การวิเคราะห์ (รูปที่ 5เอ — TBARS; รูปที่. 5B—ลิพิดเปอร์ออกซิเดส)
รูปที่. 6 แสดงให้เห็นถึงความสามารถในการลดความเครียดออกซิเดชั่นของแมคโครฟาจ
รูปที่. 7 แสดงผลของสารสกัดน้ำมารูลาต่อการดูดซึม LDL โดยแมคโครฟาจ
รูปที่. 8 แสดงผลของสารสกัดน้ำมารูล่าต่อการดูดซึม Ox-LDL โดยแมคโครฟาจ
รูปที่. 9 แสดงผลของสารสกัดน้ำมารูล่าต่อ HDL-mediated cholesterol efflux จากแมคโครฟาจ
รูปที่. 10 แสดงผลของสารสกัดจากน้ำมารูลาต่อการสังเคราะห์คอเลสเตอรอลในเซลล์แมคโครฟาจ
รูปที่. 11 แสดงเปอร์เซ็นต์ความเป็นพิษต่อเซลล์ที่วัดได้สำหรับแอสโตรไซต์ที่บำบัดด้วยน้ำผลไม้/สารสกัดที่มีความเข้มข้นต่างกัน 2 ชั่วโมงก่อนหรือควบคู่กับ H22 นอกจากนี้ (น้ำคั้น A−marula, น้ำผลไม้ B−สกัด I, น้ำผลไม้ C−สกัด II+สารสกัด III) ผลลัพธ์คือค่าเฉลี่ย± SD ของการทดลองที่ดำเนินการใน tetraplicates
รูปที่. 12 แสดงเปอร์เซ็นต์ของความเป็นพิษต่อเซลล์ที่วัดได้สำหรับแอสโตรไซต์ที่บ่มด้วยสารสกัด I (B) หลายความเข้มข้นเป็นเวลา 2 ชั่วโมงหรือ 6 ชั่วโมงก่อนการดูถูกออกซิเดชัน
รูปที่. 13 แสดงเปอร์เซ็นต์ของความเป็นพิษต่อเซลล์ที่วัดได้สำหรับแอสโตรไซต์ที่บ่มด้วยน้ำมารูลา (A) สองความเข้มข้นและสารสกัด I (B) เป็นเวลา 2 ชั่วโมงหรือ 6 ชั่วโมงก่อนการดูถูกออกซิเดชัน ผลลัพธ์คือค่าเฉลี่ย± SD ของการทดลองที่ดำเนินการใน tetraplicates
มะเดื่อ 14A-B แสดงผลการต้านอนุมูลอิสระของน้ำมารูลาในหลอดทดลอง (รูปที่ 14A— การก่อตัวของลิพิดเปอร์ออกไซด์; รูปที่. 14B—การทดสอบ FRAP)
คำอธิบายโดยละเอียดของการประดิษฐ์
รูปลักษณ์และลักษณะต่างๆ ของการประดิษฐ์นี้ตามที่อธิบายไว้ข้างต้นและตามที่อ้างสิทธิ์ในส่วนการอ้างสิทธิ์ด้านล่าง พบการสนับสนุนการทดลองในตัวอย่างต่อไปนี้
1. การทำให้แห้งของน้ำ Marula
ผลมารูลาถูกเก็บจากพื้นดินภายใน 10 วันนับจากเวลาที่ผลร่วงหล่นจากต้น และถูกบีบด้วยเครื่องอัดไฮดรอลิกที่มีแรงดันต่ำกว่า 35 บาร์ (เครื่องคั้นมะกอก Enorossi รุ่น 250) น้ำผลไม้ถูกรวบรวมและเก็บไว้แช่แข็งที่ −20° C เป็นระยะเวลาต่างกันถึง 3 ปี ทันทีก่อนที่จะอบแห้ง น้ำผลไม้จะถูกละลายน้ำแข็งและเจาะรูบนถาดอะลูมิเนียมฟอยล์ เพื่อสร้างชั้นที่สม่ำเสมอ หนา 0.7 ซม. ถาดที่มีน้ำผลไม้ถูกวางไว้ในเตาอบสุญญากาศ (Tuttnauer, ตู้อบฆ่าเชื้อแบบแห้ง รุ่น 11-900) ตั้งไว้ที่ 57° C และ −760 มม. ปรอท เป็นระยะเวลา 3 วัน หลังจากการอบแห้ง ซึ่งมีความชื้นประมาณ 1% สารที่เป็นของแข็งจะถูกบดเพื่อให้ได้ผงซึ่งละลายได้ง่ายในน้ำ ผงถูกเก็บไว้ใน desiccator ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลาหลายเดือน
2. การเตรียมสารสกัดจาก Marula
A. สารสกัดเอทานอล (ในที่นี้เรียกว่า 'สารสกัด I')
สำหรับการเตรียมสารสกัด I นำน้ำมารูลาแห้ง 15 กรัมมาบดเป็นผง แขวนในเอทานอล 50% 50 มล. แล้ววางบนเชคเกอร์เป็นเวลา 20 นาที สารแขวนลอยถูกหมุนเหวี่ยงและส่วนลอยเหนือตะกอนถูกถ่ายโอนไปยังขวดกลม ทำซ้ำขั้นตอนนี้ด้วยเอทานอล 50% อีก 25 มล. ส่วนเหนือตะกอนทั้งสองถูกรวมเข้าด้วยกันและเอธานอลและน้ำบางส่วนถูกกำจัดออกโดยใช้เครื่องระเหยแบบหมุน สารละลายที่เป็นน้ำ 30 มล. สุดท้ายมีความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระ FRAP (เฟอร์ริกรีดิวซ์แอนติออกซิแดนต์) ที่ 1,390 มก. เทียบเท่าวิตามินซีต่อ 100 มล. (3 เท่าของความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระเมื่อเทียบกับวิตามินซี 460 มก. เทียบเท่าต่อ 100 มล. ที่วัดได้ในน้ำผลไม้ดั้งเดิม) . สารสกัด I อาจถูกสร้างใหม่ในน้ำ
B. เศษส่วนที่พร่องโพลีฟีนอล (ในที่นี้เรียกว่า 'สารสกัด II'):
สำหรับการเตรียมสารสกัด II น้ำมารูลาทั้งหมดถูกส่งผ่านผ้า 8 ชั้นและปั่นแยกเพื่อเอาเศษเนื้อเยื่อผลไม้ออก น้ำใส 200 มล. ถูกนำไปใช้กับคอลัมน์ Sepabeads 20 มล. ที่อัตราการไหล 0.4 มล./นาที รวบรวมเศษส่วน 12 มล. เศษส่วนที่มีความเข้มข้นของของแข็งที่ละลายน้ำได้ทั้งหมด (TSS) เท่ากันกับน้ำผลไม้ใส (12.9%) ถูกนำมารวมกัน ฤทธิ์ต้านออกซิเดชันของ FRAP ที่วัดได้ในส่วนนี้คือ 379 มก. เทียบเท่าวิตามินซีต่อ 100 มล. ประมาณ 83% ของค่าที่วัดได้ในน้ำใสที่ใช้กับคอลัมน์
C. เศษส่วนโพลีฟีนอล (ในที่นี้เรียกว่า 'สารสกัด III')
สำหรับการเตรียมสารสกัด III การสกัดแบบกลุ่มถูกใช้เพื่อปลดปล่อยโพลีฟีนอลออกจากเม็ดบีดที่อธิบายไว้ข้างต้น เม็ดบีดถูกถ่ายโอนไปยังขวดแก้วก้นกว้างและผสมอย่างเข้มงวดกับสารละลายเอทานอล 85% สารละลายเอทานอลถูกนำกลับมาใช้ใหม่และทำซ้ำขั้นตอนนี้จนกระทั่งสารละลายสกัดไม่มีสี สารละลายเอทานอลที่รวบรวมได้ถูกนำมารวมกัน วางในขวดกลม และระเหยให้แห้งด้วยเครื่องระเหยแบบหมุน ฟิล์มแห้งละลายในน้ำ 1 มล. ผลิตภัณฑ์ที่ได้มีกิจกรรม FRAP เทียบเท่าวิตามินซี 5,735 มก. ต่อ 100 มล. ซึ่งเป็น ˜12 เท่าของกิจกรรมที่วัดได้ในน้ำผลไม้ดั้งเดิม
เพื่อให้ได้เครื่องดื่มมารูลาเสริมโพลีฟีนอล 15 มล. ของน้ำผลไม้ที่พร่องโพลีฟีนอล (สารสกัด II) ผสมกับเศษส่วนโพลีฟีนอลที่แยกได้ (สารสกัด III); น้ำถูกเติมลงในปริมาตรสุดท้ายของเครื่องดื่มมารูล่า 25 มล. (ประกอบด้วยสารสกัดที่อธิบายไว้ในที่นี้ II และ III) ที่มีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ FRAP เทียบเท่าวิตามินซี 446 มก. ต่อ 100 มล. ซึ่ง 50% มาจากวิตามินซีและ 50% โดยโพลีฟีนอลเมื่อเปรียบเทียบกับ ˜75% และ 25% ตามลำดับ ในน้ำผลไม้ดั้งเดิม
โพลีฟีนอลทั้งหมดถูกกำหนดหาทางสเปกโตรโฟโตเมตริกโดยวิธีการของ Singleton ที่ดัดแปลงสำหรับปริมาตรขนาดเล็ก [Singleton V L, et al, Am J. Emology และการปลูกองุ่น 16:144-158, 1965]. กรดแกลลิก (GA) เป็นมาตรฐาน สารละลาย GA สต็อกถูกเตรียมในน้ำที่ความเข้มข้น 2 มิลลิโมลาร์ ใช้ปริมาตร 10, 20, 40 และ 60 ไมโครลิตรสำหรับเส้นโค้งมาตรฐาน ผลลัพธ์จะแสดงเป็นค่าเทียบเท่าของ GA (GAE) ในบางครั้ง pyrogallol แทนที่ GA เป็นมาตรฐาน
3. วิธีในหลอดทดลอง
รูปที่. 1 แสดงความเข้มข้นของโพลีฟีนอลทั้งหมดในน้ำมารูลาที่กรองแล้ว สารสกัดเอทานอลของน้ำมารูลาแห้ง (สารสกัด I) และผลิตภัณฑ์ที่ได้จากการรวมสารสกัด II และ III ที่อธิบายไว้ในที่นี้ ความเข้มข้นรวมเท่ากับ 7.15, 8.34 และ 9.35 มก. ของกรดแกลลิกเทียบเท่า (GAE)/มล. ตามลำดับ
รูปที่. 2 นำเสนอโครมาโตแกรม HPLC ของน้ำมะรุมและสารสกัดน้ำผลไม้ สารสกัดจากน้ำผลไม้แต่ละส่วนถูกล้าง (1:3) ด้วยเมทานอล 80% ที่เสริมด้วย NaF 2 มิลลิโมลาร์เพื่อสกัดสารต้านอนุมูลอิสระ สารแขวนลอยถูกหมุนเหวี่ยงและส่วนลอยเหนือตะกอนถูกกรองผ่านตัวกรอง 0.45 ไมโครเมตรก่อนการฉีด วิเคราะห์ตัวอย่าง 20 ไมโครลิตรโดยใช้ระบบ LaChrom Merck Hitachi HPLC ซึ่งประกอบด้วยปั๊ม L7100, เตาอบแบบคอลัมน์ L7350 (ตั้งค่าที่ 28° C), เครื่องผสมสารขจัดแก๊ส L-7614 และหัวฉีดด้วยมือ Rheodyne ควบคู่กับเครื่องตรวจจับความยาวหลายคลื่น (Jasco MD- 2010 Plus), อินเทอร์เฟซ (Jasco LC-Net II/ADC) และซอฟต์แวร์ทางวิทยาศาสตร์ (EZChrom Elite Client/Server เวอร์ชัน 3.1.6 บิลด์ 3.1.6.2433) คอลัมน์ Purospher®Star RP-18 แบบปิดท้าย (คาร์ทริดจ์ LichroCART® 250×4 มม. ขนาดอนุภาค 5 μm) พร้อมคอลัมน์ป้องกัน Lichrospher®100 RP-18 แบบปิดปลาย (คาร์ทริดจ์ LichroCART® 4×4 มม. ขนาดอนุภาค 5 μm ) ถูกใช้.
ปลายคอลัมน์เชื่อมต่อกับตัวเก็บเศษส่วน (Pharmacia Fine Chemicals, FRAC-100) เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย (A) กรดฟอสฟอริก (0.1%), pH 2.4 และ (B) เมทานอล; เกรเดียนต์ของสารละลายถูกกำหนดให้เป็นเมทานอล 0 ถึง 100% ใน 30 นาที อัตราการไหลคือ 0.6 มล. นาที−1.
ความเข้มข้นของวิตามินซีได้รับการประเมินจากพื้นที่ใต้จุดสูงสุดของโครมาโตแกรมที่สอดคล้องกันโดยใช้วิตามินซีเกรด HPLC (Fluka) สำหรับการสอบเทียบ เมทานอลเป็นเกรด HPLC (LiChrosolv Merck); น้ำถูกทำให้บริสุทธิ์และกรองโดยใช้ขั้นตอนที่ทราบ กรดฟอสฟอริก (ฟรุตทารมณ์) และ NaF (ซิกมา) อยู่ในระดับวิเคราะห์ได้ คลังมาตรฐานฟีนอลถูกสร้างขึ้นโดยใช้คาเทชิน กรดคลอโรเจนิก คาเฟอีน และกรดแทนนิกจากซิกมา และกรด 2-ไฮดรอกซีเบนโซอิก (ซาลิไซลิก) เควอซิทิน-3-เบต้า-กลูโคไซด์ และกรดเอลลาจิกจาก Fluka
เนื่องจากโครมาโตแกรมของ HPLC ระบุว่าสารสกัด I, II, III แต่ละชนิดมีองค์ประกอบเฉพาะสำหรับสารประกอบฟีนอล [กรดฟีนอล (PA) และแทนนิน (T)] และวิตามินซี สารสกัดทั้งสามมีความแตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญในองค์ประกอบของสารต้านอนุมูลอิสระเมื่อเปรียบเทียบกับของแท้ น้ำผลไม้.
ความสามารถในการกำจัดอนุมูลอิสระของผลิตภัณฑ์น้ำผลไม้มารูลาได้รับการวิเคราะห์โดยการทดสอบ DPPH [Malterud K M, Farbort TL, Huse ACE, Bredo Sund R. สารต้านอนุมูลอิสระและผลการกำจัดอนุมูลของอาร์ทราควิโนนและแอนโทโรน เภสัชวิทยา. 2536:47:77-85]. DPPH (1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl) เป็นสารสร้างอนุมูลอิสระที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในการตรวจสอบความสามารถในการกำจัดอนุมูลอิสระ (ความสามารถของสารประกอบในการบริจาคอิเล็กตรอน) ของสารต้านอนุมูลอิสระต่างๆ อนุมูล DPPH มีสีม่วงเข้มเนื่องจากอิเลคตรอนบกพร่อง และการไล่อนุมูลสามารถติดตามได้ทางสเปกโตรโฟโตเมตริกโดยการสูญเสียการดูดกลืนแสงที่ 517 นาโนเมตร เนื่องจากมีการสร้างรูปแบบที่ไม่ใช่อนุมูลสีเหลืองอ่อน
ส่วนลงตัวของผลิตภัณฑ์น้ำผลไม้ Marula (1.0 μl) ผสมกับ DPPH/L 0.1 มิลลิโมลในเอทานอล 1 มล. และตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงของความหนาแน่นของแสงที่ 517 นาโนเมตรอย่างต่อเนื่อง ความสามารถของสารสกัดจากน้ำมารูลาในการขจัดอนุมูลอิสระเมื่อเปรียบเทียบกับความสามารถในการกำจัดอนุมูลอิสระของน้ำมารูลากรอง (มะเดื่อ 3A และ 3B).
ที่ความเข้มข้น 1.0 ไมโครลิตร/มล. น้ำมารูลาที่ผ่านการกรองทำให้ความหนาแน่นเชิงแสงลดลง 30% ที่ 517 นาโนเมตร ในขณะที่ผลิตภัณฑ์ที่ได้จากการรวมสารสกัด II และ III ที่อธิบายไว้ในที่นี้ (เช่น น้ำมารูลาอุดมด้วยโพลีฟีนอลในระดับสูง) ทำให้ความหนาแน่นของแสงลดลง 21% ที่ 517 นาโนเมตร ความสามารถในการกำจัดอนุมูลที่โดดเด่นที่สุดถูกแสดงโดยสารสกัด I ซึ่งเหนี่ยวนำให้ความหนาแน่นของแสงลดลง 54% ที่ 517 นาโนเมตร (รูปที่. 3A). ที่ความเข้มข้นสูงขึ้น (2.0 ไมโครลิตร/มล.) น้ำมารูลาที่ผ่านการกรองและหมุนเหวี่ยงทำให้ความหนาแน่นเชิงแสงลดลง 60% ที่ 517 นาโนเมตร ในทำนองเดียวกัน ผลิตภัณฑ์ที่ได้จากการรวมสารสกัดที่อธิบายไว้ในที่นี้ II และ III เหนี่ยวนำให้ความหนาแน่นเชิงแสงลดลง 43% ที่ 517 นาโนเมตร และความสามารถในการกำจัดอนุมูลที่โดดเด่นที่สุดได้รับการจัดแสดงอีกครั้งโดยสารสกัด I ซึ่งเหนี่ยวนำให้ลดลง 89% ในออปติคัล ความหนาแน่นที่ 517 นาโนเมตร (รูปที่. 3B).
LDL ถูกแยกได้จากพลาสมาจากอาสาสมัครที่มีภาวะไขมันในเลือดปกติที่มีสุขภาพดี โดยการหมุนเหวี่ยงพิเศษแบบเกรเดียนต์ความหนาแน่นแบบไม่ต่อเนื่อง [Aviram, M. (1983) การแยกไลโปโปรตีนในพลาสมาโดยการหมุนเหวี่ยงแบบเกรเดียนต์ความหนาแน่นสูงแบบไม่ต่อเนื่องในผู้ป่วยไขมันในเลือดสูง ชีวเคมี แพทย์ 30, 111-118]. LDL ถูกล้างที่ d=1.063 กรัม/มล., ไดอะไลซ์เทียบกับ NaCl 150 มิลลิโมล/ลิตร, 1 มิลลิโมล/ลิตร Na2EDTA (pH 7.4) ที่ 4° C จากนั้น LDL ถูกฆ่าเชื้อโดยการกรอง (0.45 μM) เก็บไว้ภายใต้ไนโตรเจนในที่มืดที่ 4° C และใช้ภายใน 2 สัปดาห์ ความเข้มข้นของโปรตีน LDL ถูกกำหนดด้วยโฟลินฟีนอลรีเอเจนต์ ก่อนการเกิดออกซิเดชัน LDL ถูกไดอะไลซ์กับสารละลายน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (PBS) ที่ปราศจาก EDTA, pH 7.4 และที่ 4° C
LDL (โปรตีน 100 ไมโครกรัม/มล.) ถูกบ่มเป็นเวลาสิบนาทีที่อุณหภูมิห้องโดยเพิ่มความเข้มข้นของสารสกัดจากน้ำมารูลา จากนั้น CuSO 5 ไมโครโมล/ลิตร4 ถูกเติมและหลอดถูกบ่มเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่ 37° C เมื่อสิ้นสุดการบ่ม ขอบเขตของการเกิดออกซิเดชันของ LDL ถูกกำหนดโดยการวัดปริมาณที่สร้างขึ้นของสารที่ทำปฏิกิริยากรดไทโอบาร์บิทูริก (TBARS) และของลิพิดเปอร์ออกไซด์ [Aviram M, Vaya J. เครื่องหมายสำหรับออกซิเดชันไลโปโปรตีนความหนาแน่นต่ำ วิธีการ เอนไซม์. 2544; 335:244-56; และ Buege J. A. , Aust S. D. Microsomal lipid peroxidation วิธีการ เอนไซม์. 52: 302-310 (2521)]. การทดสอบลิพิดเปอร์ออกไซด์ (PD) วิเคราะห์การก่อตัวของลิพิดเปอร์ออกไซด์ด้วยความสามารถในการเปลี่ยนไอโอไดด์เป็นไอโอดีนหลังจากการบ่มเป็นเวลา 18 ชั่วโมงที่ 25° C ตามที่วัดด้วยสเปกโตรโฟโตเมตริกที่ 365 นาโนเมตร [G. เจอร์เก้นส์. การทดสอบสเปกโตรโฟโตเมตริกสำหรับลิพิดเปอร์ออกไซด์ในไลโปโปรตีนในซีรั่มโดยใช้รีเอเจนต์ที่มีจำหน่ายทั่วไป J. ลิปิดเรส 30:627-630, 2529].
วัดการเกิดออกซิเดชันของ LDL เป็น TBARS (รูปที่. 4A) หรือในรูปของลิพิดเปอร์ออกไซด์ (รูปที่. 4B). การเพิ่มความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้นของสารสกัดน้ำมารูลายับยั้งการเกิดออกซิเดชัน LDL ของทองแดงที่เหนี่ยวนำด้วยไอออนในลักษณะที่ขึ้นกับปริมาณยา ไอซี50 ค่า (การยับยั้งการเกิดออกซิเดชันของ LDL 50%) สำหรับน้ำมะรุมที่ผ่านการกรองและปั่นแยกคือ 0.80 ไมโครลิตร/มล. สำหรับ TBARS (รูปที่. 5A) และ 0.65 ไมโครลิตร/มล. สำหรับลิพิดเปอร์ออกไซด์ (รูปที่. 5B) รูปแบบ. ได้รับผลลัพธ์ที่ค่อนข้างต่ำกว่าสำหรับสารสกัด I (0.50 ไมโครลิตร/มล. สำหรับทั้ง TBARS และการก่อตัวของลิพิดเปอร์ออกไซด์) ในทางตรงกันข้าม ไอซี50 ค่าสำหรับผลิตภัณฑ์ที่ได้จากการรวมสารสกัดที่อธิบายไว้ในที่นี้ II และ III มีค่าสูงสุด (1.35 และ 1.50 สำหรับ TBARS และสำหรับ lipid peroxides ตามลำดับ)
แมคโครฟาจ J-774A.1 ถูกบ่มล่วงหน้าด้วย 10 และ 30 ไมโครกรัม GAE เทียบเท่า/มล. ของผลิตภัณฑ์น้ำผลไม้มารูลา จากนั้นจึงวิเคราะห์เซลล์เพื่อหาสารก่อมะเร็งในหลอดเลือด ซึ่งได้รับการประเมินเป็นสถานะออกซิเดชันของแมคโครฟาจ และการสังเคราะห์คอเลสเตอรอล
สถานะออกซิเดชันของมาโครฟาจถูกกำหนดโดยการทดสอบโฟลว์ไซโตเมตริกด้วยไดคลอโรฟลูออเรสซิน-ไดอะซีเตต (DCFH-DA) DCFH-DA เป็นสีย้อมไม่มีขั้วที่กระจายเข้าสู่เซลล์ ในเซลล์จะถูกไฮโดรไลซ์เป็นอนุพันธ์ที่ไม่ใช่ฟลูออเรสเซนต์ 2′,7′-ไดคลอโรฟลูออเรสซิน (DCFH) ซึ่งมีขั้วและติดอยู่ภายในเซลล์ ภายใต้ความเครียดออกซิเดชัน DCFH จะถูกออกซิไดซ์เป็น DCF ซึ่งเป็นสารประกอบเรืองแสง J774 ก.1 (2×106) มาโครฟาจถูกบ่มด้วย 2.5×10−5 mol/L DCFH-DA เป็นเวลา 30 นาทีที่ 37° C ปฏิกิริยาหยุดลงโดยการล้างด้วย PBS ที่ 4° C การเรืองแสงของเซลล์ถูกกำหนดด้วยเครื่องโฟลว์ไซโตเมทรี (FACS-SCAN, Becton Dickinson, San Jose, Calif., USA ). ทำการวัดที่ 510 ถึง 540 นาโนเมตรหลังจากกระตุ้นเซลล์ที่ 488 นาโนเมตรด้วยเลเซอร์อาร์กอนไอออน
การบ่มเชื้อ J-774 A.1 macrophages เป็นเวลา 18 ชั่วโมงที่ 37° C ด้วยสารสกัด I และน้ำมารูลากรอง ช่วยลดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันในเซลล์ที่วัดโดยการทดสอบ DCFH ได้ 6% และ 7% ตามลำดับ ผลิตภัณฑ์ที่ได้จากการรวมสารสกัดที่อธิบายไว้ในที่นี้ II และ III ไม่มีผลต่อสถานะความเครียดออกซิเดชันของมาโครฟาจ (รูปที่. 6).
LDL (1 มก./มล.) ถูกบ่มเป็นเวลา 18 ชั่วโมงที่ 37°ซ ด้วย CuSO ที่เตรียมขึ้นใหม่ 5 ไมโครโมล/ลิตร4. ออกซิเดชันถูกยุติโดยการแช่เย็นที่ 4° C ขอบเขตของการเกิดออกซิเดชันของ LDL ถูกกำหนดโดยการทดสอบ TBARS
LDL และ Ox-LDL ถูกผันเข้ากับฟลูออโรไอโซไธโอไซยาเนต (FITC) สำหรับการศึกษาการดูดซึมของเซลล์ ไลโปโปรตีน (โปรตีน 2.5 มก./มล.) ถูกไดอะไลซ์ค้างคืนที่ 4° C เทียบกับการเปลี่ยนแปลงหลายอย่างของบัฟเฟอร์บอเรตที่มีบอเรต 0.1 โมลาร์, โซเดียมเตตระบอเรต 25 มิลลิโมลาร์, NaCl 75 มิลลิโมลาร์, pH 8.6 ก่อนการผันคำกริยา (1 ชั่วโมง) ค่า pH ของบัฟเฟอร์การฟอกเลือดจะเปลี่ยนเป็น 9.4 Fluorescein isothiocyanate (FITC; Sigma-Aldrich) ถูกละลายในไดเมทิลฟอร์มาไมด์ (Merck) และเติมหยดลงในสารละลายไลโปโปรตีนเพื่อให้ได้ความเข้มข้นสุดท้ายที่ 0.2 มก./มล. จากนั้นบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องโดยกวน ไลโปโปรตีนที่ควบกับ FITC ถูกแยกออกจาก FITC ที่ไม่ถูกประกบโดยโครมาโตกราฟีแบบแยกตามขนาดเหนือคอลัมน์ PD-10 (เทคโนโลยีชีวภาพ Amersham-Pharmacia) ที่ชะด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์ 10 มิลลิโมลาร์ pH 8.0 ไลโปโปรตีนที่ติดฉลาก FITC (2 มก./มล.) ถูกนำมาใช้ทันทีในการศึกษาการดูดซึม
J774 A.1 macrophages ถูกบ่มที่ 37° C เป็นเวลา 3 ชั่วโมงด้วย LDL ที่ควบกับ FITC หรือ Ox-LDL ที่ความเข้มข้นสุดท้ายที่ 25 ไมโครกรัมของโปรตีน/มล. การดูดซึมของไลโปโปรตีนถูกกำหนดโดยโฟลว์ไซโตเมตรี การวัดการเรืองแสงของเซลล์ที่กำหนดโดย FACS ทำได้ที่ 510 นาโนเมตรถึง 540 นาโนเมตรหลังจากกระตุ้นเซลล์ที่ 488 นาโนเมตรด้วยเลเซอร์ไอออนอาร์กอน การเรืองแสงของเซลล์ถูกวัดในรูปของค่าเฉลี่ยความเข้มของการเรืองแสง (MFI)
การบ่ม J-774 A.1 macrophages เป็นเวลา 18 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37° C ด้วยผลิตภัณฑ์จากน้ำ marula (10 μg/ml GAE) ไม่มีผลต่อการดูดซึม LDL โดย macrophages ที่ความเข้มข้นที่สูงขึ้นของ GAE 30 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร เฉพาะผลิตภัณฑ์ที่ประกอบรวมด้วยสารสกัด II และ III ที่อธิบายไว้ในที่นี้เท่านั้นที่ลดการดูดซึม LDL ของมาโครฟาจลง 9% (รูปที่. 7). การบ่ม J-774 A.1 macrophages เป็นเวลา 18 ชั่วโมงที่ 37° C ด้วยสารสกัด I ซึ่งเป็นผลิตภัณฑ์ที่ได้จากการรวมสารสกัด II และ III ที่อธิบายไว้ในที่นี้และน้ำมะรุมกรอง ที่ 10 μg/ml GAE หรือ 30 μg/ml GAE ลดการดูดซึมมาโครฟาจของ Ox-LDL ลง 12% และ 7% (สารสกัด I) 27% (น้ำมารูล่าที่มีปริมาณโพลีฟีนอลสูง) และ 8% และ 6% (น้ำมารูล่ากรอง) ตามลำดับ (รูปที่. 8).
J774 A.1 มาโครฟาจถูกบ่มด้วย [3โคเลสเตอรอลที่ติดฉลาก H] (2 μCi/mL) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 37° C ตามด้วยการล้างเซลล์ใน PBS เย็นจัด (×3) และบ่มต่อไปในกรณีที่ไม่มีหรือมีโปรตีน HDL 100 μg/ml เป็นเวลา 3 ครั้ง ชั่วโมงที่ 37° C เซลลูลาร์และสื่อ [3ฉลาก H] ถูกวัดปริมาณและการไหลของคอเลสเตอรอลที่มี HDL เป็นสื่อกลางคำนวณเป็นอัตราส่วนของ [3H]-ฉลากในสื่อ/([3H]-ฉลากในสื่อ+[3H]-ป้ายกำกับในเซลล์) การบ่ม J-774 A.1 macrophages เป็นเวลา 18 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37° C ด้วยน้ำมะรุมกรอง (10 μg/ml GAE) เพิ่มการไหลออกของคอเลสเตอรอลจาก macrophages ไปยัง HDL ถึง ˜10% อย่างไรก็ตาม ผลิตภัณฑ์น้ำผลไม้มารูลาอื่นๆ ทั้งหมดไม่ส่งผลต่อการไหลออกของคอเลสเตอรอลที่มี HDL เป็นสื่อกลางที่ความเข้มข้นใดๆ ที่ใช้ (รูปที่. 9).
J774 A.1 มาโครฟาจถูกบ่มด้วย [3H] อะซีเตต ตามด้วยการสกัดไขมันในเซลล์ด้วยเฮกเซน:ไอโซโพรพานอล (3:2, v/v) และการแยกด้วยโครมาโตกราฟีแบบชั้นบาง (TLC) บนแผ่นซิลิกาเจล มองเห็นจุดของโคเลสเตอรอลที่ไม่ผ่านการเอสเทอไรด์ด้วยไอไอโอดีน ขูดลงในขวดแก้วที่แวววาว และนับกัมมันตภาพรังสี การบ่ม J-774 A.1 macrophages เป็นเวลา 18 ชั่วโมงที่ 37° C ด้วยสารสกัด I ซึ่งเป็นผลิตภัณฑ์ที่ได้จากการรวมสารสกัด II และ III ที่อธิบายไว้ในที่นี้และน้ำมะรุมหลังจากการกรอง ทั้งหมดที่ความเข้มข้น 30 μg/ml GAE ลดลง การสังเคราะห์โคเลสเตอรอลในแมคโครฟาจ 18%, 7% และ 8% ตามลำดับ (รูปที่. 10).
หนู Wistar แรกเกิดได้รับมาจาก Harlan Laboratories เพาะเลี้ยงแอสโตรไซต์ของหนูปฐมภูมิที่เตรียมจากเยื่อหุ้มสมองของหนูแรกเกิดอายุ 1-2 วัน Wistar ขั้นตอนนี้ได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการการดูแลและการใช้สัตว์ของสถาบัน แอสโทรไซต์ถูกชุบในจาน 24 หลุมที่ 100,000 หรือ 80,000 เซลล์/0.5 มล./หลุม ตามลำดับ การทดลองทั้งหมดดำเนินการโดยมีซีรั่ม 2% (FCS) สื่อดั้งเดิมของเซลล์ถูกดูดออกและอาหารสดถูกเติมเข้าไปในเซลล์ การเจือจางของ H22 และน้ำมารูล่าในอาหารเลี้ยงเชื้อนั้นทำขึ้นใหม่จากสารละลายสต็อกก่อนการทดลองแต่ละครั้งและถูกนำมาใช้ทันที การรักษาแต่ละครั้งดำเนินการใน tetraplicates ความเข้มข้นสุดท้ายของ H22 คือ 200 μM
การทดสอบการเพาะเลี้ยงเซลล์ประสาท
การหาค่าความมีชีวิตของเซลล์—ความมีชีวิตของเซลล์ถูกกำหนดโดยใช้ชุดทดสอบสีเชิงพาณิชย์ (จัดทำโดย Roche) ตามการวัดกิจกรรมของ Lactate Dehydrogenase (LDH) ที่ปล่อยออกมาจากไซโตซอลของเซลล์ที่เสียหายไปยังส่วนเหนือตะกอน
ผลการป้องกันของสารสกัด—เพื่อกำหนดสภาวะที่เหมาะสม (ในแง่ของเวลาและปริมาณ) เพื่อให้น้ำผลไม้แสดงฤทธิ์ในการป้องกันสมมุติฐาน เซลล์ได้รับการปรับสภาพล่วงหน้าด้วยปริมาณที่แตกต่างกันของผลิตภัณฑ์น้ำผลไม้แต่ละชนิดสำหรับช่วงเวลาที่ต่างกัน และผลิตภัณฑ์ป้องกันผลต่อความเครียดจากอนุมูลอิสระ สร้างโดย H22 ได้รับการประเมิน น้ำผลไม้ (ที่การเจือจาง 1:125, 1:500, 1:800 และ 1:4000) ถูกเติมร่วมกับ H22 หรือบ่มล่วงหน้าเป็นเวลาสองชั่วโมงกับเซลล์ก่อนที่จะเติม ความเป็นพิษถูกตรวจสอบ 20 ชั่วโมงต่อมา รูปที่. 11 แสดงให้เห็นว่าที่ความเข้มข้นทั้งหมดที่ทดสอบและสำหรับผลิตภัณฑ์น้ำผลไม้ทั้งหมด การเติมน้ำผลไม้ร่วมกับ H22 ไม่ได้ป้องกัน อย่างไรก็ตาม preincubation เป็นเวลา 2 ชั่วโมงกับเซลล์ก่อนหน้า H22 นอกจากนี้มีผลในการป้องกันน้ำผลไม้ทั้งหมด ด้วยสารสกัด I แสดงให้เห็นถึงฤทธิ์ในการป้องกันที่มีประสิทธิภาพสูงสุดเมื่อใช้ที่ความเข้มข้นต่ำ (1:4000)
การทดลองกับสารสกัดมารูลาที่ความเข้มข้นต่ำ (การเจือจาง 1:1000-1:8000)—การทดลองต่อไปนี้ดำเนินการที่ความเข้มข้นต่ำของผลิตภัณฑ์ (การเจือจาง 1:1000-1:8000) ในปริมาณวิตามิน ˜55-450 ไมโครกรัม/100 มล. C เทียบเท่า
ทดสอบผลกระทบของระยะเวลาการบ่มล่วงหน้า (2 ชม. เทียบกับ 6 ชม.) ของเซลล์ด้วยผลิตภัณฑ์น้ำผลไม้และความเข้มข้นของผลิตภัณฑ์ (1:1000-1:8000) รูปที่. 12 แสดงให้เห็นว่าในขณะที่ 2 ชั่วโมงของการบ่มด้วยสารสกัด I ให้การป้องกันเพียง ˜20% ที่ความเข้มข้นที่ทดสอบทั้งหมด การบ่มล่วงหน้า 6 ชั่วโมงส่งผลให้มีการป้องกันมากกว่า 80%
ในการทดลองอื่น ผลของเวลาในการฟักตัวและความเข้มข้นถูกทดสอบด้วยการเจือจาง 2 ครั้ง (1:1000 หรือ 1:4000) ของน้ำผลไม้แต่ละชนิด น้ำมารูลากรองและสารสกัด I เป็นเวลา 2 หรือ 6 ชั่วโมงก่อนการเติม H22 (รูปที่. 13). Extract I พบว่ามีประสิทธิภาพสูงสุด (การป้องกัน 70%) น้ำมารูล่าที่ผ่านการกรองยังแสดงกิจกรรมการป้องกันที่สำคัญ (การป้องกัน 40%)
4. พิธีสารทางคลินิก
อาสาสมัครสุขภาพดี 10 คน (ตารางที่ 1) ไม่สูบบุหรี่ และไม่มีความผิดปกติของการเผาผลาญ มีระดับคอเลสเตอรอลในพลาสมาต่ำกว่า 200 มก./ดล. และไม่ได้รับการรักษาด้วยยา ได้รับคัดเลือกเข้าร่วมการศึกษา ทุกวิชาลงนามในแบบฟอร์มยินยอมก่อนเข้าศึกษา โปรโตคอลการศึกษาได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการ Rambam Helsinki (หมายเลข 2452)
ตารางที่ 1
การจำแนกประเภทของอาสาสมัครศึกษา
ชื่อ อายุ เพศ ยา สูบบุหรี่
เอสจี 21 ไม่มี ไม่
เอสวาย 21 ไม่มี ไม่
รองประธาน 43 ไม่มี ไม่
เดอะ 21 ไม่มี ไม่
อี 22 ไม่มี ไม่
บีทีเค 27 ไม่มี ไม่
ของ 57 ไม่มี ไม่
24 ไม่มี ไม่
ของฉัน 40 ไม่มี ไม่
จีจี 37 ไม่มี ไม่
ผู้เข้าร่วมทั้งหมดดื่มน้ำผลไม้พาสเจอร์ไรส์ 200 มล. ต่อวันพร้อมอาหารมื้อหลัก เป็นระยะเวลา 3 สัปดาห์ ทุกวิชาที่เรียนก็ดำเนินไปตามวิถีชีวิตที่เป็นนิสัย ความดันโลหิตถูกวัดที่เวลาศูนย์ (ก่อนเข้ารับการศึกษา) หลังจาก 3 สัปดาห์ และเมื่อสิ้นสุดการศึกษา (หลังจาก 4 สัปดาห์ของการหยุดพัก) เก็บตัวอย่างเลือด (25 มล.) สำหรับการวิเคราะห์ที่เวลาศูนย์ (ค่าพื้นฐาน—ก่อนเข้าสู่การศึกษา) หลังจากดื่มน้ำผลไม้มารูล่า 3 สัปดาห์ และ 4 สัปดาห์หลังจากสิ้นสุดการบริโภคน้ำผลไม้ (ชะล้าง)
ตัวอย่างซีรั่มในเลือดทั้งหมดถูกแช่แข็งที่ −80° C จนกระทั่งวิเคราะห์ การวิเคราะห์ทางชีวเคมีในซีรั่มดำเนินการโดยใช้ชุดตรวจวินิจฉัยที่มีจำหน่ายทั่วไป และรวมการวัดระดับน้ำตาล แคลเซียม การทำงานของไต (BUN ครีเอตินิน และอิเล็กโทรไลต์เนเทรียมและคาเลียม) การทำงานของตับ (CK, AST และโทบิลิรูบินทั้งหมด) โคเลสเตอรอลทั้งหมด HDL — คอเลสเตอรอล, คอเลสเตอรอล LDL และไตรกลีเซอไรด์ทั้งหมด วัดระดับกรดยูริก (เป็นสารต้านอนุมูลอิสระที่เป็นไปได้) ในซีรั่มโดยใช้ชุดเครื่องมือที่มีจำหน่ายทั่วไป
การวิเคราะห์ความเครียดออกซิเดทีฟของตัวอย่างซีรั่ม
Ferric-Reducing Antioxidant Power (FRAP): รีเอเจนต์การทำงาน FRAP เตรียมโดยการผสม acetate buffer 25 มล. สารละลาย 2,4,6-Tripyridyl-s-Triazine (TPTZ) 2.5 มล. และ FeCL 2.5 มล.3*6H2O วิธีการแก้ปัญหา สารละลายที่เป็นน้ำขนาด 1 mM FeSO4*7H2O ที่ความเข้มข้น 5, 10, 20, 30, 40, 50 และ 100 mM ถูกนำมาใช้สำหรับเส้นโค้งการสอบเทียบมาตรฐาน รีเอเจนต์ FRAP (เตรียมใหม่) ถูกทำให้ร้อนถึง 37° C และอ่านค่าเปล่าของรีเอเจนต์ที่ 593 นาโนเมตร สเปกโตรโฟโตเมตริก ตัวอย่างเซรั่ม (30 ไมโครลิตร) ผสมกับน้ำ 90 ไมโครลิตร จากนั้น 900 ไมโครลิตรของรีเอเจนต์ FRAP ถูกเติมและผสมอย่างรวดเร็ว ค่าการดูดซับถูกอ่านหลังจาก 0.5 วินาทีและทุกๆ 15 วินาทีในช่วง 4 นาที การเปลี่ยนแปลงการดูดกลืนแสง (ก593 นาโนเมตร) ระหว่างความหนาแน่นเชิงแสงขั้นสุดท้ายและขั้นเริ่มต้นถูกคำนวณสำหรับแต่ละตัวอย่าง และจากนั้นจึงเกี่ยวข้องกับ Fe+2 ความเข้มข้นในเส้นโค้งมาตรฐาน (ทดสอบแบบขนาน)
Serum Lipid Peroxidation
เซรั่มถูกเจือจาง 1:4 (v:v) ด้วยน้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (PBS) แล้วบ่มในที่ที่ไม่มีหรือมีอยู่ 100 มิลลิโมล/ลิตรของเครื่องกำเนิดอนุมูลอิสระ 2,2′-azobis-2-amidinopropane ไฮโดรคลอไรด์ (AAPH) เป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37° C การหา lipid peroxidation ในซีรั่มถูกกำหนดโดยการวัดปริมาณที่สร้างขึ้นของสารที่ทำปฏิกิริยากรดไทโอบาร์บิทูริก (TBARS) และของ lipid peroxides โดยใช้วิธีสเปกโตรโฟโตเมตริก การทดสอบลิพิดเปอร์ออกไซด์ (PD) จะวิเคราะห์การก่อตัวของลิพิดเปอร์ออกไซด์ด้วยความสามารถในการเปลี่ยนไอโอไดด์เป็นไอโอดีนหลังจากการบ่มเป็นเวลา 18 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 25° C โดยวัดด้วยสเปกโตรโฟโตเมตริกที่ 365 นาโนเมตร
จากผลการศึกษาระบุว่า การบริโภคไม่มีผลอย่างมีนัยสำคัญต่อความดันโลหิต ระดับกลูโคสและแคลเซียมในซีรั่มไม่มีการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญหลังการบริโภค และการทดสอบการทำงานของไตไม่ได้รับผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญจากการบริโภคอย่างต่อเนื่อง ในทำนองเดียวกัน การบริโภคส่งผลให้ระดับอิเล็กโทรไลต์ในเลือดและการทำงานของตับไม่เปลี่ยนแปลงอย่างมาก อย่างไรก็ตาม ระดับไตรกลีเซอไรด์ในซีรั่มลดลง 7% หลังการบริโภค โดยผลจะคงอยู่หลังจากระยะเวลาการชะล้าง 4 สัปดาห์ (ตารางที่ 2)
ตารางที่ 2
ผลของการบริโภคน้ำผลไม้ต่อความเข้มข้นของไตรกลีเซอไรด์ในเลือด
ไตรกลีเซอไรด์
หัวเรื่อง 0 3 สัปดาห์ ชะล้าง
1 79 79 71
2 74 93 92
3 153 163 140
4 48 40 47
5 66 71 82
6 188 121 119
7 147 147 158
8 56 61 87
9 109 85 101
10 196 180 77
เฉลี่ย 112 104 97
เอส.ดี 55 47 33
การบริโภคเป็นระยะเวลา 3 สัปดาห์อย่างมีนัยสำคัญ (p<0.02) ลดความเข้มข้นของคอเลสเตอรอลรวมในซีรั่มลง 8% (ตารางที่ 3)
ตารางที่ 3
ผลของการบริโภคต่อความเข้มข้นของคอเลสเตอรอลในเลือด
โคเลสเตอรอลทั้งหมด LDL-โคเลสเตอรอล HDL-โคเลสเตอรอล
หัวเรื่อง 0 3 สัปดาห์ ชะล้าง 0 3 สัปดาห์ ชะล้าง 0 3 สัปดาห์ ชะล้าง
1 250 245 235 144 119.7 115.91 90.6 109.5 104.89
2 152 141 153 93 67.2 81.95 44.2 55.2 52.65
3 237 182 243 166 112.8 171.71 40.1 36.6 43.29
4 151 143 166 86 59.6 86.12 54.9 75.4 70.48
5 169 148 139 95 72.4 73.22 61.2 61.4 58.95
6 152 142 147 72 69.3 73.82 42 48.5 49.38
7 177 142 179 104 64.1 108.03 43.2 39.3 39.37
8 171 181 210 104 104.9 129.82 56 63.9 62.78
9 256 221 221 175 153.6 149.09 59.5 51.71
10 194 209 215 113 131.1 160.7 41.7 41.9 38.9
เฉลี่ย 191 175.4 190.8 115 95.47 115.037 53.3 59.08 57.24
เอส.ดี 41.6 38.5 38.4846 34.7 33.19 36.6718 15.4 22.79 19.5595
ค่าพี 0.02 0.01 0.03
การลดลงนี้อาจเกี่ยวข้องกับการลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (p<0.01) ในระดับ LDL-คอเลสเตอรอล 17% อย่างไรก็ตาม การลดลงเหล่านี้ไม่คงอยู่หลังจากช่วงการชะล้าง เนื่องจากระดับของคอเลสเตอรอลรวม รวมทั้งของคอเลสเตอรอลชนิด LDL กลับสู่ระดับพื้นฐานหลังจากช่วงการชะล้างเป็นเวลา 4 สัปดาห์ ซึ่งในระหว่างนั้นผู้ทดลองไม่ได้กินน้ำผลไม้ ระดับ HDL-โคเลสเตอรอลในเลือดเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (p<0.03) 10% หลังจากการบริโภคน้ำผลไม้และการลดลงนี้ยังคงอยู่แม้ว่าจะอยู่ในระดับที่ต่ำกว่า (เพียง 7%) หลังจากช่วงชะล้าง
ตารางที่ 4 แสดงผลต่อความเครียดออกซิเดชันในซีรั่ม ตัวอย่างซีรั่มถูกออกซิเดชั่นที่เกิดจาก AAPH การสร้างลิพิดเปอร์ออกไซด์ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (p<0.03) ในตัวอย่างซีรั่มที่ได้รับหลังการบริโภคเป็นเวลา 3 สัปดาห์ อย่างไรก็ตาม ผลกระทบนี้ไม่คงอยู่หลังจากช่วงเวลาการชะล้าง ในตัวอย่างซีรั่มที่ได้รับหลังการบริโภค “พลังในการต้านอนุมูลอิสระ” ที่วัดโดยการทดสอบ FRAP นั้นเพิ่มขึ้นในช่วงระยะเวลาการบริโภค และยิ่งเพิ่มขึ้นไปอีก จนสูงถึง 8% หลังช่วงการชะล้าง การลดลงของความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันในซีรั่มอาจเป็นผลมาจากการลดลงของความเข้มข้นของลิพิดในซีรั่ม (สารตั้งต้นที่มีอยู่สำหรับออกซิเดชันน้อยลง เช่นเดียวกับผลของสารต้านอนุมูลอิสระที่มีศักยภาพของน้ำมารูล่า)
ตารางที่ 4
ผลต่อความเครียดออกซิเดชันในซีรั่ม
พี.ดี สภาวิชาชีพบัญชี
หัวเรื่อง 0 3 สัปดาห์ ชะล้าง 0 3 สัปดาห์ ชะล้าง
1 798 776 797 837 912 751
2 738 728 733 781 864 897
3 735 715 839 733 661 691
4 798 772 847 615 651 719
5 730 701 758 605 734 613
6 577 567 620 1091 1041 1048
7 615 626 634 767 814 933
8 681 660 659 802 850 948
9 683 711 668 653 663 767
10 696 636 615 917 842 1069
เฉลี่ย 705.10 689.20 717.00 780.10 803.20 843.60
เอส.ดี 71.13 66.49 89.81 147.42 126.37 156.62
ค่าพี 0.03 0.03
ผลของการบริโภคน้ำผลไม้พาสเจอร์ไรส์ต่อความเครียดออกซิเดชันในซีรั่มสรุปได้ใน มะเดื่อ 14A-B. ตัวอย่างซีรั่มถูกออกซิเดชั่นที่เกิดจาก AAPH การเกิดลิพิดเปอร์ออกไซด์ (รูปที่. 14ก) ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (p<0.03) ในตัวอย่างซีรัมที่ได้มาหลังจากการบริโภคน้ำผลไม้ในช่วง 3 สัปดาห์ ผลกระทบนี้ไม่คงอยู่หลังจากช่วงเวลาการชะล้าง ความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระ วัดโดยการทดสอบ FRAP (รูปที่. 14B) เพิ่มขึ้นในตัวอย่างซีรั่มที่ได้มาหลังจากการบริโภคน้ำมารูลาพาสเจอร์ไรส์ และเพิ่มขึ้นอย่างน่าประหลาดใจ เพิ่มขึ้นถึง 8% อย่างมีนัยสำคัญหลังจากช่วงชะล้าง
การเรียกร้อง (3)
ซ่อนขึ้นอยู่กับ การประดิษฐ์ที่อ้างคือ:
1. วิธีการรักษาโรคหลอดเลือดในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ประกอบด้วย:
การบริหารให้ปริมาณที่มีประสิทธิผลทางการรักษาของสารสกัดหรือองค์ประกอบทางเภสัชกรรมซึ่งประกอบรวมด้วยสารสกัด แก่สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม สารสกัดที่ถูกเตรียมโดยกระบวนการซึ่งประกอบรวมด้วย
ทำให้น้ำมารูล่าแห้งเป็นก้อนแข็งหรือกึ่งแข็ง
การสัมผัสมวลของแข็งหรือกึ่งของแข็งกับตัวทำละลายอินทรีย์เพื่อให้ได้สารแขวนลอย และ
ปั่นแยกสารแขวนลอยตามทางเลือกเพื่อแยกเฟสของเหลวที่ประกอบด้วยสารสกัดออกจากเฟสของแข็ง
2. วิธีการตาม ข้อเรียกร้อง 1ที่ซึ่งตัวทำละลายอินทรีย์คือเอทานอลหรือสารละลายที่มีน้ำซึ่งประกอบรวมด้วยเอทานอล
3. วิธีการตาม อ้างสิทธิ์ 2โดยที่เอธานอลมีอยู่ในสารละลายที่เป็นน้ำในปริมาณอย่างน้อย 50%

Featured products